1 / 7

Крат Сергей, МБФ, гр. 4004 Руководитель: н.с. ЦНИЛ Першина А.Г.

Оптимизация условий экспрессии в бактериальной системе и очистки зеленого флуоресцентного белка ( Tag GFP 2 ). Крат Сергей, МБФ, гр. 4004 Руководитель: н.с. ЦНИЛ Першина А.Г. Актуальность. Оценка эффективности трансфекции и экспрессии ген етического материала в клетке

geraldine-salinas
Download Presentation

Крат Сергей, МБФ, гр. 4004 Руководитель: н.с. ЦНИЛ Першина А.Г.

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Оптимизация условий экспрессии в бактериальной системе и очистки зеленого флуоресцентного белка (TagGFP2) Крат Сергей, МБФ, гр. 4004 Руководитель: н.с. ЦНИЛ Першина А.Г.

  2. Актуальность • Оценка эффективности трансфекции и экспрессии генетического материала в клетке • Модельный белок для иммобилизации на наночастицах Fluorescent Proteins and Their Applications in Imaging Living Cells and Tissues, Chudacov et. Al, 2010

  3. TagGFP2 • Мономер • Флуоресценция (105% от EGFP) • Не агрегирует • Не токсичен • Быстро созревает • Фотостабилен • Не требует доп.факторов созревание флуорофора http://www.evrogen.ru/protein-descriptions/TagGFP2-description.pdf

  4. Задачи исследования • Провести трансформацию E.coli XL-blue плазмидой pQE30-TagGFP2 • Оптимизировать условия экспрессии TagGFP2в бактериальной системе • Выделить и очистить белок  TagGFP2 • Разработать методику определения концентрации белка с использованием флуориметра 

  5. Материалы и методы • Трансформация с использованием хлористого кальция (Маниатис, 1984) • Оптимизация экспрессии при варьировании концентрации IPTG(0.1мМ – 1мМ) и температуры (25-40°C) • Очистка белка с использованием Ni-NTA агарозы(Qiagen) • Определение концентрациифлуориметрическим (VersaFluor, Bio-Rad) и спекртофотометрическим методом (Лоури, Nanodrop 2000, Thermo scientific)

  6. Планируемые результаты • Будут подобраны оптимальные условия экспрессии, выделения и очистки флуоресцентного белка TagGFP2 • Будет получен высокоочищенный препарат TagGFP2

  7. Благодарю за внимание!

More Related