1 / 20

Vitrifikacija jajnih stanica

Vitrifikacija jajnih stanica. Tamara Tramišak Milaković KBC Rijeka. Brrr. VIII hrvatski kongres o ginekološkoj endokrinologiji, humanoj reprodukciji i menopauzi s međunarodnim sudjelovanjem Hotel Neptun-Istra, Brijuni, 8. – 11.09.2011.god. Što je vitrifikacija ?.

charis
Download Presentation

Vitrifikacija jajnih stanica

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Vitrifikacija jajnih stanica Tamara Tramišak Milaković KBC Rijeka Brrr... VIII hrvatski kongres o ginekološkoj endokrinologiji, humanoj reprodukciji i menopauzi s međunarodnim sudjelovanjem Hotel Neptun-Istra, Brijuni, 8. – 11.09.2011.god.

  2. Što je vitrifikacija ? Vitrifikacija je revolucionarna tehnika zamrzavanja koja kombinira visoke koncentracije krioprotektanta s vrlo brzim hlađenjem... Pri čemu jajna stanica i okolna otopina postaju amorfna struktura slična staklu bez stvaranja kristala leda. (Herrero i sur. 2011)

  3. Kratka povijest vitrifikacije... KRIOPROTEKTANT ..... 1898. osnovna istraživanja o fizikalnom aspektu vitrifikacije, glicerol (Tammann) VITRIFIKACIJA .... 1937. pionirski rad - vitrifikacija kao metoda zamrzavanja (Luyet) ERITROCITI .... 1968. prva uspješna vitrifikacija eritrocita s krioprotektantom glicerolom (Rapatz i Luyet) ZAMETCI ... 1985. prva uspješna vitrifikacija mišjih zametaka, osnova vitrifikacije u embriologiji (Rall i Fahy) TRUDNOĆA I POROD.... 1999. iz VITRIFICIRANE humane oocite (Kuleshova i sur. 1999)

  4. Kliničke indikacije za zamrzavanje jajnih stanica očuvanje plodnosti kod onkoloških pacijentica privremeno nepostojanje spermija partnera etički razlozi ili zakonska regulativa donacija jajnih stanica odgođeno majčinstvo

  5. Zašto je teško zamrznuti/ vitrificirati jajnu stanicu ? • Plazma membrana slabije permeabilna za vodu i • krioprotektante • - Diobeno vreteno osjetljivo na promjene temperature • Dehidracija i rehidracija može narušiti segregaciju • kromosoma • Povećani rizik od starenja oocite zbog procesa zamrzavanja • Zamrzavanje narušava fiziologiju jajne stanice Rienzi i sur. 2010.

  6. Sporo zamrzavanje vs. vitrifikacija Sporo zamrzavanje Vitrifikacija • Potrebni su programirani • krio-aparati • Traje nekoliko sati • Niske koncentracije • permeabilnih krioprotektanata • Seeding • Nije potrebna posebna oprema • Traje cca. 30 minuta • Više koncentracije krioprotektanta • Veća brzina hlađenja • Veća brzina otapanja • Zahtijeva puno iskustva Saragusty i Arav 2011

  7. Sporo zamrzavanje vs. vitrifikacija • Smith i suradnici (2010) prospektivno istraživanje – usporedba sporog zamrzavanja i vitrifikacije. Preživljavanje oocita, oplodnja i učestalost kliničkih trudnoća veći nakon vitrifikacije (75% vs. 65%; 77% vs.67%; 38% vs. 13%) • Kim i suradnici (2010) nakon vitrifikacije jajnih stanica plodnih žena postiže se visoka uspješnost trudnoća (80%) • Ciotti i sur. (2009) repolimerizacija diobenog vretena brža je nakon vitrifikacije • Molinari i sur. (2010) tijekom sporog zamrzavanja zona pelucida gubi svoju strukturnu organizaciju i postaje tanja, a diobeno vreteno postaje manje organizirano

  8. Sporo zamrzavanje vs. vitrifikacija Bromfield i suradnici (2009) sporo zamrzavanje dovodi do rastavljanja diobenog vretena Grifo i Noves (2010) 23 pacijentice; uspješnost oplodnje i stvaranje blastocisti veće je nakon sporog zamrzavanja (oplodnja 84% vs. 75%, P=0,04; stvaranje blastocisti 52% vs. 35%, P=0,02) Martinez-Bourgos i sur. (2011) randomizirano istraživanje, sestrinske donorske jajne stanice, veće preživljavanje i brži povratak diobenog vretena nakon vitrifikacije (86,8% vs. 50%; 93,5% vs. 72%) Chen i Yang (2009) preživljavanje nakon vitrifikacije je veće, povratak diobenog vretena brži (2h)

  9. Sporo zamrzavanje vs. vitrifikacija Borini i sur. (2010) multicentrično istraživanje sporog zamrzavanja, 2209 svježih ciklusa, 940 sekundarnih ciklusa, sporo zamrznute jajne stanice imale lošiji ishod nego svježi ciklusi Rienzi i sur. (2010) 224 sestrinske oocite, nema razlike između svježih i vitrificiranih jajnih stanica u uspješnosti oplodnje ili razvoju zametaka Magli i sur. (2010) sporo zamrzavanje u odnosu na vitrifikaciju ima negativan učinak na potencijal jajnih stanica

  10. Osnove vitrifikacije Za uspješnu vitirifkaciju potrebni su: krioprotektant, odgovarajuća brzina hlađenja, dovoljno niska temperatura skladištenja, odgovarajuća brzina otapanja

  11. Zašto je jajnu stanicu teško zamrznuti? Jedna od najvećih stanica u tijelu sisavaca Sferični oblik - manji omjer površine i volumena od drugih stanica nepravilnog oblika Ima manju permeabilnost za krioprotektante u usporedbi sa zigotama i zametcima Osjetljive na fizičko/kemijska oštećenja (Kuwayama 2005)

  12. Uloga krioprotektanta • Započinje proces dehidracije stanice • Smanjuje točku ledišta otopine • Stvara vodikove veze s molekulama vode eliminirajući na taj način stvaranje leda • Smanjuje negativan učinak uzrokovan visokim koncentracijama soli • Saharoza ne ulazi u stanicu, ali uzrokuje dehidraciju stanice promjenom osmotskog tlaka

  13. Nosači (otvoreni sustav) Cryoleaf (Chian i sur. 2005) Open pulled straws (OPS) (Vajta i sur. 1998) Cryoloop (Lane i sur. 1999) Electron microscopic copper grids (Steponkus i sur. 1990) Thin glass surface (Arav 1992) Cryotop (Kuwayama i Kato 2000) Hemi-straw system (Vanderzwalmen i sur. 2000)

  14. Nosači (zatvoreni sustav) Cryotip (Kuwayama i sur. 2005) Closed pulled straw (Chen i sur. 2001) Cryotop CL (

  15. Sigurnost vitrifikacije Postoji rizik od unakrsne kontaminacije uzorka preko tekućeg dušika. To se može izbjeći: 1) upotrebom nosača zatvorenog sustava 2) pohranom u parama LN2 (istraživanja su u tijeku) 3) korištenjem tekućeg dušika steriliziranog UV-zrakama

  16. Kako odabrati jajnu stanicu za vitrifikaciju? Samo snažne i zdrave oocite biti će u stanju izaći na kraj sa izlaganjem krioprotektantima, mehaničkim i osmotskim stresom, promjenama temperature i medija, sa ponovnim oblikovanjem diobenog vretena i staničnom trodimenzionalnom organizacijom u kratkom vremenskom periodu Dismorfične jajne stanice (npr. akumulacija velikih vakuola, jako granulirana citoplazma ili vrlo veliko polarno tjelešce) su indikator narušene distribucije staničnih komponenti (Ubaldi i Rienzi 2008)

  17. Postupci vitirifikacije jajnih stanica učinjeni od 2009.g. do 31.07. 2011.g. na Specijalističkom zavodu za humanu reprodukciju Klinike za ginekologiju i porodništvo KBC Rijeka

  18. Ishodi sekundarnih ciklusa učinjenih u 2010. i prvoj polovici 2011. godine na Specijalističkom zavodu za humanu reprodukciju Klinike za ginekologiju i porodništvo KBC Rijeka 1 – % preživjelih jajnih stanica u odnosu na broj otopljenih jajnih st. 2 - % oplođenih jajnih stanica u odnosu na broj preživjelih jajnih st. 3 - % zametaka u ET u odnosu na broj oplođenih jajnih st. 4 - % prijenosa zametaka u odnosu na broj sekundarnih ciklusa 5 - % kliničkih trudnoća u odnosu na broj prijenosa zametaka

  19. Hvala...

More Related