1 / 14

Ayaz Najafov, İ brahim Bar ış , Esra Battalo ğ lu Bo ğ azici Ü niversitesi

PCR-SSCP Yöntemiyle, Türk Charcot-Marie-Tooth Hastalar ı n ı n MPZ, PMP22 ve Cx32 Genlerinin Mutasyon Analizi. Ayaz Najafov, İ brahim Bar ış , Esra Battalo ğ lu Bo ğ azici Ü niversitesi Moleküler Biyoloji ve Genetik B ölümü. CMT Nedir?.

efrat
Download Presentation

Ayaz Najafov, İ brahim Bar ış , Esra Battalo ğ lu Bo ğ azici Ü niversitesi

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. PCR-SSCP Yöntemiyle,Türk Charcot-Marie-Tooth HastalarınınMPZ, PMP22 ve Cx32 Genlerinin Mutasyon Analizi Ayaz Najafov, İbrahim Barış, Esra Battaloğlu Boğazici Üniversitesi Moleküler Biyoloji ve Genetik Bölümü

  2. CMT Nedir? • Charcot-Marie-Tooth (CMT) = Herediter Motor ve Duysal Nöropati (HSMN) • Görülme frekansı ~ 1/2500 • Distal kol ve bacak kas zayıflığı ve duysal bozukluklar • Genetiksel ve kliniksel olarak heterojen bir hastalıktır • 17 farklı gen • Otozomal baskın, otozomal çekinik veX-linked

  3. Gen-Hastalık

  4. 3 genin taranması • 51 hastanın subtype tanımlanması • MPZ, PMP22 ve Cx32 • PCR-SSCP • noktasal mutasyonlar

  5. PMP22 • 17p12-11.2 • ~40 kb = 2 intron ve 4 ekson • 160 aa / 22 kDa protein • 4 transmembran bölge • Miyelin proteinlerinin 5-10% • Schwannhücrelerinin ER’unda anlatılıyor • FarklılaşmışSchwann hücrelerinin Go fazında devamlılığı • Adhesyonda fonksiyon • Noktasal mutasyonlar ve gen kopya dozu

  6. MPZ • 1q22~23 • 7 Kb/ 6 ekson • 219 aa / ~28 kDa protein • 1 transmembran bölge • İmmunoglobulin ailesinin üyesi • Miyelin proteinlerinin 50-60% • Periferik sinir miyelinin yapısı ve fonksiyonu • Kültür hücrelerinde hemofilik adhesiyonu sağlıyor • Diğer Schwann hücresi proteinlerinin doğru yerlere dağıtılması

  7. Cx32 • Xq13.1 • 283 aa / ~32 kDa protein • 2 kodlamayan (alternatif spicing ile doku-spesifik anlatılıyor) ve 1 kodlayan ekson var • 4 transmembran bölge, 1 hücreiçi ve 2 hücredışı bölge ve termini • Gap junction proteinleri ailesi • Gap junctionlar’ın bozulması halinde, önemli hücreiçi pathway’ların bozuluyor

  8. Metotlar Hasta genomik DNA’sı Bir eksonun PCR ürünü 2% agarose gel check 8% non-denaturing acrylamide:bisacrylamide (29:1) gels SSCP boyası: Formamide, EDTA, BPB, XC + PCR ürünü 16 saat oda sıcaklığında10-15V/cm 0.6X TBE buffer Gümüş nitrat boyaması

  9. Sonuçlar

  10. Sonuçlar – Dizi Analizi

  11. Sonuçlar – Restriksiyon Analizi

  12. Sonuçlar • P126 no’lu hastada, Cx32 geninin ikinci eksonunda, ikinci hücredışı bölgesini etkileyen hemizigot 556 GA 186 glutaminelysine mutasyonu bulundu. • P180 no’lu hastanın Cx32 geninde yeni mutasyon çeşidi bulundu: 472 CA (Pro158Thr).

  13. Tartışma • 2/51, ~4% • henüz belirlenmemiş genetik bölgeler • SSCP tekniğinin mutasyon tespit edebilme yüzdesi • Gliserol (5%) bazı fragmanlar için olumlu, bazıları için ise olumsuz sonuçlar verdi.

  14. Referanslar • Baris I., 2002, “Short Tandem Repeat And Mutation Analyses In Turkish Charcot-Marie-Tooth Patients”, MS Thesis, Bogazici University, Department of Molecular Biology and Genetics. • Shapiro, H., J. P. Doyle, P. Hensley, D. R. Colman and W. A. Hendrickson, 1996, “ Crystal Structure of the Extracellular Domain from P0, the Major Structural Protein of Peripheral Nerve Myelin”, Neuron, Vol. 17, pp. 435-449. • Filbin, M. T., F. S. Walsh, B. D. Trapp, J. A. Pizzey and G. I. Tennekoon, 1990, “Role of Myelin P0 Protein as a Homophilic Adhesion Molecule”, Nature, Vol. 344, pp. 871-872. • Giese, K. P., R. Martini, G. Lemke, P. Soriano and M. Schachner, 1992 “Mouse P0 Gene Disruption Leads to Hypomyelination, Abnormal Expression of Recognition Molecules, and Degeneration of Myelin and Axons”, Cell, Vol. 71, pp. 565-576.

More Related