1 / 15

Alkoholdehydrogenas – ADH labb

Alkoholdehydrogenas – ADH labb. Biokemi 1 – HT-11. Linda Helmfors liand@ifm.liu.se ( linda.helmfors@liu.se ). Dehydrogenaser. Enzymer som katalyserar överföring av väte kallas med ett samlingsnamn för dehydrogenaser

belden
Download Presentation

Alkoholdehydrogenas – ADH labb

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Alkoholdehydrogenas – ADH labb Biokemi 1 – HT-11 Linda Helmfors liand@ifm.liu.se (linda.helmfors@liu.se)

  2. Dehydrogenaser • Enzymersomkatalyseraröverföringavvätekallas med ettsamlingsnamnfördehydrogenaser • Alkoholdehydrogenas (ADH) katalyserar oxidation avalkoholer -> aldehyder • ADH krävernärvaroavkoenzymet NAD+föraktivitet • ADH ärettgruppspecifiktenzym. Snabbastreaktion med etanol men ävenandraalkoholerfungerar ADH NAD+

  3. Labben • Blandaolikaalkoholer med ADH och NAD+ • Mätaabsorbansändringen • Beräknareaktionshastigheten

  4. Reaktionen vi studerar ADH-NAD+ + R-CH2OH ⇌ ADH-NADH + R-CHO + H+

  5. Hurkan vi mätareaktionshastigheten? • Vi kanmätareaktionshastighetengenomattmätaspektrofotometriskt vid 340nm • NADH absorberarljus till skillnadfrån NAD+ • 1 mol NADH  1 molalkohol • Absorbansökningen per tidsenhetärettmåttpåreaktionshastigheten

  6. Reaktionshastighet • E mättatpå [S] • Allt E förekommersom [ES] • [E]Tot = [ES] • VMaxberorav [E] Under dessabetingmäter vi

  7. Absorbansjämfört med reaktionshastighet Överskottetsubstratär slut => Reaktionenharnåttjämvikt Konstanthastighet Gerosshastigheteni min-1 men vi vill ha µmol/min

  8. Beräkningar • Lambert-Beers lag: • A absorbansenhet • εämnesspecifikkonstant, härför NADH 6,22 ∙ 103M-1 cm-1 • l strålensväggenomkyvetteni cm • c koncentrationav NADH ikyvetteni M • Kanskrivasom:

  9. Beräkningar forts. M/min Dettavill vi göraom till mol/min Skriv sedan i µmol/min itabellen

  10. Laborationsredogörelse: • Rubrik: Laborationens namn • Resultat: • Rådata (invägda mängder, spädningar, direkta mätresultat ) tydligt redovisade, gärna i tabellform: • Redovisade uträknade resultat baserade på mätdata – Tydligt! • Graf över reaktionshastigheten som funktion av enzymmängden

  11. Laborationsredogörelse forts: • Ifylld tabell över resultat • Resultattolkning/Diskussion: Värdering av resultat och egna slutsatser samt svar på eventuella frågor ställda i laborationshandledningen. • Lathund över vanliga returer kommer att sitta uppe på labb

  12. Kommentarer till returer - ADH • Beräkningarnabehöverjusteras • Grafensaknarenheter/felenhet • Uppdateratabellenochgrafen • Utveckadiskussionenöverresultatet • Redovisaberäkningarna med exempelfrånegnavärden • Graf saknas • Tabellöverrådatasaknas • Diskussionsaknas

  13. Förberedelser • Läslabbhandledningeninnanlabben • Funderaöver: • Vilka data behöver vi samla in förattberäkna V? • Vadförväntar vi ossförresultat?

  14. Labbenikorthet • Reaktionenutanenzym: NAD+ + EtOH, blanda -> mät • Reaktionen med enzym: NAD+ + EtOH + ADH, blandasnabbt -> mät • Upprepaförreproducerbarhet • Upprepa (2) med olikavolym ADH • Upprepa med olikaalkoholer

  15. Vi sespålabb!

More Related