Grand Oral E2M2 – 29-30 Juin 2009 UCBL

1. Étude des interactions fonctionnelles entre les glycoprotéines d’enveloppe F et HN, impliquées dans le mécanisme d’entrée cellulaire des virus parainfluenza humains et animaux. Jean-Christophe Le Bayon • VirPath • CNRSFRE 3011 Dr Manuel Rosa-Calatrava Pr Bruno Lina Grand Oral E2M2 – 29-30 Juin 2009 UCBL ED341 –E2M2

2. LES PARAINFLUENZA hPIV2 et NDV Famille : Paramyxoviridae Genre : Rubulavirus Avulavirus • Maladies respiratoires • Pas d’antiviraux • Virus enveloppé Ø 200nm • ARN négatif, simple brin Terrier et al. (2008) L’entrée dans la cellule est possible grâce aux GP F et HN

3. La fusion membranaire Cellular membrane N C F2 S Fusion peptide S HR1 HN F Extracellular domain F1 HR2 Transmembrane region Cytoplasmic tail N C F HN Takimotoet al. (2002) Viral envelope

4. ObjectiFs M2 • Caractérisation fonctionnelle de mutants de F de hPIV2 (expression de surface et activité fusogénique) • Mutation observée sur des souches variantes cliniques de hPIV-2 ou transposées d’un variant de PIV-5 • Méthodes • Analyse bioinformatique de F hPIV2 • Clonage des gènes F et HN et mutagénèse • Expression transitoire (cellules A549) • Cytométrie en flux et test de fusion intercellulaire • Rôle de ces mutations dans la fusion et dans l’interaction entre F et HN ?

5. Résultats de M2 • T96A: favorise l’activation par HN • I24P: F “indépendante” de HN • K133E: interaction entre F et HN et augmentation de la fusion • I294A: favorise l’activation par HN T96A K133E Tête I24P I294A Tige • 2 parties distinctes de la tête de F semblent être impliquées dans l’interaction F-HN

6. Objectifs de la thèse → Caractérisation des interactions fonctionnelles entre F et HN → Mieux comprendre le mécanisme d’entrée dans la cellule des virus parainfluenza → Développement potentiel de nouvelles molécules anti-virales

7. Projet doctoral Études des interactions F-HN Évaluation de l’activité des GP mutantes Interactions fonctionnelles Dr Manuel Rosa-Calatrava(CR1 - directeur de thèse) Dr JC Cortay (CR1) Gaëlle Cartet (technicienne) Pr Bruno Lina (PUPH – directeur du laboratoire) Organisation de surface et structure des GP

8. Caractérisation de la fusion • Méthodes • Expression de GP mutantes (WB, FACS) • Capacité fusogène des GP (Test de fusion intercellulaire luciférase, lipid-mixing) • Comportement des mutants dans un contexte pseudo-viral ou viral (VLP et génétique inverse, collaboration avec Dr Dimitri Lavillette – INSERM U758-ENSL) • Résidus impliqués dans le rôle fusogène de F ?

9. Étude des interactions F/HN • Méthodes • Construction de mutants de déletiondes GP • Interactions entre F et HN (Cross-Linking, coimmunoprécipitation) • → Domaines de F et HN impliqués dans l’interaction F et HN ? • → Domaines de F et HN permettant la modulation de l’activité de F ?

10. Organisation de surface et structure • Méthodes • Observation et analyse des VLP et virus (MET, cryoMET, collaboration avec Dr Daniel Thomas – Université Rennes I) • Analyse in silicodes mutations sur la structure des GP (collaboration avec Pr Gary Taylor, Dr Rupert Russell et Dr Olivier Terrier – Université de St Andrews, UK) • → Corrélation entre l’organisation de surface, la structure et l’activité fonctionnelle des GP ?

11. Projet doctoral Études des interactions F-HN Évaluation de l’activité des GP mutantes Interactions fonctionnelles Mécanismes d’entrée de PIV et développement d’antiviraux Organisation de surface et structure des GP

12. Projet Professionnel • Objectif doctoral • Élaborer et gérer un projet de recherche • Autres objectifs • Constitution d’un réseau professionnel • Doctorant conseil • Objectif post-doctoral • R&D laboratoire pharmaceutique • Activité de conseil