EL MICROSCOPIO DE LUZ Y ELECTRONICO

1. EL MICROSCOPIO DE LUZ Y ELECTRONICO No olviden que Dios nos ama y bendice nuestras actividades, feliz día. Dra. JUDITH DE RODAS SALON 207, AÑO 2014

2. Examen de inicio: 1. Para trabajar en el laboratorio se requiere lo siguiente: a. Vestimenta adecuada b. Zapatos cerrados c. Conocer las normas de bioseguridad d. Llevar materiales para los procedimientos e. Todo lo descrito 2. El microscopio de luz a diferencia del electrónico posee: a. Partes ópticas b. Partes mecánicas c. Poder de resolución d. Mecanismos para su función e. Fotones 3. Para hacer observaciones microscópicas es necesario lo siguiente excepto: a. Colocar la muestra sobre los objetivos b. Enfocar con el seco débil c. Regular la entrada de luz d. Afinar con el micrométrico e. Manipular el revolver

3. HISTORIA: • Se inventó, hacia 1610, por Galileo, según los italianos, o por Jansen, en opinión de los holandeses • Micro=pequeño • Scopein=ver En el siglo XVII un comerciante holandés, utilizando microscopios simples de fabricación propia describió por primera vez protozoos, bacterias, espermatozoides y glóbulos rojos. Constituido de 2 lupas que alcanzaban 260 aumentos, lo que le permitió ver algunos protozoos. Galileo Galilei En 1960 Malpighi, observa los capilares sanguínenos y R. Hook publica su obra “Micrographia”

4. ERNST ABBE Microscopio del siglo XVIII Las mejoras mas importantes de la óptica surgieron en 1877 cuando Abbe publica su teoría del microscopio Mejora la microscopía de inmersión sustituyendo el agua por aceite de cedro lo que permite obtener 2000 aumentos Evolución del microscopio

5. ESQUEMA DEL MICROSCOPIO • Un tubo cilíndrico aloja el sistema ópticoocular/objetivo. Una platina de original diseño permite observar las preparaciones, que son iluminadas por un espejo cóncavo que concentra la luz sobre el objeto a estudiar.

6. PARÁMETROS ÓPTICOS • Aumento • Poder de resolución • Nº de campo • Profundidad de foco • Contraste

7. AUMENTO • Se calcula multiplicando el aumento del objetivo por el aumento del ocular

8. PODER DE RESOLUCIÓN • Distancia si dos puntos se distinguen • Mayor, cuando menor es la longitud de onda • Mayor, cuanto mas grande es la apertura numérica • Mayor, con aceite de cedro

9. Número de campo • Es el diámetro de la imagen observada a través del ocular, expresado en milímetros

10. PROFUNDIDAD DE CAMPO

11. CONTRASTE • Diferencia de absorción de luz entre el objeto y el medio • Puede aumentarse con las tinciones

12. MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO

13. PARTE MECÁNICA QUE SE PUEDE DESMONTAR Estativo Tornillos de la platina Cabezal Oculares Condensador Objetivos

14. SISTEMA DE SOPORTE O ESTATIVO Anillo de ajuste de los oculares Oculares Tubo del ocular Cabezal Brazo Oculares Oculares Oculares Objetivos Tornillos reguladores de la platina Platina Palanca de cierre del diafragma Condensador Píe

15. SISTEMA DE ENFOQUE Freno Pinza Tornillo macrométrico Escala Tornillo micrométrico

16. PARTE ÓPTICA • Sistema de iluminación: fuente de luz, condensador y diafragma • Lentes: objetivos y oculares

17. SISTEMA DE ILUMINACIÓN: FUENTE DE LUZ • Suele ser una lámpara halógena de intensidad graduable • Se enciende y apaga con un interruptor • En el exterior puede tener un filtro Filtro Interruptor y graduación de la luz Lámpara

18. CONDENSADOR Y DIAFRAGMA • Condensador: concentra la luz de la lámpara en un punto de la preparación • Diafragma o iris (está dentro del condensador):si se cierra mejora el contraste, pero empeora la resolución

19. OBJETIVOS Están colocados en el revolver Tienen un sistema de amortiguación Un anillo coloreado indica los aumentos Son de 4, 10, 40 y 100 (inmersión) aumentos Rojo 4x Amarillo 10x Blanco 100x Azul 40x Amortiguación

20. LENTES: OCULARES Oculares Ajuste de la distancia interpupilar

21. Imagen real: • Las lentes convergentes se utilizan para obtener imágenes reales de los objetos, como las fotográficas o proyectores de cine; ó como parte de los sistemas amplificadores de imágenes ópticas en los microscopios; o bien para corregir defectos visuales de las personas hipermétropes en cuyo caso el ojo se caracteriza porque los rayos paralelos al eje forman su foco detrás de la retina.

22. Formación de la imagen virtual: Imagen grande rayos divergentes Al observar un objeto con una lupa, la imagen virtual se presenta aumentada, derecha y por detrás con respecto al objeto.

23. En resumen: • La imagen real está formada por rayos de luz reales que la atraviesan y se pueden proyectar en una pantalla, • Una imagen virtual, es la que parece estar formada por luz que proviene de la imagen, pero que en realidad no es atravesada por ningún rayo de luz.

24. ACEITE DE INMERSIÓN • Hoy no son de madera de cedro, sino sintéticos • Los hay de baja, media y alta viscosidad • Su empleo es imprescindible con el objetivo de inmersión (100x) para aumentar la refracción.

25. No poner la preparación al revés Regular la luz a intensidad media Ajustar condensador y diafragma al medio Empezar por poco aumento Mirando por fuera subir la platina Enfocar y ajustar Pasar al siguiente aumento y enfocar Al acabar retirar la preparación Apagar la luz MANEJO DEL MICROSCOPIO

26. CONSERVACIÓN DEL MICROSCOPIO • Ponerle su funda al guardarlo • Limpieza de lentes con papel de gafas • El exceso de xilol al limpiar las lentes desgasta el cemento • Usar pincel y pera de aire

27. TIPOS DE MICROSCOPIOS Microscopio Óptico Simple Lupa Microscopio óptico M.O. Normal Campo oscuro Contraste de fases Fluorescencia Microscopio Óptico Compuesto Tipos de microscopios Transmisión Barrido Digital Efecto túnel o cuántico Microscopio electrónico

28. PODER DE OBSERVACIÓN DEL MICROSCOPIO

29. MICROSCOPÍA DE CAMPO OSCURO Treponema pallidum

30. MICROSCOPÍA DE CONTRASTE DE FASES Células epiteliales 20 x

31. MICROSCOPIA DE FLUORESCENCIA Células epiteliales 200 x

32. MICROSCOPIO ELECTRÓNICO PRIMER MICROSCOPIO ELECTRONICO: Utilizó un haz de electrones en lugar de luz para enfocar la muestra. Posteriormente, en 1942 se desarrolla el microscopio electrónico de barrido (SEM).

33. MICROSCOPIO ELECTRONICO • Uiliza electrones en lugar de fotones para formar imágenes de objetos diminutos. • Capacidad de aumento muy superior a los microscopios convencionales (hasta 2 aumentos comparados con los de los mejores microscopios ópticos) debido a que la  longitud de onda de los electrones es mucho menor que la de los fotones "visibles". Funciona con un haz de electrones generados por un cañón electrónico de alto voltaje y focalizados por medio de lentes magnéticas ( al vacío, porque los electrones son absorbidos por el aire). Los electrones atraviesan la muestra, la amplifican por lentes magnéticas que forman la imagen sobre una placa fotográfica o sobre una pantalla que transfiere la imagen a la pantalla de un ordenador. Las imágenes sólo se ven en blanco y negro, porque no utilizan luz, pero se les puede aplicar color en el ordenador Su funcionamiento es semejante a un monitor monocromático.

34. ERNST RUSKA Características: Aumenta hasta 300,000 veces el tamaño de la imagen, toma las partes internas y separa los constituyentes de una muestra. • El microscopio electrónico de transmisión (T.E.M.) consiguió aumentos de 100.000 X. Fue desarrollado por Max Knoll y ErnstRuska en Alemania en 1931

35. Microscopio electrónico de barrido Imagen de un glóbulo rojo visto con microscopio electrónico de barrido.

36. LABORATORIO:MATERIAL NECESARIO: Cubre objetos Porta objetos Ahora el aceite no es de madera de cedro, sino sintéticos Los hay de baja, media y alta viscosidad Su empleo es imprescindible con el objetivo de inmersión (100x) Aceite de inmersión Para agrandamiento máximo especialmente en muestras permanentes

37. Preparación y clases de muestras; • El objeto a observar debe ser de pequeño tamaño, se • coloca sobre una lámina de vidrio llamada portaobjetos, • Se adhiere con agua, y se cubre con una laminilla de • vidrio llamada cubreobjetos. • Los preparados se pueden teñir con diferentes • colorantes como el azul de metileno, la violeta • de genciana, el lugol. translúcido (debe dejar • pasar la luz),  Muestra • La imagen que vemos no es la imagen real del objeto, sino que es una imagen • virtual, se encuentra aumentada y además, la vemos invertida. • Es decir que si observáramos una letra "a" (como la de la izquierda), la veríamos • como se muestra en la imagen de la derecha:

38. REPORTE: • En hojas con círculos • Lo más importante es el análisis y las conclusión. • Los esquemas pintados