1 / 23

Glukosa Oksidase

Secretory expression and purification of Aspergillus niger glucose oxidase in Saccharomyces cerevisiae mutant deficient in PMR1 gene Ji-Hyun Ko, Moon Sun Hahm,a Hyun Ah Kang, Soo Wan Nam and Bong Hyun Chunga Protein Expression and Purification 25 (2002) 488–493. Glukosa Oksidase.

ariane
Download Presentation

Glukosa Oksidase

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Secretory expression and purification of Aspergillus niger glucose oxidase in Saccharomyces cerevisiae mutant deficient in PMR1 gene Ji-Hyun Ko, Moon Sun Hahm,a Hyun Ah Kang, Soo Wan Nam and Bong Hyun Chunga Protein Expression and Purification 25 (2002) 488–493 GlukosaOksidase Syahfitri Anita 20508044

  2. Agenda • Properti Glukosa Oksidase • Aplikasi Glucose oksidase • Latar Belakang • Tujuan Penelitian • Metode • Hasil • Kesimpulan

  3. GlukosaOksidase (GOx) • EC 1.1.3.4 • FAD sebagai kofaktor

  4. Mekanisme -D-Gluconolactone +O2 -H2O2 +D-Glucose

  5. PropertiGOx • Terdapat di serangga (lebah, belalang) dan jamur (Aspergillus niger, Penicillium sp dan Botrytis cinerea). • Berat Molekul bervariasi antara 150kDa-186kDa (Tsuge et al. 1975) • pH optimum 4–7 (Keilin and Hartree 1947; Nakamura and Fujiki 1968; Bao et al. 2001) • Titik Isoelektrik (pI) 4.2 (Pazur and Kleppe 1964) • Nilai Km

  6. Struktur Struktur 3 dimensi glukosa oksidase dari Apergillus niger

  7. Struktur Primer subunit Interaksidengan FAD Ikatandisulfida InteraksidenganSubstrat

  8. Inhibisi • Ag+, Hg2+, Cu2+ dapat menjadi inhibitor melalui pembentukan kompleks secara non kompetitif (Toren and Burger 1968) • Inhibisi oleh substrat (glukosa) dapat terjadi ketika kadar oksigen rendah (Nicol dan Duke, 1966) • Akumulasi produk (H2O2 dan D-gluconolactone) juga dapat mengihibisi reaksi (Kleppet, 1966, Bao et al.2001)

  9. Aplikasi • Penentuankadarglukosadenganpenggunaan biosensor (Wilson and Turner, 1992). • GOx, bersamadengancatalase, digunakanpadaberbagaiindustrimakanandanminuman, sepertidalampembuatanbir, soft drinks, roti, mayonaise, makanankalengdlluntukmenstabilkanwarnadan rasa denganpenghilanganoksigen (Crueger and Crueger, 1990). • Goxjugadigunakanuntukproduksiasamglukonat yang banyakdigunakandalamindustrilogam, beton, makanan, kosmetik, obat-obatandll (Ramachandran et al. 2006).

  10. AplikasidiIndustrimakanan • Menghilangkan oksigen dalam pembuatan mayonaise dan pengalengan makanan • Meningkatkan kualitas textur roti • Untuk mengendalikan pencoklatan (browning) pada pemrosesan dan penyimpanan pasta dari buah • Bersama lactoperoxidase digunakan sebagai pengawet/agen antimikroba pada industri berbahan dasar susu

  11. AplikasidiIndustriMinuman Produksi wine kadar alkohol rendah (Pickering et al. 1998)

  12. AplikasidiBidangKesehatan: Biosensor Sensor glukosadarahdancairantubuhlainnya

  13. Latarbelakangpenelitian • GOx yang disekresikan pada S. cerevisiae menunjukkan hyperglycosylation yang tinggi dibandingkan dengan GOx dari A. niger • Konstruksi ekspresi GOx menggunakan mutan S. cerevisiae yang mana gen PMR1 yang mengkode Ca2+ -ATPase ditiadakan sehingga dapat menekan hiperglikosilasi GOx

  14. Tujuan • Melakukan ekspresi secretori dan pemurnian glukosa oksidase dari Apergillus niger pada S. cerevisiae • Menguji pengaruh hiperglikosilasi dari GOx rekombinan terhadap properti enzim dan efisiensi sekresi

  15. Metode • Konstruksi mutan S. cerevisiae dan vektor ekspresi • Transformasi dengan plasmid pYGOD-His • Kultivasi • Pemurnian rekombinan Gox-His6 • Immunobloting • SDS-PAGE

  16. Hasil: Immunoblot Intracellular Extracellular M: marker; 1: Native GOx A. Niger; 1 ,2: Wild Type ; 3,4 Mutan type

  17. Efekmutasipadapertumbuhanseldansekresi Gox-His6

  18. Pemurnian

  19. Pemurniandan SDS-Page M: Marker 1: GOx pada Wild Type 2: GOx pada Mutan Type

  20. Pengaruh pH GOx A. Niger GOx-His6 mutan type Gox-His6 hiperglikosilasi

  21. PengaruhTemperatur GOx A. Niger GOx- His6 mutan type GOx – His6 hiperglikosilasi

  22. Kesimpulan • Properti fisik dan efisiensi katalitik dari GOx-His6 mutan pmr1Δ hampir sama dengan GOx native dari A. niger • Delesi gen PMR1 pada S. cerevisiae dapat meningkatkan efisiensi sekresi GOx namun menganggu pertumbuhan sel

  23. Terimakasih

More Related