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REGULACION DEL RECEPTOR DE VITAMINA D (VDR) EN LAS GLANDULAS PARATIROIDES. VDR. D. Unión Prot.Reg. D.Dimerización. (RXR). DBL. VDR. DBD. (VDRE). Prot. Reg. CTR. CTR. VDRE. ARNpol. RXR. VDR. VDR. CTR. El RECEPTOR DE VITAMINA D (VDR). En la célula paratiroide:.

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Presentation Transcript

  1. REGULACION DEL RECEPTOR DE VITAMINA D (VDR) EN LAS GLANDULAS PARATIROIDES. VDR D. Unión Prot.Reg. D.Dimerización (RXR) DBL VDR DBD (VDRE)

  2. Prot. Reg. CTR CTR VDRE ARNpol RXR VDR VDR CTR El RECEPTOR DE VITAMINA D (VDR) En la célula paratiroide: Expresión génica de PTH Expresión génica de p21 y p27. Expresión génica de CaR Núcleo Citoplasma

  3. REGULACION DEL RECEPTOR DE VITAMINA D (VDR) EN LA CELULA PARATIROIDEA. Ca2+ CaR VDR HPTH2º PTH PTH PTH Ca2+ PTH Célula paratiroide Célula paratiroide hiperplásica

  4. FACTORES REGULADORES DEL VDR EN LA CELULA PARATIROIDEA. Calcitriol * Calcio * Calcimiméticos * Mecanismos Intracelulares. *

  5. REGULACION DEL RECEPTOR DE VITAMINA D (VDR) EN LA CELULA PARATIROIDEA CaR CTR CTR CTR CTR CTR CTR CTR VDR VDR VDR VDR CTR CTR POR CALCIO. POR CALCITRIOL. Ca2+ VDR NUCLEO CITOPLASMA Naveh-Many T et al. J Clin Invest. 86(6):1968-75, 1990. Russell J. et al. Endocrinology 132: 2639-2643, 1993. Denda M. et al Kidney Int. 50(1):34-39, 1996 Brown AJ. et al. Endocrinology 136:1419-1425, 1995

  6. REGULACION DEL RECEPTOR DE VITAMINA D (VDR) EN LAS CELULAS PARATIROIDES POR CALCIO. Ca2+ (ARNmvdr) VDR Estudios in vitro VDR/Actina-ARNm (U.ratio) 3 * * * 2 1 *p<0.05 vs. Ca 0.6 mM 0 0.6 0.8 1 1.25 1.4 1.6 1.8 Calcio (mM) Garfia et al. J. Am. Soc. Nephrol. 13: 2945-2952, 2003

  7. REGULACION DEL RECEPTOR DE VITAMINA D (VDR) EN LAS CELULAS PARATIROIDES POR CALCIO. Ca 0.6 mM Ca 1.5 mM El efecto del calcio sobre el VDR parece ser específico del tejido paratiroideo. Estudios in vitro 300 * 250 200 VDR/Actin-mRNA enparatiroides y riñón (% vs. Ca 0.6 mM) 150 100 50 0 Médula renal Paratiroides Corteza renal Garfia et al. J. Am. Soc. Nephrol. 13: 2945-2952, 2003

  8. REGULACION DEL RECEPTOR DE VITAMINA D (VDR) EN LAS CELULAS PARATIROIDES POR CALCIO. * p<0.05 vs Normocalcemia #p<0.05 vs Hipocalcema 280 280 * * 240 240 200 200 VDR Protein (%vs. Normoca) CTR (pg/mL) *# 160 160 120 120 * 80 80 40 40 0 0 Grupo HyperCa+CTR NormoCa HypoCa HyperCa Ca(mM) 1.16 ± 0.02 0.90 ± 0.02* 1,70±0,07*# 1.75 ± 0.05*# Estudios in vivo In vivo, el Ca regula la expresión génica de VDR. El CTR produce un incremento sobre el VDR sólo cuando las concentraciones de calcio son elevadas. Garfia et al. J. Am. Soc. Nephrol. 13: 2945-2952, 2003

  9. REGULACION DEL RECEPTOR DE VITAMINA D (VDR) EN LAS CELULAS PARATIROIDES POR CALCIO. CTR Hipocalcemia CTR Ca2+ VDR VDR VDR VDR VDR VDR VDR VDR VDR CTR CTR CTR CTR CTR CTR CTR CTR CTR CTR CTR CTR CTR CTR CTR CTR Célula paratiroide Normocalcemia Ca2+ VDR   PTHmRNA Célula paratiroide ¿PTHmRNA??

  10. REGULACION DEL RECEPTOR DE VITAMINA D (VDR) EN LAS CELULAS PARATIROIDES POR CALCIO. Ca(mM) 1.21±0.02 1.27±0.04 0.93±0.02* 0.99±0.03* *p<0.05 vs. NormoCa 250 200 150 PTH/Actina-mRNA (%vs. NormoCa) 100  50 0 NormoCa + CTR HipoCa +CTR Grupo NormoCa HipoCa

  11. IMPLICACIONES FISIOPATOLOGICAS DE LA REGULACION DEL RECEPTOR DE VITAMINA D (VDR) POR CALCIO EN LA CELULA PARATIROIDEA. Ca VDR PTH + Ca célula paratiroide + + ? Ca Calcitriol

  12. REGULACION DEL RECEPTOR DE VITAMINA D (VDR) EN LAS CELULAS PARATIROIDES POR CALCIO: MECANISMOS INTRACELULARES IMPLICADOS. Ca2+ ¿ARNmVDR? AA PLA2 Ca++ PG IP3 PLC Célula paratiroide PTH Almadén Y. et al. J. Am. Soc. Nephrol., 11: 1712-1718,2000 Almadén Y. et al. J. Am. Soc. Nephrol. 3: 693-698, 2002

  13. AA Ca++ IP3 * * PLA2 VDR Ca2+ PLC PG 1.5 0.6+AA REGULACION DEL RECEPTOR DE VITAMINA D (VDR) EN LAS CELULAS PARATIROIDES POR CALCIO: MECANISMOS INTRACELULARES IMPLICADOS. VDRmRNA/Actina mRNA (% Ca0.6mM) Ca 0.6mM +AAexog *p<0.05 vs Ca 0.6mM 300 * 200 AA VDR Cai 100 0 Cel.paratiroidea Ca 0.6mM +I Calcio (mM) 0.6 0.6+I La vía PLA2-AA participa en la regulación de la expresión génica de VDR por calcio.

  14. REGULACION DEL RECEPTOR DE VITAMINA D (VDR) EN LAS CELULAS PARATIROIDES POR CALCIO: IMPLICACION DE MAPKs EN LA VIA PLA2-AA. PLA2 Ca++ IP3 Ca2+ MAPKs ? AA VDR PG MAPKs ? PLC Célula paratiroide PTH

  15. REGULACION DEL RECEPTOR DE VITAMINA D (VDR) EN LAS CELULAS PARATIROIDES POR CALCIO: IMPLICACION DE MAPKs EN LA VIA PLA2-AA. AA * Ca++ PLA2 Ca2+ PLC PG VDR IP3 * El AA ejerce su acción sobre la expresión génica de VDR a través de ERK1/2 MAPKs ERK1/2-MAPK % ARNm vdr/ARNm β-actina vs Ca 1.5mM ? 120 * p<0.01 vs Ca 1.5mM 100 ? 80 ERK1/2-MAPK 60 * 40 20 0 % ARNm vdr/ARNm β-actina vs Ca 0.6mM Ca=1.5mM +SB (p38) Ca=1.5mM +PD (ERK1/2) Ca=1.5mM Ca=0.6mM 200 * p<0.01 vs Ca 0.6mM # p<0.01 vs Ca 0.6mM+AA * 150 # 100 50 0 Ca=0.6mM Ca=0.6mM +AA Ca=0.6mM+AA +PD(ERK1/2) Ca=1.5mM

  16. MECANISMOS INTRACELULARES IMPLICADOS EN LA REGULACION DE LA EXPRESION GENICA DE VDR POR CALCIO PLA2 ERK1/2 MAPKs Ca++ IP3 Ca2+ AA VDR PG PLC Célula paratiroide PTH

  17. REGULACION DEL RECEPTOR DE VITAMINA D (VDR) EN LAS CELULAS PARATIROIDES POR CALCIO: ESTUDIOS EN GLS. HUMANAS HIPERPLASICAS ARNmVDR/ARNmActina (U. ratio) ARNmVDR/ARNmActina (U. ratio) 3 * 3 * * 2 * 2 * 1 1 *p<0.05 vs Ca=0.8 mM *p<0.05 vs Ca=0.8 mM 0 0,6 0,8 1,2 1,4 1,6 1,8 1 0,4 0,6 0,8 1 1,2 1,4 1,6 1,8 2 Gl. paratiroides normales (ratas) Gl. paratiroides hiperplásicas (humanas) La capacidad de regulación de la expresión génica del VDR por Ca está disminuída en gls. paratiroideshiperplásicas. ¿El calcio regula la expresión de VDR en gls. paratiroides hiperplásicas humanas?. Estudios in vitro

  18. secreción de PTH secreción de PTH REGULACION DEL RECEPTOR DE VITAMINA D (VDR) EN LAS CELULAS PARATIROIDES: EFECTO DEL CALCIMIMETICO. Acción del calcimimético en la célula paratiroidea Ca2+ Calcimimeticos actúan por modulación alostérica. Extracelular CM Intracelular Activación de segundos mensajeros Quarles LD et al, J.Am.Soc.Nephrol. 14:575-583, 2003. Nemeth EF et al. Proc Natl Acad Sci USA 95: 4040-4045, 1998. Block GA et al, N. Engl. J. Med 350:1516-1525, 2004. Colloton M. et al, Kidney Int 67:467-476, 2005. Wada M et al. Kidney Int. 57:50-58, 2000. Goodman WG et al. Adv Renal Replace Therapy 9:200–208,2002 Lindberg J.S. et al. 16: 800-807, 2005.

  19. REGULACION DEL RECEPTOR DE VITAMINA D (VDR) EN LAS CELULAS PARATIROIDES: EFECTO DEL CALCIMIMETICO. Estudios in vitro 450 ab a, p<0.05 vs Ca 0.6mM; b, p<0.05 vs Ca 1.0 mM ab 400 ab ab 350 300 a a (% vs Ca 0.6 mM) a VDR/mRNA B-Actina 250 200 150 100 50 Calcio(mM) 0.6 0.6 0.6 0.6 1.0 1.0 1.0 1.5 1.8 0.001 0.01 0.1 0.001 0.01 Calcimimético (µM)

  20. * CTR 1.34 ± 0,01 42±3 * ( )p<0.001 vs control. (a) p<0.05 vs CM. (b) p<0.05 vs CTR REGULACION DEL RECEPTOR DE VITAMINA D (VDR) EN LAS CELULAS PARATIROIDES: EFECTO DEL CALCIMIMETICO. Estudios in vivo VDR/Actina-mRNA(%vs control) 400 350 * a,b 300 250 * 200 150 100 50 0 control CM+CTR CM Ca (mM): 1.34±0,01 1.08±0.06 1.25±0.05 PTH(pg/ml): 44±2 19±3 28±2

  21. REGULACION DEL RECEPTOR DE VITAMINA D (VDR) EN LAS CELULAS PARATIROIDES: EFECTO DEL CALCIMIMETICO. Control CM 160 140 120 100 80 60 40 20 VDR 200 180 VDR (%vs control) 0 control CM (1mg/Kg) El CALCIMIMETICO (NPSR-568) regula la expresión de VDR en las células paratiroides “in vivo”.

  22. REGULACION DEL RECEPTOR DE VITAMINA D (VDR) EN LAS CELULAS PARATIROIDES: EFECTO DEL CALCIMIMETICO. C C C C N N N N Gls. Paratiroides hiperplásicas humanas VDR Calcio(mM) 0.6 0.6 0.6 1.35 R 568(µM) -- -- 0.1 1 Densidad (% vs. 0.6) 100 237 237 274 C: fr. citoplasmática N: fr. nuclear

  23. VDR 1. Ca Ca VDR 2. CTR PTH 3. Ca CTR 4. VDR Ca PLA2-AA-ERK1/2 5. CM VDR RESUMEN

  24. SERVICIO DE NEFROLOGIA Unidad de Investigación. Hospital Reina Sofía de Córdoba Facultad de Veterinaria, Universidad de Córdoba • Mariano Rodriguez • Antonio Canalejo • Sagrario Cañadillas • Maria Encarnación Rodríguez • Rocío Canalejo • Ana Quintero • Escolástico Aguilera • Jose Carlos Estepa • Ignacio López • Fco. Javier Mendoza • Escolástico Aguilera • Addy Montes de Oca

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