Thrombophilia Testing

Thrombophilia Testing Robert Gosselin MT (ASCP), CLS

D-dimer-ul • Indică formarea cheagului • Indică degradarea cheagului • Testul D-dimereste de obicei folosit pentru a elimina suspiciune de: • Embolism pulmonar • Tromboză venoasă profundă • Coagulopatie de consum • Disecţie acută de aortă

D E E E D FIBRINA D D D D D tPA D-dimer Plasminogen Plasmina uPA FIBRINOGEN D D E E D D E Fragmentul Y Fragmentul X D Fragmentele D şi E Fragmentul D

XDP (+) Anticorpul anti-uman conjugat XDP¤ Test cromogenic  Spălare Spălare Microrezervor ce conţine anticorpul-ţintă XDP ¤ + Colorare + ¤ ¤ +    ¤ ¤ ¤ + + + + + + Cantitatea de culoare este proporţională cu cantitatea de XDP prezenţi. Rezultatul cantitativ se extrapolează de la curba de calibrare Incubare Incubare Reagenţi acoperiţi cu anti-XDP XDP  al pacientului Citirea instrumentului —modificări în densitatea optică             Cantitatea de lumină ce dispersează particulele este proporţională XDP prezenţi. Rezultatul cantitativ se extrapolează de la curba de calibrare      Incubare Rezervor de testare

Sensibilitate Real Pozitiv Reale Pozitive + False Negative Specificitate • Real Negativ • Reale Negative + False Pozitive Valoare Predictivă Negativă Reale Negative Toate Negative

Probabilitate Clinică pentru PE(embolism pulmonar) Semnele clinice şi simptomele DVT +3 Rata bătăilor inimii>100/min +1.5 Hemoptizia +1 Cancer avansat +1 Pacient ţintuit la pat(>3 zile) saumai mult(>12 săptămâni) +1.5 Manifestări anterioare de DVT sau PE +1.5 Probabilitatea diagnozei de PE +3 Scor: Scăzut <2 Moderat 2-6 Ridicat >6 Wells PS, et al Thromb Haemost 2000; 83:416-20.

Probabilitatea clinică pentru DVT (tromboză venoasă profundă) Cancer avansat +1 Paralizie, paresis, recent mulaj de gips la picior+1 Pacient ţintuit la pat (>3 zile) sau mai mult (>12 săptămâni)+1 Întreg picior este umflat+1 Umflătură la gambă (>3cm) în comparaţie cu celălalt picior +1 Edemă profundă mai mare decât în piciorul simptomatic+1 Vene colaterale superficiale (nonvaricoză)+1 Sensibilitate localizată de-a lungul sistemului venos profund+1 Manifestări anterioare ale DVT +1 Dx alternativă de DVT (sau probabilitate)-2 Scor: DVT improbabilitate <2 DVT probabilitate>2 Wells PS, et al Lancet 1997; 350:1795-98; N Engl J Med 2003;349: 1227-35

Algoritmul DVT Comprimare via US (ultrasonografie) Pozitivă Negativă Probabilitate scăzută CUS în Serie (5-8 zile) Prob Mod sau Ridicată Pozitivă Negativă 3 lunide tratament VTE Pozitiv VTE Negativ DVT Pozitivă DVT Negativă

Algoritmul PE Spiral CT sau Angiograma Pozitiv Negativ 3 luni de tratament VTE Pozitiv VTE Negativ PE Pozitiv PE Negativ

3.7 InnovanceD-dimer mg/L 0.8 Absenţa VTE Prezenţa VTE

Probabilitate de PE Probabilitate de DVT Innovance D-dimer, mg/L Scăzut Mod Ridicat Improbabil Probabil

Testul D-dimerpearls Nu e metoda cea mai eficientă (“silver bullet”) Metoda presupune sensibilitate extremă Metoda trebuie să folosească instrumente clinice de determinare a probabilităţii Nu e utilă în determinarea probabilităţii ridicate Nu are capacitate de a determina VTE la pacienţi în bază de OAC Rx Heparina poate rezulta în fals negativ Majoritatea studiilor excludHx anterior Existenţa unui număr minim de studii privind Disecţia acută de aortă

Testul obişnuit pentru Trombofilie Proteina C: de preferinţă-funcţională Proteina S: de preferinţă-funcţională Antitrombina: de preferinţă-funcţională V Leiden (sautestul de rezistenţă APC) Mutaţia 20210G (protrombină) MTHFR APS--- ulterior! Factorul VIII şi Fibrinogenul(altele??) Altele … Testarea moleculară Plasminogen, PAI-I, emitere de tPA, HCFII, TAFI, trombocite, etc

Proteina C-Amidolitică Venin de Viperidae şi Şarpe cu clopoţel Proteina C Proteina C Activată pNA-Peptidă Peptide + pNA

Proteina C-Amidolitică -Interferenţe Aprotinina inhibăaPC Fals Venin de Viperidae şi Şarpe cu clopoţel Proteina C Proteina C Activată pNA -Peptidă Peptide + pNA Trombolitica – Fals

Proteina C- Coagulare Venin de Viperidae şi Şarpe cu clopoţel Proteina C Proteina C Activată Plasmă săracă în Proteina C aPTT Prelungirea timpului de coagulare Inhibiţia FactorilorVaşiVIIIa

Proteina C – Coagulare –Interferenţe Aprotinina inhibă aPC Fals Venin de Viperidae şi Şarpe cu Clopoţel Pre-analitic Proteina C Proteina C Activată Plasmă săracă în Proteina C Fbgsau Factorul VIII mărite Fals aPTT Prelungirea timpului de coagulare Inhibiţia Factorilor VaşiVIIIa Heparină DTI Fals LA Fals Mutaţia V Leiden Fals

Proteina S– Coagulare Factorul Va + aPC Proteina S Inhibiţia Factorului Va Plasmă săracă în Proteina S Incubare + CaCl2 Prelungirea timpului de coagulare

PS Funcţională-Interferenţe Aprotinina inhibă aPC Fals Pre-analitic FactorulVa + aPC Proteina S Inhibiţia Factorului Va Plasmă săracă în Proteina S Incubare Fbgsau Factorul VIII mărite Fals Heparină DTI Fals + CaCl2 Mutaţia V Leiden Fals Prelungirea timpului de coagulare LA Fals

Proteina S**sau Proteina C (+) Anticorpul anti-uman conjugat al PC sau PS¤ Test cromogenic  Spălare Spălare Microrezervor ce conţine Ab captat Anti-PC Anti-PS ¤ + ¤ + ¤ Colorare +    ¤ ¤ ¤ + + + + + + Cantitatea de culoare este proporţională cantităţii de PC sau PS prezente. Rezultatul cantitativ se extrapolează de la curba de calibrare Incubare Incubare **Pentru PS: TotalăşiIndependentă (PEG pre-tratare a mostrelor ca să se precipite în afara PS) PS  a pacientului Reagenţi acoperiţi cu C4b PS+ anti-uman Citirea instrumentului —modificări în densitatea optică     +         +  Cantitatea de lumină ce dispersează particulele este proporţională cantităţii de PSindependentă prezentă. Rezultatul cantitativ se extrapolează de la curba de calibrare      Incubare Rezervor de testare

Testarea Antitrombinei AT + Heparină Complexul AT:Hep Factor de exces activat (sauXasau trombină) Cantitatea de culoare este invers proporţională cantităţii de AT prezentă. Rezultatul cantitativ se extrapolează de la curba de calibrare Complexul AT:Hep:Xa + Xa rezidual S2765 Peptide +pNA

Testarea AT: Interferenţe AT + Heparină Complexul AT:Hep DTI: Fals Factor de exces activat (sau Xasautrombină) Cantitatea de culoare este invers proporţională cantităţii de AT prezente. Rezultatul cantitativ se extrapolează de la curba de calibrare Complexul AT:Hep:Xa + Xa rezidual S2765 Heparina Rx Fals Peptide +pNA

Cauzele   PS sau PC Tromboză în faza acută Afecţiuni ale ficatului Antagonişti ai vitaminei K (analize funcţionale) Sindromul Nefrotic Stările inflamatorii (PS) Graviditate Rx Hormonal Rx L-asparaginază Impactul medicamentos APA Activitate a factorilor Considerente Pre-analitice

Testul de rezistenţă a APC aPTT modificat • Plasma săracă în Factorul V contribuie la sporirea specificităţii şi sensibilităţii aPTT Plasmă + Plasmă săracă în FxV Timp de coagulare #1 CaCl2 aPTT Plasmă + Plasmă săracă în FxV Timp de coagulare #2 CaCl2 + APC CT2 Raport : Raportul normal de obicei e >2.0 CT1

Rezistenţa APC: Interferenţe Pre-analitic aPTT Plasmă + Plasmă săracă în FxV Timp de coagulare CaCl2 Ca regulă, deviază sistematic – tendinţă spre raporturi mai mici cu APA. Pacientul ce administrează Xigrispoate obţine rezultate aPTT Plasmă + Plasmă săracă în FxV Timp de coagulare #2 CaCl2 + APC CT2 Raport: Raportul normal de obicei e >2.0 CT1

Thrombophilia Testing