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Immunophénotypage des SMD

Immunophénotypage des SMD. Jean Feuillard - 5èmes Journées du GFM – Rouen – 17 juin 2004. Groupe hétérogène d’hémopathies Atteinte clonale d’une cellule souche médullaire capable de différenciation. richesse médullaire normale ou augmentée. apoptose intra-médullaire. anomalie qualitative.

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Immunophénotypage des SMD

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Presentation Transcript

  1. Immunophénotypage des SMD • Jean Feuillard - 5èmes Journées du GFM – Rouen – 17 juin 2004

  2. Groupe hétérogène d’hémopathies • Atteinte clonale d’une cellule souche médullaire capable de différenciation richesse médullaire normale ou augmentée apoptose intra-médullaire anomalie qualitative anomaliequantitative cytopénies périphériques anomalies cytologiques des cellules de la moelle et du sang

  3. Classification OMS

  4. Les outils du diagnostic • Clinique • Cytologie • Cytogénétique CFM et MDS ?

  5. Déc 98 - Avril 2002: 1ère étude Mars 2002: Réunion consensus: définition des objectifs de la 2ème phase Contact GFM / Registre Mai 2002: Réunion GFM Nice, présentation résultats du GEIL Juin 2002: Présentation du registre GFM au GEIL Octobre 2002: GOELAMS Novembre 2002: Décembre 2002: consensus technique Janv. 2003  faisabilité Les différentes étapes

  6. Protocole consensus (19 décembre 2002) • Jean-Claude CAPIOD et Nicolas GUILLAUME (CHU Amiens) • Rémi LETESTU (Hôpital Avicenne, Bobigny) • Françoise PICARD et Charlotte LACRONIQUE-GAZEILLE (Hôpital Cochin, Paris) • Marc MAYNADIE (Dijon) • Bernard HUSSON (Haine St Paul, Belgique) • Yvan CORNET (Yvoir, Belgique) • Pascal LEPELLEY (Lille) • Jean FEUILLARD et Franck TRIMOREAU (Limoges) • Hélène JOUAULT (Hôpital Henri Mondor, Paris) • Sophie CHOTARD et Daniéla OLARO (Saint Etienne)

  7. 2ème phase de l’étude immunophénotypique des MDS • 1ère partie • En coordination avec le GFM: étude prospective • Intérêt de la quantification • Numération des CD34 • Calibration de la fluorescence • Intérêt du CD34, CD36, CD71 et CD117 • 2ème partie • Au sein du GEIL • Relation immunophénotype et différenciation

  8. Panel de marquage Panel Restreint Registre GFM (1ère partie) Panel étendu (2ème partie)

  9. Le site de Limoges • Calibration de Fluorescence • Numération des CD34 dans le sang • Etude des marqueurs CD34, CD36, CD117, CD71 • Relation Immunophénotype / Différenciation • Faisabilité des marquages 5 couleurs sur le sang

  10. Cytométrie en flux : principes

  11. Suivi de la stabilité de la mesure de fluorescence Utilisation de billes

  12. Résultats de l’utilisation des billes • Stabilité des images dans le temps • Comparaison possible des cytogrammes

  13. Quantification des cellules CD34+ dans le sang

  14. Numération des cellules CD34+ dans le sang Cellules présumées blastiques: CD45faibles Cellules blastiques: CD34+

  15. Relation Immunophénotype et différenciation dans les SMD

  16. Les patients • 12 femmes, 20 hommes, • Age moyen = 82 ans • Hb: 10,9g/dL • Plaquettes: 157 G/L • 6 AR, 1 ASIA, 11 AREB, 3 AREB-T, 11 LMMC • Cytogénétique: anomalie dans 44% des cas

  17. Etude sur les cellules médullaires • CD34 : marqueur des cellules souches • CD45 : marqueur pan-leucocytaire

  18. Etude de la maturation granulo-monocytaire dans la moelle normale • Détermination des graphes de maturation • Etude des cytogrammes pour 20 marqueurs à la surface cellulaire

  19. Expression anormale de marqueurs par CMF • Granuleux: CD36 (16 cas) CD71 (8) CD56 (4) CD19 (1) CD14 (1) • Monocytes: CD56 (19 cas) CD19 (1 cas)

  20. Expression de marqueurs d’immaturité • Granuleux: CD34 (2 cas), CD117 (10 cas) • Blastes: CD7 (1 cas)

  21. Au total • 14/32 patients ont au moins 2 anomalies phénotypiques sur les granuleux médullaires • 15/32 patients ont au moins une anomalie phénotypique sur les monocytes médullaires

  22. Conclusions (1) Calibration de Fluorescence Gain dans la fiabilité et reproductibilité des images CD34 dans le sang • Normale toujours <10/µL • Élevée dans une sous-population d’AREB • Examen facile et non invasif

  23. Conclusions (2) Anomalies immunophénotypiques des cellules médullaires • Très fréquentes • 2 grands types d’anomalies • Marqueurs d’immaturité • Expression anormale (CD36 sur les granuleux) • Association entre CD56 et LMMC • Anémie corrélée au nombre d’anomalies sur les granuleux

  24. Est-ce simple ? • La numération CD34 est simple • Etude des relations immunophénotypes / différenciation  Analyse sur prélèvement médullaire  Lourdeur du panel d'étude  Difficulté à définir des critères objectifs quantitatifs et ou qualitatifs  Absence de consensus sur les techniques et leur normalisation, sur les marqueurs et les panels

  25. Proposition: étude sur le sang • Marquage sur sang total sans lavage, avec numération absolue par billes • 1 tube, 5 marquages • 2 tubes, 3 marquages

  26. Démarche séquentielle • Démarrage sur quelques sites pilotes (1 à 4) • Evaluation/Discussion des résultats • Proposition d'un protocole simple d'étude clinico-biologique en prospectif

  27. Remerciements • Geil • Marc Maynadié, Dijon • Francis Lacombe, Bordeaux • Site de Limoges • Dr Charlotte Lachronique Gazeille • L’équipe de Cytométrie du laboratoire d'Hématologie: M. Faucher, Mme Couraud • Le service d’Hématologie Clinique • Le service de CTCV: Dr. Le Guyader • L’EFS: Dr. Roussanne

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