Anti-doping e Doping Genetico

1. Anti-doping e Doping Genetico RAFAEL C.GEISS SANTOS R1 MEDICINA ESPORTIVA 14/09/2012

2. Introducao • O que e doping? • Como e quando se avalia? • Quais substancias? • De quem e a culpa? • Por quanto tempo? • Uso terapeutico? • Novos metodos de doping Etc…

3. COI The International Olympic Committee Anti-Doping Rules applicable to the Games of the XXX Olympiad, London 2012

4. Artigo 2 º do Código se aplica a determinar a violação das regras antidopagem, com as seguintes alterações: • (A) Posse de Substâncias e Métodos Proibidos • (A.1) posse por um atleta de uma substância proibida ou de um método proibido, a menos que o Atleta estabelece que a posse decorre de uma isenção para uso terapêutico concedido em conformidade com o artigo 3.2 (Uso Terapêutico) • (A.2) A posse de uma substância proibida ou de um método proibido pela equipe do Atleta, • Pessoal em conexão com um atleta, competição ou treinamento, a menos que o Atleta ou Pessoal de Apoio estabeleça que a posse decorra do Uso Terapêutico.

5. A Lista Proibida • Publicação, incorporação e Revisão da Lista de Substâncias Proibidas • Estas normas incorporam a Lista Proibida publicada pela WADA de acordo com o artigo 4.1 do Código em vigor durante o período do Jogos Olímpicos de Londres. • Os CONs são responsáveis ​​por garantir que suas delegações, incluindo os seus atletas, são cientes da Lista de Substâncias Proibidas. • A ignorância da Lista de Substâncias Proibidas não constitui qualquer desculpa qualquer para qualquer participante a qualquer título, Jogos Olímpicos de Londres.

6. Uso Terapêutico • A Comissão Médica do COI nomeará uma comissão de pelo menos três médicos (o "TUEC") • WADA, a pedido de um atleta, o COI ou por sua própria iniciativa, poderá rever a concessão ou negação de qualquer TUE a um atleta. • Se a WADA determina que a concessão ou negação de uma TUE não cumpriu com o Padrão Internacional para Isenção de Uso Terapêutico então a AMA poderá reverter essa decisão. As decisões sobre TUE estão sujeitos a novo recurso, tal como previsto no artigo 11.

7. Seleção de atletas a serem testados • O COI, em consulta com o LOCOG e as respectivas federações internacionais, determina o número de testes a serem realizados durante o Período do Jogos Olímpicos de Londres. • Uma quantidade significativa de testes devem ser alvo de teste e de outros testes serão determinados por sorteio.

8. Análise de amostras • Armazenamento de amostras e análise de amostras em atraso devem ser armazenados de forma segura no laboratório ou de outra forma dirigido pelo COI e pode ser estudada. • Conformidade com o artigo 17 do Código, a propriedade das amostras é investido no COI por oito anos. • Durante este período, o COI terá o direito de re-analisar as amostras, sendo certo que as normas internacionais, como eles podem ser alterados ao longo do tempo, aplicável, se necessário. • Qualquer violação da regra anti-doping descoberto como um resultado da mesma deve ser tratado de acordo com essas regras.

9. Após este período de oito anos, e desde que o atleta tenha dado a sua / seu consentimento por escrito, no momento da coleta das amostras, a propriedade das amostras devem ser transferidas para o laboratório para fins de pesquisa, desde que todos os meios de identificação dos atletas serão removidos e destruídos e que a prova desta destruição deve ser fornecida ao COI.

10. Notificar atleta ou outras pessoas interessadas da violação da regra anti-doping: • O presidente do COI ou uma pessoa por ele designada deve notificar imediatamente o Atleta ou outra pessoa em causa, os Atleta ou outra pessoa chefe de missão, a Federação Internacional em causa e um representante do Programa de Observadores Independentes de: • a) o resultado analítico adverso; • b) o direito do atleta de solicitar a análise da amostra B ou, na falta desse pedido, que a análise da amostra B pode ser considerada renúncia; • c) da data prevista, hora e local para a análise da amostra B, se o atleta optar por solicitar uma análise da Amostra B ou se o COI escolhe ter a amostra B analisada; • d) o direito do atleta e / ou representante do atleta para participar da abertura da amostra B e análise se tal análise for solicitada; • e) O direito do atleta de solicitar cópias do pacote de laboratório A e B da amostra, que inclui informações como exigido pela Norma Internacional para Laboratórios; • Exercício do direito de ser ouvido:

11. The World Anti-DopingCode THE 2012 PROHIBITED LIST INTERNATIONAL STANDARD

12. SUBSTANCES AND METHODS PROHIBITED AT ALL TIMES(IN- AND OUT-OF-COMPETITION) • S0. NON-APPROVED SUBSTANCES • S1. ANABOLIC AGENTS • Anabolic Androgenic Steroids (AAS) • Endogenous** AAS when administered exogenously • Other Anabolic Agents, including but not limited to: • Clenbuterol, selective androgen receptor modulators (SARMs), tibolone, zeranol, zilpaterol.

13. S2. PEPTIDE HORMONES, GROWTH FACTORS AND RELATED SUBSTANCES • 1. Erythropoiesis-Stimulating Agents [e.g. erythropoietin (EPO), darbepoetin (dEPO), hypoxia-inducible factor (HIF) stabilizers, methoxy polyethylene glycol-epoetin beta (CERA), peginesatide (Hematide)]; • 2. Chorionic Gonadotrophin (CG) and Luteinizing Hormone (LH) in males; • 3. Insulins; • 4. Corticotrophins; • 5. Growth Hormone (GH), Insulin-like Growth Factor-1 (IGF-1), Fibroblast Growth Factors (FGFs), Hepatocyte Growth Factor (HGF), Mechano Growth Factors (MGFs), Platelet-Derived Growth Factor (PDGF), Vascular-Endothelial Growth Factor (VEGF)

14. S3. BETA-2 AGONISTS • except salbutamol (maximum 1600 micrograms over 24 hours), formoterol (maximum 36 micrograms over 24 hours) and salmeterol when taken by inhalation in accordance with the manufacturers’ recommended therapeutic regime. • S4. HORMONE AND METABOLIC MODULATORS • S5. DIURETICS AND OTHER MASKING AGENTS

15. PROHIBITED METHODS • M1. ENHANCEMENT OF OXYGEN TRANSFER • 1. Blood doping, including the use of autologous, homologous or heterologous blood or red blood cell products of any origin. • 2. Artificially enhancing the uptake, transport or delivery of oxygen, including, but not limited to, perfluorochemicals, efaproxiral (RSR13) and modified haemoglobin products (e.g. haemoglobin-based blood substitutes, microencapsulated haemoglobin products), excluding supplemental oxygen.

16. M2. CHEMICAL AND PHYSICAL MANIPULATION • 1. Tampering, or attempting to tamper, in order to alter the integrity and validity of Samples collected during Doping Control is prohibited. These include but are not limited to urine substitution and/or adulteration (e.g. proteases). • 2. Intravenous infusions and/or injections of more than 50 mL per 6 hour period are prohibited except for those legitimately received in the course of hospital admissions or clinical investigations. • 3. Sequential withdrawal, manipulation and reintroduction of any quantity of whole blood into the circulatory system.

17. M3. GENE DOPING • The following, with the potential to enhance sport performance, are prohibited: • 1. The transfer of nucleic acids or nucleic acid sequences; • 2. The use of normal or genetically modified cells.

18. SUBSTANCES AND METHODSPROHIBITED IN-COMPETITION • S6. STIMULANTS • S7. NARCOTICS • S8. CANNABINOIDS • S9. GLUCOCORTICOSTEROIDS

19. SUBSTANCES PROHIBITED IN PARTICULAR SPORTS • SUBSTANCES PROHIBITED IN PARTICULAR SPORTS • P1. ALCOHOL • Alcohol (ethanol) is prohibited In-Competition only, in the following sports. Detection will be conducted by analysis of breath and/or blood. The doping violation threshold (haematological values) is 0.10 g/L. • • Aeronautic (FAI) • • Archery (FITA) • • Automobile (FIA) • • Karate (WKF) • • Motorcycling (FIM) • • Powerboating (UIM)

20. P2. BETA-BLOCKERS • Unless otherwise specified, beta-blockers are prohibited In-Competition only, in the following sports. • • Aeronautic (FAI) • • Archery (FITA) (also prohibited Out-of-Competition) • • Automobile (FIA) • • Billiards (all disciplines) (WCBS) • • Boules (CMSB) • • Bridge (FMB) • • Darts (WDF) • • Golf (IGF) • • Ninepin and Tenpin Bowling (FIQ) • • Powerboating (UIM) • • Shooting (ISSF, IPC) (also prohibited Out-of-Competition) • • Skiing/Snowboarding (FIS) in ski jumping, freestyle aerials/halfpipe and snowboard halfpipe/big air

21. “Gene Doping”

22. Recentes avanços biotecnológicos permitiram a manipulação de seqüências genéticas para o tratamento de diversas doenças, em um processo chamado de terapia de gene/genética. • No entanto, o avanço da terapia genética, abriu a porta para a possibilidade de utilizar a manipulação genética (GM), para melhorar o desempenho atlético. • Em "doping genético" , sequências genéticas exógenas são inseridos em um tecido específico, alterando a atividade do gene celular ou que conduzam à expressão de um produto protéico.

23. Os genes exógenos com maior probabilidade de ser utilizados para a dopagem de genes incluem a eritropoietina (EPO), factor de crescimento endotelial vascular (VEGF), insulina como factor de crescimento de tipo 1 (IGF-1), os antagonistas da miostatina e endorfina.

24. No entanto, muitos outros genes poderiam também ser utilizados, tais como os envolvidos nas vias metabólicas da glicose. • Porque o doping genético seria muito difícil de detectar, é inerentemente muito atraente para aqueles que buscam vencer a todo custo.

25. No passado, o doping e trapaça no esporte foram habilitados por avanços na farmacologia e fisiologia. • Agora, os avanços na genética molecular têm dado origem ao potencial de melhorar várias características humanas, incluindo o desempenho esportivo com o uso da tecnologia GM

26. A expressão genética é regulada principalmente por dois mecanismos principais: • a) mudanças na estrutura do DNA e • b) o controle direto sobre os processos de transcrição e tradução.

27. Através epigenética, o grau de transcrição de genes é alterada, sem alterações na sequência de ADN • Também de grande importância, as mutações promovem alterações na sequência de nucleotídeos do gene e podem inviabilizar o processo de transcrição, ou gerar um novo produto, diferente do original • O segundo mecanismo é composto de moléculas de repressao e inducao, fatores de transcrição, intensificadores e modificadores pós-transcricionais • Assim, algumas alterações no processo regulador pode resultar num aumento ou diminuição de concentração do produto do gene.

28. A Agência Mundial Anti-Doping (WADA) considera doping genético como o uso de agentes farmacológicos ou biológicos que alteram a expressão gênica, ou a transferência de células ou elementos genéticos (DNA e RNA)

29. algumas mudanças na expressão de genes são potencialmente capazes de aumentar o desempenho desportivo, em um número de maneiras.

31. produção de eritrócitos aumentada e melhorada a transferência de oxigénio • fígado visando aumentar Cori ciclo de lactato de remoção cinética e metabolismo energético • síntese de eritropoietina (EPO) • células do miocárdio para melhorar o débito cardíaco, e no músculo esquelético de segmentação para influenciar a qualidade da fibra, percentagem, estrutura do sarcomero, o número de mitocôndrias, enzimas glicolíticas / glicogénese, e o número de capilares do músculo • Pode até ser possível atingir áreas neurológicas, a fim de aumentar a tolerância à dor

32. O que e quais deveriam ser os limites sobre o uso da ciência para promover o desempenho atlético? • desportistas devem ser permitido usar terapia genética para o tratamento de doenças, mesmo que isso resulta em um melhor desempenho? • A tecnologia GM ameaça minar o espírito do esporte?

33. Os genes candidatos para uso em doping genético • Eritropoietina: • aumento na produção de energia pelo metabolismo aeróbio. Fattoriet al. (29) analisaram a eficácia da administração intramuscular de o gene de EPO com a aplicação de pulsos eléctricos para optimizar o processo de transdução. • O gene foi electro-injetado em ratos, coelhos e macacos para testar a produção de proteína e de efeitos biológicos. • O estudo concluiu que o gene EPO injetado produz níveis mais elevados de circulação de EPO e um efeito mais pronunciado do que gene endógeno, em todas as espécies testadas, demonstrando assim um grande potencial em abordagens de terapia genetica.

34. Fator de crescimento vascular endotelial • Em dopagem genetica, várias cópias do gene que codifica para o VEGF devem ser inseridas dentro do músculo, provavelmente utilizando vetores virais. • Assim, se bem sucedido em atletas, a microcirculação muscular seria estimulada e a oferta de oxigênio para os músculos aumentaria

35. Insulin-like Growth Factor tipo 1: aumento no crescimento muscular e diferenciação • Em dopagem gene, múltiplas cópias do gene que codifica para IGF-1 pode ser inserida no músculo esquelético, promovendo um aumento da massa muscular devido a hipertrofia de células musculares. • Esta inserção de genes somáticos pode ser conseguida através do uso de dois vectores alternativos: plasmídeos ou vírus. • Os plasmídeos representam o método menos dispendioso, mas também o menos eficiente. • Os vectores virais, amplamente utilizados na terapia de gene, ativamente inserem o ADN exógeno no genoma da célula alvo.

36. Antagonistas da miostatina: aumento na hipertrofia muscular e hiperplasia • miostatina, um membro da superfamília do fator de transformacao do crescimento (TGF)-A, é um regulador negativo do crescimento do músculo esquelético e da diferenciação, onde a sua expressão e predominante • Várias substâncias bloqueiam atividade inibitória da miostatina, com promoção do crescimento e diferenciação muscular. Importante entre estas substâncias são folistatina; todos têm a capacidade de ligar-se a miostatina, tornando-a indisponível para a sua função inibitória

37. Endorfina e encefalina: aumento da resistência a dor • A vantagem de uma maior resistência à dor trouxe vários genes candidatos em foco para uso potencial em terapia génica (para dor clínica) ou doping genético. • Os genes que codificam endorfina e encefalina são candidatos proeminentes neste contexto. • As moléculas expressas são neuropéptidos que se ligam a receptores opióides, promovendo efeitos analgésicos e, portanto, o alívio da dor,. • A fim de aumentar o limiar da dor, as cópias desses genes podem ser inseridas, com a expressão sendo dirigida para o sistema nervoso

38. Detecção???

39. A detecção do gene de dopagem é provável que seja difícil, embora possa ser realizado por um certo número de abordagens disponíveis, recorrendo tanto a métodos directos ou indirectos (51). • Os métodos diretos envolvem a detecção de proteínas recombinantes ou vetores de genes de inserção (por exemplo, vírus ou plasmídeos). • Os métodos indirectos dependem da detecção de alterações de assinaturas associadas com doping gene: por exemplo, alterações do sistema imunitário após a transferência de genes, ou alterações no transcriptoma ou proteoma de um tipo particular de célula.

40. Lasne et al. mostraram algumas diferenças estruturais entre EPO endógeno e recombinante, através do seu comportamento diferente isoeléctrico. • Uma outra possibilidade para a detecção directa baseia-se no uso de testes moleculares para distinguir o ADN genomico de DNA complementar (cDNA), utilizando técnicas tais como a reação em cadeia da polimerase (PCR) ou Southern blotting

41. Referencias: • 1.Braz J Med Biol Res, December 2011, Volume 44(12) 1194-1201. The use of genes for performance enhancement: doping or therapy? R.S. Oliveira, T.F. Collares, K.R. Smith, T.V. Collares and F.K. Seixas • 2. The International Olympic Committee Anti-Doping Rules applicable to the Games of the XXX Olympiad,London 2012 • 3. Wada 2012 • 4. Alternative medicine and doping in sports. Australasian Medical Journal [AMJ 2012, 5, 1, 18-25] • 5. Gene Doping. Netherlands Centre For Doping Affairs. (NECEDO)