ALTERATION IN THE TRANSCRIPTIONAL ACTIVITY OF DOMINANT INTESTINAL BACTERIAL COMMUNITIES

1. ANALYSIS OF GUT MICROBIOTA IN DISCORDANT MONOZYGOTIC TWINS WITH IBD TO DISSECT THE INFLUENCE OF GENETIC DETERMINATION AND ENVIRONMENTAL TRIGGERS Lepage P.1, Rehman A.1, Spehlmann M.2, Zvirbliene A.3, Kupcinskas L.3, Raedler A.2, Ott S.1, Schreiber S.4 1Molecular Microbiology, Institute for Clinical Molecular Biology, Kiel, 2Gastroenterology Department, Asklepios WestKlinikum, Hamburg, Germany, 3Gastroenterology Department, Kaunas University of Medicine, Kaunas, Lithuania, 4Institute for Clinical Molecular Biology, Kiel, Germany ALTERATION IN THE TRANSCRIPTIONAL ACTIVITY OF DOMINANT INTESTINAL BACTERIAL COMMUNITIES IN INFLAMMATORY BOWEL DISEASE Rehman A., Lepage P., Ott S.J., Schreiber S. Molecular Microbiology, Institute for Clinical Molecular Biology, Kiel, Germany FAECAL BACTERIAL MOLECULAR PROFILES OF CROHN'S DISEASE PATIENTS DIFFER FROM THEIR HEALTHY RELATIVES AND MATCHED HEALTHY CONTROLS Joossens M.1, De Preter V.1, Vanhoutte T.2, Van Steen K.3, Huys G.2, Verbeke K.1, Vandamme P.2, Rutgeerts P.1, Vermeire S.1 1Gastroenterology E462, University Hospital Gasthuisberg, Leuven, 2Laboratory of Microbiology, Faculty of Sciences, 3Dept of applied mathematics and computer science, Ghent University Hospital, Ghent University, Gent, Belgium

2. ANALYSIS OF GUT MICROBIOTA IN DISCORDANT MONOZYGOTIC TWINS WITH IBD TO DISSECT THE INFLUENCE OF GENETIC DETERMINATION AND ENVIRONMENTAL TRIGGERS Analizar la microflora intestinal en gemelos monocigotos (Mz) discordantes para EII; conocer la influencia que ejerce la determinación genética; buscar especies que protejan al sano o dysbiosis en el enfermo. Métodos Seis pares de gemelos Mz discordantes para EEI; dos MZ-EC, 4 Mz-CU. Doce pares de gemelos sanos; seis Mz-S y 6 Dz-S Se toman biopsias de sigma y se construyen 36 librerías con sondas de DNA (16r-DNA). Se realizan secuencias para conocer las unidades taxonómicas y se asigna su parentesco mas cercano en familias y géneros. Resultados Existe diferencias en la composición bacteriana entre Mz-S y Dz-S. La familia dominante en Mz-S/EC fueron los Firmicutes, seguida por Bacteroidetes y Proteobacteria. En Dz-S y Mz-CU no existe familia dominante y es fluctuante entre hermanos Todos los pacientes con CU de gemelos Mz-CU tienen un aumento significativo del genero Escherichia (21,4%) vs. hermanos sanos (5,4%) y gemelos sanos (4,1). Se encontró mayor prevalecía de especies de la clase Clostridia en los todos los gemelos sanos y hermanos sanos de MZ-EC/CU vs. Gemelos con EII. (papel protectivo) Conclusión Existe una influencia genética sobre la microflora intestinal, aunque factores ambientales puede determinar la diversidad de las especies. La influencia de la microflora sobre la EII es mas obvio en la CU, aunque algunas especies bacterianas pueden jugar un papel protector en ambas. Se realiza la hipótesis de que % Escherichia en la CU se correlaciona con la disminución de la población de Firmicutes y esto conlleva a un fenómeno de dysbiosis.

3. ALTERATION IN THE TRANSCRIPTIONAL ACTIVITY OF DOMINANT INTESTINAL BACTERIAL COMMUNITIES IN INFLAMMATORY BOWEL DISEASE La dysbiosis solo describe una alternación en la composición de diferentes poblaciones de bacterias poco se conoce sobre la actividad de trascripción de la microflora intestinal. Métodos Diez pacientes con EC, 19 con CU y 10 controles sanos. Se toman biopsias de sigma y se construyen librerías con sondas de DNA (16r-DNA) y sonda r-RNA. Se realizan secuencias para conocer las unidades taxonómicas y se asigna su parentesco mas cercano en familias y géneros. Conclusión No solo existe una diferencia significativa en composición de la microflora intestinal de enfermos vs controles, también se aprecia diferencia significativa en la actividad de trascripción. Las especies bacterianas con mayor actividad son: Bacteriodetes y enterobacteriaceae. FAECAL BACTERIAL MOLECULAR PROFILES OF CROHN'S DISEASE PATIENTS DIFFER FROM THEIR HEALTHY RELATIVES AND MATCHED HEALTHY CONTROLS Se describe una dysbiosis en la EC, sin embargo no se ha descrito patógenos en la actualidad. Métodos 68 pacientes con EC, 81 sujeto sanos de 25 familias del afectos. 50 sujetos sanos de 9 familias. Extracción del DNA molecular de las heces y PCR-electroforesis. Conclusión Cinco bandas con diferencias significativas entre EC vs familiares y controles. Cuatro bandas menos % en la EC y una bc41más frecuente en la EC.

4. EFFICACY OF A THIRD ANTI-TNF MONOCLONAL ANTIBODY IN CROHN'S DISEASE AFTER FAILURE OF TWO OTHER ANTI-TNF Mozziconacci N.1, Vermeire S.2, Bigard M.3, Bouhnik Y.4, Hébuterne X.5, Louis E.6, Marteau P.7, Delchier J.8, Hagège H.9, Lamarque D.10, Metman E.11, Bellon S.12, Michiels C.13, Truong Tan N.14, Lémann M.15, Rutgeerts P.2, Colombel J.1, Allez M.15 1Gastroenterology, CHRU, Lille, France, 2Gastroenterology, University Hospital Gasthuisberg, Leuven, Belgium, 3Gastroenterology, CHU, Nancy, 4Gastroenterology, Hôpital Beaujon, Paris, 5Gastroenterology, CHU, Nice, France, 6Gastroenterology, CHU, Liège, Belgium, 7Gastroenterology, Hopital Lariboisière, 8Gastroenterology, Hopital Henri Mondor, Paris, 9Gastroenterology, CHIC, Créteil, 10Gastroenterology, Hotel Dieu, Paris, 11Gastroenterology, Tours, 12Gastroenterology, Avignon, 13Gastroenterology, Dijon, 14UCB Pharma, Nanterre, 15Gastroenterology, Hopital Saint-Louis, Paris, France Analiza la eficacia y tolerabilidad de un tercer anti-TNF, después de haber fracasado dos tratamientos con anti-TNF en la EC. Métodos Se recogen datos demográficos, efectividad, efectos adversos, duración del Rx y causas de la suspensión de los dos primeros tratamientos. La eficacia de un tercer anti-TNF es evaluado a las 6 semanas. Resultados 16 pacientes con EC. Infliximab (duración media 30+/-20meses) se suspendió en 8 por perdida de eficacia y en 8 por intolerancia. Adalimumab se utilizo como segundo Rx (duración media 4,8+/-6meses), se suspendió en 6 por falta de eficacia (1-4 inyecciones), intolerancia en 5 y perdida de eficacia en 5 casos (3-20meses) Como tercer anti-TNF se comienza con certolizumab, estando activa la enfermedad en todos los pacientes en el momento de recibir el Rx (más 2 con EPA y 2 con MEI). Se obtienen datos de 10 pacientes que reciben 3 dosis de certolizumab (0, 2 y 4S). A las 6 semanas 8/10 pacientes responden al tratamiento. Se suspende el tratamiento en las 6 primeras semanas en 5 por intolerancia (4) o efecto adverso grave (1), a las 8 semanas en uno por intolerancia. Conclusión Un tercer anti-TNF puede ser eficaz en pacientes con EC previamente tratado con otros dos anti-TNF.

5. Autologous Hematopoietic Stem Cell Transplantation in Patients With Refractory Crohn’s Disease YU OYAMA,* ROBERT M. CRAIG,*,‡ ANN E. TRAYNOR,* KATHLEEN QUIGLEY,* LAISVYDE STATKUTE,* AMY HALVERSON,§ MARY BRUSH,* LARISSA VERDA,* BARBARA KOWALSKA,* NELA KROSNJAR,* MORRIS KLETZEL,¶ PETER F. WHITINGTON,¶ and RICHARD K. BURT* Divisions of *Immunotherapy and ‡Gastroenterology, Department of Medicine, §Department of Surgery, and ¶Department of Pediatrics, Northwestern University Medical Center, Chicago, Illinois GASTROENTEROLOGY 2005;128:552–563 Autologous haematopoietic stem cell transplantation without CD34+ cell selection in refractory Crohn’s disease A Cassinotti, C Annaloro, S Ardizzone, F Onida, A Della Volpe, M Clerici, P Usardi, S Greco, G Maconi, G Bianchi Porro, G Lambertenghi Deliliers Gut 2008;57;211-217. IMMUNOMODULATORY EFFECTS OF AUTOLOGOUS STEM CELL TRANSPLANTATION IN REFRACTORY CROHN'S DISEASE: UPDATING THE MILAN EXPERIENCE WITHOUT CD34+ CELL SELECTION Ardizzone S.1, Cassinotti A.1, Clerici M.2, Onida F.3, Annaloro C.3, Trabattoni D.2, Della Volpe A.3, Schenal M.3, Lambertenghi Deliliers G.3, Bianchi Porro G.1 1Department of Clinical Science, Gastroenterology Unit, 2Chair of Immunology, L. Sacco University Hospital, 3Bone Marrow Transplantation Centre, Fondazione Ospedale Maggiore Policlinico, Mangiagalli e Regina Elena, University Hospital, Milan, Italy

6. OBJETIVOS Estudios pilotos fase I-II que investigan seguridad y eficacia del auto-trasplante de células germinales hematopoyeticas (HSCT) en pacientes con enfermedad de Crohn refractaria. METODOS I Selección del paciente: Enfermedad de Crohn reconocida refractaria menores de 60 años con CDAI >250-400. Se excluyen paciente con problemas cardiacos, respiratorios, renales, hepáticos y hematológicos. También se excluyen los pacientes con infección activa, megacolon y perforación. Todos los pacientes se someten a estudios de TI y colonoscopia 6 semanas antes del trasplante. Movilización de células germinales: Se realiza con ciclofosfamida y factor estimulante de colonias de granulocitos. Cuando leucocitos >1000/ul se realizan leucoaferisis hasta conseguir CD34+ (2-3X106 /kg peso) El injerto (HSCT) se crio-preservan hasta su trasplante.

7. METODOS II Condicionamiento: Se realiza con ciclofosfamida 4 dias y globulina antitimocitos 3 dias. Se trasfunde las células germinales tras ultima dosis de ciclofosfamida y a las 48h. Factor estimulante de colonias de granulositos se administra hasta conseguir recuento de neutrofilos >500. Cuidados del paciente Planta especial. Antibióticos, antimicóticos, antivirales, NTP, todo tratamiento de la enfermedad se suspende salvo corticoides. Valoración de los resultados Éxito del Injerto: 3 días consecutivos con neutrofilos>500, plaquetas>20,000. Toxicidad. 3, 6 y 12 meses: historial medico, CDAI, CCSI, Estudios endoscopios, radiológicos, analíticas. Remisión CDAI<150

8. RESULTADOS 12 pacientes CDAI de 291 (251-358), seguimiento: 18,5 (7-37) meses 6 pacientes CDAI de 319 (272-345), seguimiento: 13.5 (6–20) meses Toxicidad Solo fiebre por neutropenia o por enfermedad de base. No infecciones documentadas. Un paciente con S. de Mallory-Weis. Dos pacientes con fiebre prolongada. Uno con bacteriemia a los 15 meses de trasplante por catéter central. Un paciente resección de ID por estenosis fibrotica. Un paciente con gastroenteritis severa a la 8 semanas. Absceso perianal, pericarditis, macro-hematuria en el condicionamiento. Supervivencia Seguimiento: 18,5 (7-37) meses, 11/12 viven. 13.5 (6–20) meses, 6/6 viven.

10. Respuesta de la Enfermedad: Mejoría de parámetros bioquímicas, hematológicos, calidad de vida y endoscopicos. Recidivas en dos pacientes a los 15 meses y 4 meses. 14/17 sin tratamiento de mantenimiento. Mejoría de lesiones perianales y fístulas.

11. Los resultados de los análisis inmunológicos al año del trasplante aprecia: disminución de la producción TNF-alpha y IL-I2 y un aumento de células T reg CONCLUSIONES El auto-trasplante de células germinales hematopoyeticas en pacientes con enfermedad de Crohn refractaria es seguro y eficaz.