1 / 18

ENZYME LİNKED IMMUNOSORBENT ASSAY (ELISA)

ENZYME LİNKED IMMUNOSORBENT ASSAY (ELISA). Tanım: Enzim ile işaretli antikorlar ( konjugat) ve substrat kullanılarak , şüpheli materyalde bulunan etken (ya da Ag) ya da bunlara karşı oluşmuş antikor varlığının araştırılması amacıyla kullanılan bir yöntemdir. . Kullanım Amaçları.

tiva
Download Presentation

ENZYME LİNKED IMMUNOSORBENT ASSAY (ELISA)

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. ENZYME LİNKED IMMUNOSORBENT ASSAY (ELISA) Tanım: Enzim ile işaretli antikorlar ( konjugat) ve substrat kullanılarak , şüpheli materyalde bulunan etken (ya da Ag) ya da bunlara karşı oluşmuş antikor varlığının araştırılması amacıyla kullanılan bir yöntemdir.

  2. Kullanım Amaçları • Şüpheli materyalde etken/antijen varlığının araştırılması • Antikor tesbiti

  3. Konjugat: Enzim ile işaretli antikor. ( işaretleyici madde + Antikor) • ELISA testinde kullanılan işaretleyici enzimler peroksidaz, alkalen fosfataz, glukoz oksidaz,B-galoktosidaz,vb. • En sıklıkla kullanılan işaretleyiciler ise peroxidase* ve alkalen fosfatazdır. • *en stabil olanıdır.

  4. Konjugatın yapısındaki antikor • Tespiti amaçlanan etken için spesifiktir(Örneğin ELISA testi “A” antijenin varlığını araştırmak için yapılıyor ise antikor “A”antijenine karşı oluşmuştur) • Primer antikora spesifiktir.( Örneğin sığır serumunda bir antikor varlığı arınıyor ise, anti-sığır Ig G’ler konjugatın yapısında bulunur) • Direkt ELISA testinde konjugat antijene karşı, indirekt ELISA testinde ise primer antikora karşı hazırlanmıştır.

  5. Substrat • Konjugatın yapısındaki enzim ile reaksiyona girerek, antijen-antikor komplekslerinin oluşumunu ortaya koyan maddedir. Reaksiyon sonucunda substratın yapısındaki kromajen maddednin yapısına göre mavi,yeşil, sarı,vb. renklerde ürünler oluşur.

  6. Konjugat-Substrat İlişkisi • Konjugat-Substrat-Renk • Peroksidaz- OPD-Portakal sarısı • -5aminosalisilik asit-menekşe • -Orthotolidine- mavi • Alkalen Fosfataz- p nitrophenil fosfat-sarı

  7. Test Yöntemleri • Direkt ELISA (Ag tesbiti için) • İndirekt ELISA ( Ag ya da Ab tesbiti için)

  8. ELISA testi uygulaması için, • ELISA tableti (polysteren,polyvinil,vb) • Konjugat • Substrat • Virus (Bİlinen yada şüpheli) • Serum(bilinen veya şüpheli) • ELISA okuyucusu • Test solusyonları

  9. DİREKT ELISA • Yöntemin esası, ELISA tabletine kaplanmış, şüpheli antijene spesifik antikorlardan yararlanarak antijenin varlığının ortaya konmasıdır.

  10. Testin Uygulanışı • 1. Tablet Bilinen Ab ile kaplanır. • 2. Şüpheli materyal (Ag) konulur. • 3. Virusa spesifik konjugat ilave edilir. • 4. Substrat konulur. • NOT: Her basamaktan sonra uygun süre inkubasyonu takiben yıkama işlemi yapılır.

  11. Direkt ELISA Tekniği

  12. İndirekt ELISA • Yöntem, şüpheli serumda antikorların saptanması ve titrelerinin ölçülmesi amacıyla kullanılır.

  13. Testin uygulanışı • 1. Tablet bilinen antijen ile kaplanır. • 2. Süpheli kan serumu ilave edilir. • 3. Konjugat ilave edilir. ( Anti-antikordur) • 4. Substrat konulur. • NOT: Her basamaktan sonra uygun süre inkubasyonu takiben, yıkama işlemi yapılır.

More Related