A PMP22 gén mutációs analízise

1. A PMP22 gén mutációs analízise Szerzők: Reško Péter, Radvánszky János, Pálffy Roland, Témavezető: Doc. RNDr. Kádaši Lajos, PhD.

2. Öröklődő perifériás neuropátiák • Motorikus és szenzorikus zavarok • Morfológiai elváltozások • Előfordulásuk együttes gyakorisága 1:2500 • Charcot-Marie-Tooth betegség 1A altípusa (CMT1A) • nyomásos bénulásokra hajlamosító örökletes neuropátia (HNPP)

3. A betegségek tünetei • CMT1A • a végtagok lassan előrehaladó elgyengülése és atrófiája • Érzékelési zavarok a végtagokban • csökkent inreflexek és lábfej deformitások (pes cavus, kalapácsujj) • idegi impulzusok terjedési sebességének csökkenése • axonok demyelinációja és remyelinációja során keletkező hipertrófiás Schwann sejtek, ún. „onion bulbs“

4. A betegségek tünetei • HNPP • visszatérő, fájdalommentes idegi bénulások, melyek érzékelési károsodást, elgyengülést és atrófiát okoznak • idegi impulzusok terjedési sebességének csökkenése • axonokdemyelinációja és remyelinációja során keletkező hurkaszerű képződmények, ún. „tomaculae“ • esetenkéntpes cavus, csökkentinreflexekés a boka reflexeinekhiánya

5. Genetikai háttér • perifériásmyelinprotein 22 (PMP22) • CMT1A • PMP22 duplikációja (~70%) éskülönbözőpontmutációk • HNPP • PMP22 deléciója(~85%) ésolyan pontmutációk, melyek következtében a protein teljesen elveszíti a működőképességét

6. Genetikai háttér • A 17-es kromoszómán található két repetíció (CMT1A-REP) közötti egyenlőtlen meiotikus crossing-over • Végeredménye egy reciprok 1,5 Mb nagyságú duplikáció és deléció amely tartalmazza a PMP22 gént

7. Genetikai háttér

8. Genetikai háttér

9. Diagnosztika • PMP22 génkópiáinak pontos kvantifikációja • Southern hibridizáció, kvantitatív PSL, FISH, PCR-en alapuló módszerek, MLPA • rekombináció-specifikus DNS fragmensek azonosítása • PFGE, PCR-en alapuló módszerek

10. Diagnostika • Real-time PCR • Relatív kvantifikáció → komparatív CTmódszer • referens gén (humán szérum albumin – HSA) • cél gén és referens gén azonos amplifikációs hatékonysága • kalibrátor

11. Eredmények

12. Eredmények deléciót hordozó páciensek egészséges egyedek duplikációt hordozó páciensek a ∆∆Ct metódus átlagértéke az egyes csoportoknál

13. Eredmények Az egyes diagnosztikai csoportok részére meghatározott ∆∆Ct eredmény intervallumok: deléció – 0,65 alatt; egészséges egyed – 0,75-1,25;duplikáció – 1,35 fölött Megbízható diagnózis az esetek 87,2%-ában Duplikáció azonosítása a CMT1A gyanús páciensek 38,5%-ánál

14. Köszönöm a figyelmet!