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Francisco A.P. Campos Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular,

REGENERAÇÃO DO FEIJÃO-DE-CORDA VIA EMBRIOGÊNESE SOMÁTICA: PROGRESSOS E PROBLEMAS. Francisco A.P. Campos Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular, Universidade Federal do Ceará.

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Francisco A.P. Campos Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular,

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  1. REGENERAÇÃO DO FEIJÃO-DE-CORDA VIA EMBRIOGÊNESE SOMÁTICA: PROGRESSOS E PROBLEMAS Francisco A.P. Campos Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular, Universidade Federal do Ceará

  2. Estabelecimento de um sistema de cultura in vitro para o feijão-de-corda (Popelka et al. Plant Cell Rep (2006) 25: 304–312). A Variação fenotípica em sementes de feijão-de-corda; B Explante cotiledonar de uma semente madura Após remoção dos ápices radicular e caulinar; C Formação de calos não embriogênicos em meio contendo picloram; D Inibição do crescimento dos ápices caulinares pela putrescina; E Efeito do TDZ na morfologia de partes aéreas; F Indução da formação de múltiplas partes aéreas em meio de cultura contendo BA; G Plantas enxertadas in vitro através do uso de anel de silicone: H-I Plantas aclimatadas

  3. Regeneração de plantas de feijão-de-corda a partir de embriões somáticos induzidos em suspensões celulares (Ramakrishnan et al. Plant Cell Rep 2005, 24: 449–461)

  4. 2,4-D 0,0 0,1 0,5 2,5 7,5 37,5 mg/L Kin mg/L 0,0 0,1 0,5 Efeitos de 2,4-D e cinetina na indução de calos embriogênicos friáveis a partir de eixos embrionários do feijão-de-corda.

  5. Suspensão celular embriogênica do feijão-de-corda

  6. A B Análise histológica da histo-diferenciação de embriões somáticos no feijão-de-corda (A e B) e na cenoura (C e D)

  7. A B C D Análise histológica da embriogênese zigótica no feijão-de-corda. Embriões com 1 (A), 2 (B), 4 (C) e 5 (D) dias após a antese.

  8. Análise histológica da indução de embriogênese somática em folhas primárias do feijão-de-corda. 1. Controle; 2. Explante foliar após 24 horas de incubação em meio de indução(sais MS, vitaminas B5, 3% sacarose, 150 mg/L hidrolisado de caseína, 100 mg/L L-Glutamina e 1,5 mg/L de 2,4-D); 3. Detalhe da região em volta do feixe vascular. Legendas: ead - epiderme adaxial; eab – epiderme abaxial; pp – parênquima paliçadiço; pe – parênquima esponjoso; f – floema; x – xilema.

  9. Análise histológica da indução de embriogênese somática em folhas primárias do feijão-de-corda. 1 e 2. Explantes foliar após 3 dias de incubação em meio de indução; 3. Explante após 3 dias de incubação em meio de indução; 4 e 5. Detalhe das massas celulares formadas em volta dos feixes vasculares mostrados em 3.

  10. 2 1 Análise histológica da indução de embriogênese somática em folhas primárias do feijão-de-corda. 1. Explantes foliares após 15 dias de incubação em meio de indução; 2. Detalhe das massas pro-embriogênicas presentes em suspensões celulares.

  11. Expressão do gene uidA em massas pro-embriogênicas do feijão-de-corda

  12. Mapa de referência bi-dimensional das proteínas de suspensões celulares embriogênicas do feijão-de-corda

  13. Resultados obtidos por Peptide Mass Fingerprinting dos “spots” selecionados do gel 2D Suspensões Celulares Embriogênicas.

  14. Espectros de massas dos peptídeos trípticos de SC1

  15. Espectros de massas dos peptídeos trípticos de SC2

  16. MW EZM SC EZM SC 94 67 43 Dias após a antese MW 30 2 6 8 10 12 14 16 20,1 14,4 (A) 2 6 8 10 12 14 16 (B) r c f r c f c e c e MW MW 94 94 67 67 43 43 30 30 20,1 20,1 14,4 14,4 (C) (D) 94 67 43 30 20,1 14,4 Detecção em suspensões celulares embriogênicas e diferentes tecidos do feijão-de-corda de proteínas que reagem com anticorpos preparados contra o peptídeo sintético HSKGDAPPNEDELK, derivado da sequência de aminoácidos predita para a PR-10 de feijão-de-corda.

  17. 4 7 66 29 pH 4 7 MW 24 67 20 43 14 30 20,1 14,4 pH 4 7 MW 67 43 30 20,1 14,4

  18. É possível demonstrar a expressão dos genes que codificam para a PR-10 e para a quitinase que foram identificadas em suspensões celulares embriogênicas do feijão-de-corda? PR-10-F CAT ATG GCC GTT TTC ACA TTC GAG PR-10-R GGA TCC TCA AGC ATT GGC CAA AAG GTA QUI-F CAT ATG GCA GTG TGG AAG CCA AGC G QUI-R GGA TCC TCA GAC GAT GGG ATG GAG ATT AA

  19. QUI PR-10 ACT Análise da expressão em suspensões celulares embriogênicas de feijão-de-corda, dos genes que codificam para as proteínas PR-10 (A) e quitinase (B) por RT-PCR.

  20. Seqüência de nucleotídeos de um cDNA que codifica a PR-10 que é acumulada em suspensões celulares embriogênicas do feijão-de-corda.

  21. PERSPECTIVAS FUTURAS

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