180 likes | 346 Views
Isozyme Markers. Växt material. Specifik infärgning. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10. Stärkelsegelelektrofores (SGE) – Polyakrylamidegelelektrofores (PAGE). Elektroforetisk analys av isozymvariation. Viktiga definitioner. Diploid växt. M onomerisk enzym
E N D
Växt material Specifik infärgning 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Stärkelsegelelektrofores (SGE) – Polyakrylamidegelelektrofores (PAGE) Elektroforetisk analys av isozymvariation
Monomeriskenzym (Enkel polypeptidekedja) Alleles A Locus-1 (gen 1) B AA AB BB homozygot heterozygot homozygot En gen (= ett locus) som kodar för ett monomerisk enzyme har endast två alleles per individ
Alleles – Loci Aconitase (ACO) Locus-1 A B AA AB BB AB A B Locus-2 AB BB AB AA Locus-3 A AA AA AA AA Aconitase
Bandningsmönster Aconitase
Dimeriskt enzym (två polypeptidkedjor) Alleles A Locus-1 B AA AB BB En gen (= ett locus) som kodar för ett dimemerisk enzyme har endast två alleles per individ
Dimerisk enzym • GPI – Glucose-6-phosphate isomerase a b Gpi-1 c K 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 K BB BB BB BC BB BC BB AB AB BB BB CC BB AB BB BB BB BB
Tetramerisk enzym(tre polypeptidkedjor) Alleles A Locus-1 B AA AB BB En gen (= ett locus) som kodar för etttetramerisk enzyme har endast två alleles per individ
Tetramerisk enzym DIA - Diaphorase a b
Fördelarna med isozymanalys Det finns ett direkt samband mellan skillnader i degenprodukter man studerar och skillnader på DNA-nivå Man studerar absoluta genetiska skillnader som är oberoende av miljön Graden av polymorfism kan variera men den är oftast hög hos korsbefruktade arter Enkel och billig
Nackdelarna med isozymanalys • Man studerar ett begränsat antal loci i förhållande till DNA-baserade metoder. • Allozymbandmönstren hos polyploida arterkan vara mycket svåra att tolka
Statistik Population 1 Population 2 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 BB AB AA BB AA AA AA AA AA AB BB AB AA BB BB AB AB BB AB BB AB AA AA AA AB AA AB BB BB BB
Population 1 Population 2 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 Allele frekvens F(allele A) + F(allele B) = 1 F(A) = 2 Ho (AA) + He F(B) = 2 Ho (BB) + He 2N 2N N= Antal individer Ho = Homozygotes He = Heterozygotes
F(allele A) + F(allele B) = 1 Pop 1 Pop 2 F(A) = 2 (4) + 6 = 14 = 0,47 F(A) = 2 (7) + 3 = 17 = 0,57 2x15 30 2x15 30 F(B) = 2 (5) + 6 = 16 = 0,53 F(B) = 2 (5) + 3 = 13 = 0,43 2x15 30 2x15 30 Population 1 Population 2 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
Statistisk bearbetning av resultaten BIOSYS-1 (Swofford & Selander 1989) (A computer program for the analysis of allelic variation in population genetics) Den absoluta mängden av genetisk variation - P = Frekvensen loci med genetisk variation - H = Heterozygoti Fördelningen av den totala genetiska variationen mellan och inom populationen Graden av genetisk likhet mellan populationer - D = “Genetic distance” BIOSYS-1 GENOTYPE FREQUENCY INPUT NOTU=2,NLOC=8,NALL=3 8(1X,A5)) ACO-1 ACO-2 ACO-3 ACO-4 MDH-2 PGD-1 PGD-2 PGM-1 STEP DATA: DATYP=2,NCOL=6,ALPHA; (6X,6(1X,2A1,1X,I2) Population 1 ACO-1 AA:50 ACO-2 BB:20 BC:30 ACO-3 AB:22 BB:28 ACO-4 BB:50 MDH-2 BB:49 BC:01 PGD-1 AA:50 PGD-2 AA:40 AB:10 PGM-1 BB:50 Population 2 ACO-1 AB:50 ACO-2 AB:20 BC:30 ACO-3 AB:22 BC:28 ACO-4 BB:50 MDH-2 BB:49 BC:01 PGD-1 AA:50 PGD-2 AA:40 AB:10 PGM-1 BB:50