RIAM , an Ena/VASP and Profilin Ligand, Interacts with Rap1-GTP and Mediates Rap1-induced Adhesion

1. RIAM, an Ena/VASP and Profilin Ligand, Interacts with Rap1-GTP and Mediates Rap1-induced Adhesion Esther M. Lafuente, André A.F.L. van Puijenbroek, Mattias Krause, Christopher V. Carman, Gordon J. Freeman, Alla Berezovskaya, Erica Constantine, Timothy A. Springer, Frank B. Gertler and Vassiliki A. Boussiotis Developmental Cell, vol.7 585-595, October 2004

2. Introductie • Rap1 is GTPase uit Ras superfamilie • Rap 1 induceert integrine-gemedieerde celadhesie en veranderingen in actine cytoskelet • Mechanismen onbekend Dit artikel: RIAM geïdentificeerd als eiwit dat met Rap1-GTP interacteert

3. RIAM: • Interactie met Rap-1 GTP • Interactie met regulatoren actine cytoskelet • Inductie celspreiding en vorming lamellipodia • Inductie integrine-gemedieerde celadhesie • Inductie Rap1 gemedieerde cel–ECM adhesie • Localisatie Rap1 aan plasma membraan

4. Interactie met Rap1-GTPin vitro en in vivo

5. Celspreiding

6. Interactie met regulatoren actine-cytoskelet (1) VASP Profiline

7. Interactie met regulatoren actine-cytoskelet (2) RIAM vormt link tussen Rap1 en Profiline

8. RAP1 F-actine Overlay RIAM is nodig voor localisatie Rap1-GTP op het plasma membraan Control KD RIAM KD

9. RIAM induceert celspreiding en vorming lamellipodia F-actine RIAM Overlap

10. RIAM reguleert F-actine:G-actine verhouding

11. Celadhesie

12. RIAM induceert ß1- en ß2-integrine gemedieerde celadhesie

13. RIAM-KD verhindertRap1-GTP gemedieerde celadhesie

14. RIAM is een downstream effector van Rap1-GTP “data not shown”

15. Binding Ena/VASP-RIAM niet vereist voor RIAM-geïnduceerde celadhesie • RIAM bindt Ena/VASP eiwitten d.m.v. EVH1 bindingsmotieven • EVH1 motief op RIAM geblokkeerd • RIAM geïnduceerde adhesie onveranderd “data not shown”

16. RIAM, AF-6, RAPL (1) Alledrie mogelijke effectoren van Rap1-GTP: • RIAM: cel-ECM adhesie + celspreiding • AF-6: cel-cel adhesie (celjuncties) • RAPL: B cel-T cel adhesie immunologische synaps + cel-ECM adhesie

17. AF-6 RIAM Rap1-GTP RAPL RIAM, AF-6, RAPL (2)

18. AF-6 RIAM Rap1-GTP RAPL RIAM, AF-6, RAPL (2) Profiline

19. AF-6 RIAM Rap1-GTP RAPL RIAM, AF-6, RAPL (2) Ena/VASP Profiline

20. AF-6 RIAM Rap1-GTP RAPL RIAM, AF-6, RAPL (2) Actine cytoskelet Ena/VASP Profiline

21. AF-6 RIAM Rap1-GTP β1- β2-integrines RAPL RIAM, AF-6, RAPL (2) Actine cytoskelet Ena/VASP Profiline

22. AF-6 RIAM Rap1-GTP β1- β2-integrines RAPL RIAM, AF-6, RAPL (2) Actine cytoskelet Ena/VASP Profiline Fibronectine / ICAM-Adhesie

23. β1- β2-integrines RIAM, AF-6, RAPL (2) Actine cytoskelet Ena/VASP Profiline AF-6 RIAM Spa1 Rap1-GTP Fibronectine / ICAM-Adhesie RAPL

24. Discussie (1) • Meer bewijs dat RIAM downstream effector Rap1-GTP is *Spa1 en RIAM aanwezig  nog steeds adhesie • Kan RIAM zonder EVH1-domeinen aan Ena/VASP binden? *EVH1-domein op RIAM • Meer onderzoek doen naar eventueel verband RIAM en Ena/VASP bij celspreiding

25. Discussie (2) • Behoren de drie eiwitten tot dezelfde pathway? • Hoe kan RIAM actieve conformatie van β1 en β2 integrines induceren? • Hoe zorgt RIAM voor localisatie van Rap1 aan het plasma membraan

26. Vervolgonderzoek (1) Is er een verband tussen RIAM en RAPL bij de vorming van een immunologische synaps (IS)?

27. Vervolgonderzoek (2) - Is RIAM aanwezig bij de IS? - Fluorescentiemicroscopie - Bindt RIAM aan RAPL? - Immunoprecipitatie - Wat is het effect van RIAM op de IS? - RIAM overexpressie / RIAM-KD - idem in afwezigheid / overexpressie van RAPL

28. Vragen?