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FPLC (Fast Protein Liquid Chromatography)

FPLC (Fast Protein Liquid Chromatography). 銘傳大學 生物科技學系. 儀器外觀. 此為 FPLC 外觀 FP 可 解釋為 Fast protein 液相層 析或是 Fast performance 液 相層析，原理同 HPLC 皆 是作分離之用，不同的是 它不用 HPLC 高壓推動， 壓力較低，且更注重純化 收集，廣泛適用於蛋白質 的分離純化。. 層析 原理.

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FPLC (Fast Protein Liquid Chromatography)

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Presentation Transcript

  1. FPLC (Fast Protein Liquid Chromatography) 銘傳大學 生物科技學系

  2. 儀器外觀 此為FPLC外觀FP可 解釋為Fast protein液相層 析或是Fast performance液 相層析，原理同HPLC皆 是作分離之用，不同的是 它不用HPLC高壓推動， 壓力較低，且更注重純化 收集，廣泛適用於蛋白質 的分離純化。

  3. 層析原理 • 層析系統的兩個主要組成為 固定相(stationary phase) 及 流動相(mobile phase)，二者各有不同的極性或非極性強度；樣本分子因其自身極性的強弱，與此二相之親和力不同。 與固定相親和力大者，易留滯原地； 與流動相親和力大者，易隨流動相移動，因而達成分離的目的。  

  4. 管柱類型 離子交換介質 疏水性層析 分子量大小 反相層析 特殊結合型 親和層析

  5. 蛋白質的鹽析 • 中性鹽對蛋白質的溶解度有顯著影響，一般在低鹽濃度下隨著鹽濃度升高，蛋白質的溶解度增加，此稱鹽溶；當鹽濃度繼續升高時，蛋白質的溶解度不同程度下降並先後析出，這種現象稱鹽析，將大量鹽加到蛋白質溶液中，高濃度的鹽離子（如硫酸銨的SO4和NH4)有很強的水化力，可奪取蛋白質分子的水化層，使之「失水」，於是蛋白質膠粒凝結並沉澱析出。鹽析時若溶液pH在蛋白質等電點則效果更好。由於各種蛋白質分子顆粒大小、親水程度不同，故鹽析所需的鹽濃度也不一樣，因此調節混合蛋白質溶液中的中性鹽濃度可使各種蛋白質分段沉澱。

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