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DIAGNÓSTICO GENÉTICO PREIMPLANTATORIO Dra. Dolores Lozano Arana LABORATORIO DE FIV

DIAGNÓSTICO GENÉTICO PREIMPLANTATORIO Dra. Dolores Lozano Arana LABORATORIO DE FIV UNIDAD CLÍNICA DE GENÉTICA Y REPRODUCCIÓN H OSPITALES U NIVERSITARIOS VIRGEN DEL ROCÍO SEVILLA. Definición

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DIAGNÓSTICO GENÉTICO PREIMPLANTATORIO Dra. Dolores Lozano Arana LABORATORIO DE FIV

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  1. DIAGNÓSTICO GENÉTICO PREIMPLANTATORIO Dra. Dolores Lozano Arana LABORATORIO DE FIV UNIDAD CLÍNICA DE GENÉTICA Y REPRODUCCIÓN HOSPITALES UNIVERSITARIOS VIRGEN DEL ROCÍO SEVILLA

  2. Definición Análisis genético de los preembrionesobtenidos por técnicas de fecundación in vitro antes de ser transferidos al útero. 1990 (Handyside et al) primer embarazo tras PGD. Consorcio para PGD (ESHRE) Diagnóstico Genético Preimplantatorio Definición

  3. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Objetivo Objetivo Ofrecer una opción reproductiva a familias con alto riesgo de transmitir enfermedades de base genética a su descendencia.

  4. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Objetivo Parejas Historial reproductivo particular: - Hijo afecto - IVE - Conocimiento exhaustivo de su patología Opciones: - No tener hijos biológicos/Adoptar/Donación gametos - Diagnóstico prenatal - PGD

  5. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Objetivo PGDvsDiagnóstico Prenatal

  6. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Tipos Tipos PGD de alto riesgo. PGD de bajo riesgo.

  7. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Tipos PGD de alto riesgo Parejas con elevado riesgo de transmitir anomalías cromosómicas o genéticas a sus hijos.

  8. Autosómicas recesivas Fibrosis quística Atrofia muscular espinal Ligadas a X Hemofilias DM Duchenne Autosómicas dominantes Corea de Huntington Distrofia miotónica Anomalías cromosómicas estructurales Diagnóstico Genético Preimplantatorio Patologías PGD alto riesgo

  9. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Tipos PGD bajo RIESGO (PGS ó PGD-AS) Parejas infértiles en tratamiento de FIV para mejorar tasas de gestación. • Edad avanzada (>37 años) • Fallos repetidos de implantación tras FIV • Parejas con cariotipo normal con abortos de repetición

  10. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Patologías PGD bajo riesgo (PGS ó PGD-AS) Screening de aneuploidias:Alteración en el número de cromosomas Diagnóstico por FISH Sondas más frecuentes: 13 (Trisomía - Sd. Patau) 18 (Trisomía - Sd. Edwards) 21 (Trisomía - Sd. Down) X, Y (X0, XXY,...) Otros: 22, 16, 15

  11. Diagnóstico Genético Preimplantatorio

  12. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Tipos PGD de alto riesgo Parejas con elevado riesgo de transmitir anomalías cromosómicas o genéticas a sus hijos.

  13. Consejo genético Análisis previos FIV Biopsia Fijación FISH PCR DP Transf Diagnóstico Genético Preimplantatorio Organización Genética Programa PGD FIV

  14. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Método • Fase previa • Obtención de embriones • Biopsia embrionaria • Análisis genético diagnóstico • Transferencia embrionaria

  15. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Método • Fase previa • Obtención de embriones • Biopsia embrionaria • Análisis genético diagnóstico • Transferencia embrionaria

  16. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Método FASE PREVIA: CONSULTA CONJUNTA DE GENÉTICA CLÍNICA Y REPRODUCCIÓN - Consejo Genético - Análisis genéticos previos - Consulta pre-FIV - Criterios de Inclusión/exclusión: El diagnóstico es técnicamente posible y fiable Riesgo de recurrencia EBG que genere graves problemas de salud Edad materna*, FSH basal* No contraindicaciones para FIV - Consentimientos informados de PGD y FIV

  17. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Método • Fase previa • Obtención de embriones • Biopsia embrionaria • Análisis genético diagnóstico • Transferencia embrionaria

  18. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Método Obtención de embriones: Tratamiento de FIV -Estimulación ovárica controlada. - Controles clínicos y ecográficos. - Punción folicular bajo anestesia. - Obtención de ovocitos. - Fecundación de los ovocitos.

  19. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Método Tratamiento de FIV Consideraciones especiales: - Mejor respuesta mayor número de ovocitos 12 ovocitos (M II) 10 fecundados  1 sin resultados  4 afectos  1 bloqueado - ICSI SHO

  20. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Método Día 0

  21. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Método Día 0

  22. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Método Día 0

  23. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Método Día + 1

  24. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Método Día + 2

  25. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Método • Fase previa • Obtención de embriones • Biopsia embrionaria • Análisis genético diagnóstico • Transferencia embrionaria

  26. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Método Biopsia embrionaria Tipos: - Corpúsculo polar información materna - Blastómeras Habitual - Blastocisto Más células Poco tiempo Mosaicismos

  27. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Método Biopsia embrionaria – blastómeras - Día + 3 (6-8 blastómeras) - Totipotenciales - Inicio de compactación - Uniones calcio dependientes Técnica: - Medio libre de calcio y magnesio - Mecánico, Acido Tyrode, Láser* - Extracción de 1 ó 2 blastómeras - Mononucleadas Ca++ Ca++ Ca++

  28. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Método Biopsia embrionaria – blastómeras - Día + 3 (6-8 blastómeras) - Totipotenciales - Inicio de compactación - Uniones calcio dependientes Técnica: - Medio libre de calcio y magnesio - Mecánico, Acido Tyrode, Láser* - Extracción de 1 ó 2 blastómeras - Mononucleadas

  29. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Método • Fase previa • Obtención de embriones • Biopsia embrionaria • Análisis genético diagnóstico • Transferencia embrionaria

  30. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Método Diagnóstico genético FISHPCR (Hibridación in situ fluorescente) (Reacción en cadena de la polimerasa) Técnica: Fijación de núcleos Lisis celular Hibridación Amplificación Diagnóstico: Aneuploidias Mutaciones Selección de sexo Translocaciones

  31. DNA cromosómico A T A T A T G G T C C T A T T A A G T T A C A A T G G A C C G G G C C C C C sonda G G A A T T T T A A desnaturalización de sonda y cromosomas Cromosoma en el porta Diagnóstico Genético Preimplantatorio Método FISH - Hibridación

  32. A T T G C A T T A A T G A C G C G C C G A T T A Hibridación de sonda y cromosomas Visualización de la señal fluorescente Diagnóstico Genético Preimplantatorio Método FISH - Hibridación

  33. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Método Problemas de FISH - Número limitado de sondas por ronda - Fallo de hibridación - Overlaps - Número limitado de sondas disponibles - Mosaicismos

  34. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Método Diagnóstico genético FISHPCR (Hibridación in situ fluorescente) (Reacción en cadena de la polimerasa) Técnica: Fijación de núcleos Lisis celular Hibridación Amplificación Diagnóstico: Aneuploidias Mutaciones Selección de sexo Translocaciones

  35. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Método PCR

  36. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Método PCRCystic Fibrosis DF 508 Positive control (carrier) Molecular weight marker Affected embryo (first cell) Affected embryo (second cell) Heterozygote embryo (first cell) Heterozygote embryo (second cell) No diagnosis because of ADO in the second cell of the embryo Molecular weight marker FIGO-IFSS, Barcelona 2004

  37. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Método Problemas de PCR - Los fallos de amplificación ocurren en el 5-10% de PCR de célula única. Posibles causas: - pérdida de la célula - célula sin núcleo o degenerado - fallos en la lisis celular - Alelle Dropout (amplificación de un alelo) - Contaminación (espermatozoides, células de granulosa…) - Mosaicismos

  38. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Método • Fase previa • Obtención de embriones • Biopsia embrionaria • Análisis genético diagnóstico • Transferencia embrionaria

  39. Biopsia d +3 Verde - Cromosoma X Acqua - Cromosoma 18 Verde – Cromosoma 13 Rojo – Cromosoma 21 Fijación citoplasma núcleo FISH núcleo Día +4 Blastocisto DIAGNÓSTICO GENÉTICO PREIMPLANTATORIO

  40. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Resultados Tasa de gestación 15-20% por ciclo iniciado Fiabilidad 95% Se recomienda Diagnóstico Prenatal a todas las gestantes

  41. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Consideraciones especiales Consideraciones especiales del PGD - Consejo Genético - Parejas sin esterilidad - Necesidad de mejor respuesta ovárica - Mayor riesgo SHO - ICSI - Diagnóstico prenatal recomendable - Evaluación y seguimiento RN recomendable

  42. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Limitaciones Limitaciones del PGD - Las pacientes tienen que someterse a un ciclo de FIV - Alta tasa de cancelaciones - Todos los embriones pueden ser afectos - Viabilidad del embrión - Posibles errores de diagnóstico

  43. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Sistema Sanitario Público de Andalucía DECRETO 156/2005 de 28 de junio, por el que se regula el Diagnóstico Genético Preimplantatorio en el Sistema Sanitario Público de Andalucía y se crea la Comisión Andaluza de Genética y Reproducción.

  44. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Sistema Sanitario Público de Andalucía • Enfermedades genéticas ligadas al sexo: Enf. Duncan DMD Hemofilia B Hemofilia A Sind. Pellizaeus Merzbacher Sind. Alport

  45. Diagnóstico Genético Preimplantatorio Sistema Sanitario Público de Andalucía RESULTADOS DE LABORATORIO Nº CICLOS: 13 TRANSFERENCIAS: 8 MEDIA/ciclo EDAD DE LAS PACIENTES 30.3 OVOCITOS MADUROS 9.7 OVOCITOS FECUNDADOS 7.3 74.8 % EMBRIONES BIOPSIADOS 5 69.4 % EMBRIONES INFORMATIVOS 4.4 87.8 % EMBRIONES TRANSFERIDOS 1.5* TASA TRANSFERENCIA 61.5 % TASA GEST. CLIN ./TRANSFER 25 % *media de embriones transferidos en las 8 transferencias realizadas

  46. Genetistas Salud Borrego López Irene Marcos Luque Ana Peciña López Raquel Fernández García Javier Sánchez García Embriólogas M. Dolores Lozano Arana Beatriz Sánchez Andújar Ginecólogos Juan Carlos García Lozano José Luis García Benítez Antonio Jiménez Díaz de la Serna Manuel Ledesma Mestre Juan Luis Moliní Rivera Enrique Moreno Pacha Director Guillermo Antiñolo

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