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Media

Media. Classical Media 종류별 성분 비교. Classical Media 성분. Classical Media 성분.

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Presentation Transcript

  1. Media

  2. Classical Media 종류별 성분 비교

  3. Classical Media 성분

  4. Classical Media 성분 • 비타민(vitamins)- vitamin B-group (folic acid, biotin, pantothenate등)이 가장 많이 이용- 일부배지에는ascorbic acid (vitamin C)와 a-tocopherol (vitamin E)이 포함- 배지에 첨가되는 혈청은 주요한 비타민 원으로 작용- 비타민은 대사과정의 보조 인자로 작용하기 때문에 저농도의 비타민은 대사과정을 제한하여 세포 생존과 증식 속도에 영향을 미침

  5. 이온(ions)- 이온은 배지의 삼투압을 결정-Na+, K+, Mg2+, Ca2+, Cl-, SO42-, PO43-, HCO3- 등이 배지에 이용- Ca2+와 Mg2+는 부착과 cell aggregation의 보조 인자로 작용하기 때문에 부유 세포 배양에서는 감량 - 부유 세포를 위해서 개발된 RPMI 1640 media에는 Ca2+, Mg2+ 성분이 다른 배지들에 비해 감량되어 있음.

  6. 탄수화물(carbohydrate)- 대부분의 배지에서는 D-glucose가 L-glutamine과 함께 에너지원으로 작용- D-glucose :glycolysis를 통해서 pyruvate로 전환되고 pyruvate는 Krebs 회로를 통해서 에너지를 생산- 일부 세포주에서는Krebs 회로가 불완전하여 다른 대체 에너지원을 요구하는데, 이때 제일 많이 사용되는 것이 L-glutamine- D-glucose는 D-galactose, D-fructose, D-mannose와 같은 다른 탄수화물로 대체될 수 있는데, 대체된 탄수화물의 사용은 배지 내 젖산(lactic acid)의 축적을 방지하여 배지의 산성화를 막을 수 있음.

  7. Phenol Red- pH 지시제로 사용- 산성 pH에서는 황색, 중성 pH에서는 적색, 염기성 pH에서는 자색을 나타냄- phenol red는 스테로이드 호르몬(steroid hormone)과 유사하여 스테로이드 호르몬과 유사한 반응(steroid-like response)을 유발할 수 있음|- mammary tissue 배양시 이러한 스테로이드 호르몬 유사 반응(steroid-like response)를 방지하기 위해서 phenol red가 제거된 배지를 사용

  8. 기타- nucleoside, pyruvate, lipid와 같은 성분들이 첨가될수 있음- 이 성분들은 혈청 농도가 낮아질 때 특히 필요한 성분들이며, 동물 세포의 클로닝을 도와줌

  9. 혈청 • 혈청(serum)은 여러 물질이 혼합된 아주 복잡한 복합 산물 • 세포 배양 실험에서 혈청은 기본 배양 배지에 주요한 첨가제로 사용 • 혈청은 매우 광범위한 고분자 단백질, 저분자 영양분, 그리고 불용성 물질들에 대한 운반체 등을 함유하고 있으며    호르몬과 부착 인자와 같은 세포의 in vitro 성장에 필요한 기타 성분들을 함유 • 배양 배지에 완충력을MCDB media 등의 배지를 사용하여 혈청의 첨가 없이 세포의 성장을 유지할 수 있으며 대부분 이들 배지에 insulin, EGF제공하기도 하며 증식 환경에 있는 독성 성분에 부착 및 중화시키는 역할을 하기도 함.

  10. 혈청의 종류 • 우태혈청(Fetal Bovine Serum, FBS)과 우아혈청(Bovine Calf Serum, BCS) • 투석우태혈청(dialyzed fetal bovine serum) • 신생우아혈청(newborn calf serum, NCS) • Iron supplemented bovine calf serum • Charcoal stripped serum • De-lipidated serum • 사람 혈청(human serum)과 말혈청(horse serum, HS)

  11. 혈청의 구성 • 단백질(protein) • 호르몬 • 각종 대사물질 • 억제인자 • 각종 무기물질

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