ג. אנזימי הגבלה - Restriction Enzymes .

1. ג.אנזימי הגבלה -Restriction Enzymes. • אנזימים שחותכים את הקשר הפוספודיאסטרי ב-DNA. • אנזימים אילו נתגלו לאחר שנמצא, שבמקרים מסוימים, לא ניתן היה להעביר תורשתי בין חיידקים. • אנזימים אילו כנראה שייכים למנגנוני העמידות של החיידקים מפני תוקפנותם של נגיפים (bacteriophage) המחדירים את החומר התורשתי שלהם לחיידקים ופוגעים בהם.

2. המאפיינים של אנזימי ההגבלהRestrictionenzymes)) קיימים מאות סוגים של אנזימים הגבלה. • השוני בין האנזימים השונים בא לידי ביטוי: • א. ברצף הנוקלאוטידים באתר החיתוך. • ב. באופי החיתוך חיתוך ישר או מדורג. • ג. במספר הבסיסים באתרי החיתוך 4,6 או 8. • המשותף לכל אנזימי ההגבלה הוא, שיש להם אזורי החיתוך המתאפיינים ברצף נוקלאוטידים של פלינדרום.

3. אתר ספר הנדסה גנטית • אנימציה אנזימי הגבלה

4. חיתוך עם קצוות דביקים ((“sticky ends” .

5. מפת הגבלה • תיאור קווי של אתרים בדנ"א הנחתכים על ידי אנזימי הגבלה. • השיטה: • הדגרה של מקטע ה- DNA עם אנזים ההגבלה. • הפרדה של מקטעי ה-DNA באלקטרופוריזה בג'ל

6. שימושים שונים לאנזימי הגבלה • 1. גילוי מקטעי DNA ברצפים הגנומים • 2. שיבוט – החדרת מקטע DNA לתוך נשא. • בשיבוט משתמשים ב – פלסמידים או וירוסים

7. DNA רקומביננטי • יצירת DNA רקומבינטי • חיתוך שני מקטעי DNA: הגן והפלסמיד ע"י אותו אנזים הגבלה. • איחוי של שני המקטעים בעזרת אנזים ליגאז.

8. אלקטרופוריזה בג'ל • הפרדה של מקטעי ה- DNA אנימציה

9. אלקטרופוריזה בג’יל • דגימות הדנ”א לאחר שטופל באנזימי הגבלה מועברות לתוך גומה בג’יל. • מספקים זרם חשמלי • הדנ”א חומצי לכן טעון במטען שלילי, לכן הדנ”א ינוע לכיוון הקוטב החיובי. • במהלך ההרצה המקטעים הקצרים יעברו מרחק גדול, ואילו הארוכים יתקדמו למרחק קצר.

10. ההבחנה במולקולות של דנ”א בג’ל • מולקולות הדנ”א לא נראות לעין. • מוסיפים לג’יל אתידיום ברומיד • האתדיום ברומיד נקשר לבסיסים של הדנ”א ומצטבר בתוכן • אם מניחים את הג’יל בקרינתU.V • מתקבל דגם של פסים זוהרים