小鼠骨髓微核试验 In vivo Mouse Bone Marrow Cytogenetics Test: Micronucleus Assay

小鼠骨髓微核试验In vivo Mouse Bone Marrow Cytogenetics Test:Micronucleus Assay 中山大学公共卫生学院预防医学系肖勇梅

（一）目的 • 学习和掌握小鼠骨髓多染红细胞（PCE）微核测定方法。

（二）原理 • 微核（micronucleus） • 大小相当于细胞直径1/20~1/5，呈圆形或杏仁状，其染色与细胞核一致，在间期细胞中可以出现一个或多个。

（二）原理 • 微核实验可检测化学毒物或物理因素诱导产生的染色体完整性改变和染色体分离改变两种遗传学终点。 • 凡能使染色体发生断裂或使染色体和纺锤体联结损伤的化学物，都可用微核试验来检测。

（二）原理 • 有核细胞的胞质少，微核与正常核叶及核的突起难以鉴别。 • 嗜多染红细胞的主核已排出，胞质内含有核糖体，姬姆萨染色呈灰蓝色；成熟红细胞（NCE）的核糖体已消失，被染成淡桔红色。骨髓中嗜多染红细胞数量充足，微核容易辨认，而且微核自发率低，因此，骨髓中嗜多染红细胞成为微核试验的首选细胞群。

（三）器材与试剂 • 器材：手术刀、手术剪、无齿镊、小型弯止血钳、干净纱布、带橡皮头吸管、晾片架、玻璃蜡笔、玻璃染色缸、载玻片及推片、定时钟、带油镜头显微镜、细胞计数器 • 试剂：甲醇（分析纯）、甘油（分析纯）、小牛血清、生理盐水、Giemsa贮备液、磷酸盐缓冲液（pH6.8） • 阳性对照物：环磷酰胺或丝裂霉素C

（四）操作步骤

1.实验动物与处理 • 动物选择：常用大、小鼠 • 染毒途径：经口、经皮、经呼吸道、注射 • 染毒次数及取样时间： • 剂量选择：3~5个或更多剂量组

2.骨髓微核观察的步骤 骨髓制取 ↓ 涂片 ↓ 固定 ↓ 染色 ↓ 观察与计数

正染红细胞 嗜多染红细胞及微核

染色太浅

（五）结果分析与评价 • 微核率指含有微核的嗜多染红细胞数，以千分率（‰）表示 • 若一个嗜多染红细胞中出现两个或两个以上微核，仍按一个有微核细胞计数

（五）结果分析与评价 • 正常的PCE/NCE比值约为1（正常范围0.6~1.2）；PCE/NCE＜0.1， • 阴性对照组和阳性对照组的微核发生率 • 多种统计学方法（Poinsson分布、二项分布、X2检验等）均有人应用

（五）结果分析与评价 • 注意：本实验的关键步骤是制作良好的骨髓涂片及优质的染色。

（六）试验报告 • 受试物名称、理化性状、配制方法、所用溶剂 • 动物种属和品系、体重、数量、性别、来源（注明合格证号和动物级别） • 实验动物饲养环境，包括饲料来源、室温、相对湿度、实验动物室合格证号 • 剂量分组，染毒途径和方式 • 试验方法：简述操作步骤，所用统计学方法，结果判定标准 • 结果：以列表方式报告受试物对动物骨髓细胞微核发生率（表1） • 结论

表1 ×××对动物骨髓嗜多染红细胞微核发生率

小鼠骨髓微核试验 In vivo Mouse Bone Marrow Cytogenetics Test: Micronucleus Assay