290 likes | 944 Views
KULTIVIMI DHE IDENTIFIKIMI I AGJENSËVE INFEKTIVË . Alvin Fox, Ph.D. Izolimi (kultura) pllakat e agarit k olonitë terrenet e lëngëta - epruvetat Identifikimi & taksonomia Familja Gjinia Lloji Tipi. Testet biokimike (fiziologjike)
E N D
KULTIVIMI DHE IDENTIFIKIMI I AGJENSËVE INFEKTIVË Alvin Fox, Ph.D.
Izolimi (kultura) pllakat e agarit kolonitë terrenet e lëngëta - epruvetat Identifikimi & taksonomiaFamilja Gjinia Lloji Tipi Testet biokimike (fiziologjike) Testet molekulare ADN-ADN homologjia sekuentimi 16S ARNr Profilimi kimik Metodat tjera të gjetjes së mikrobeve Polymerase chain reaction (PCR) Aglutinimi (gjetja e antigjeneve) Ngjyrosja Serologjia (gjetja e antitrupave Fjalët kyçe
Taksonomia • Definon vetitë e përbashkëta ndërmjet grupeve të ndryshme të baktereve • Zakonisht gjenetike • Mundëson zhvillimin e kiteve diagnostike
Klasifikimi • Nëntipi (shtami): një izolat i vetëm ose një linjë e vetme bakteresh • Tipi: grup i nëntipeve të përafërta • Lloji: tipe të përafërta • Gjinia: lloje të përafërta • Familja: gjini të përafërta
Identifikimi i agjensëve infektivë në laboratorin e mikrobiologjisë • Ndihmon mjekimin • Ndihmon përzgjedhjen e antibiotikëve • Laboratoret spitalore të përgjithsme • Testet biokimike (fiziologjike) • Laboratoret referente • testet gjenetike
Hapat në izolimin dhe identifikimin e baktereve • Hapi 1. Mbjellja e mostrave në terrenet ushqyese • kolonitë pas inkubimit(p.sh. 24 orë) • madhësia, ndërtimi, ngjyra, hemoliza • kërkesat për oksigjen
Kultura në agar gjak Bacillus cereus. Bacillus anthracis CDC/Dr. James Feeley
Izolimi dhe identifikimi • Hapi 2. Ngjyrosja e kolonive sipas Gramit • vrojtimi mikroskopik i qelizave bakterore
Ngjyrosja sipas Gramit Gram negative Gram pozitive Fiksimi/tharja Ngjyrosja me kristal violet Fiksimi me jod Çngjyrimi me alkool Ngjyrosja me safraninë
Morfologjia e ngjyrosjes së Gramit • forma • koke (rreth) • bacile (shkop) • spiraleose të lakuar (p.sh. spirohetat) • Qeliza të veçuara apo të bashkuara • vile rrushi (p.sh. staphylococcus) • varg (p.sh. streptococcus) • Gram pozitive ose negative
Hapi 3.Emërtimi i llojit të bakteres së izoluar • Kryesisht duke u bazuar në testet biokimike (fiziologjike)
Hapi 4. Antibiogrami
Testimi i antibiogramit I ndjeshëm(sensitiv) Rezistent Kolonitë bakterore rritja S'ka rritje Disku me antibiotikë
Identifikimi molekular • Gjenomika • Karakterizimi i gjeneve • Sekuencimi • PCR • Hibridizimi • % guaninë + citozinë
Sekuencimi i 16S ARNr • Dallon llojet bakterore • Zhvillimi i testeve klinike të bazuara në sekuenca gjenetike (p.sh. PCR)
Real-time PCR ds ADN Cikli 1 Ngjyra Cikli 2 Cikli 30 2 30
Hibridizimi ADN-ADN Shtami 1 nxehtësia + Shtami 2 0% Homologji Homologji 100%
Profilet • Acidet e ngopura • - strukturore (p.sh. membrana qelizore) • - acidet e ngopura me vargje të gjata • - gjatësia e vargjeve • Proteinat (proteomika)
Profili metabolik • avullueshmëria • alkoolet • acidet e ngopura me vargje të shkurta
Diagnoza e shpejtë pa kultivim në terrene ushqyese • KUR DHE PSE? • Rriten shumë pak • Nuk rriten fare në terrene ushqyese
Testi i shpejtë “Strep” Ekstrakti i antigjenit streptokoksik Antitrupi Grimcat latex
Sekuencat bakterore të ADN-së të amplifikuara drejtpërdrejt nga lëngjet trupore • polymerase chain reaction (PCR) • sukses i dalluar në diagnozën e • tuberkulozit.
Mikroskopi • lëngu trunoshpinor • (meningjiti) • këlbaza • (tuberkulozi) • sensitivitet i ulët
Identifikimi serologjik • përgjigja e organizmit duke prodhuar • antitrupa ndaj agjensit infektiv • disa javë pasi të shfaqet infeksioni