1 / 37

Monoklonaalsete antikehade saamise meetod.

Monoklonaalsete antikehade saamise meetod. HPGRT ensüüm -DNA sünteesi varutee eest vastutav. H-hüpoksantiin T-tümidiin A-aminopteriin (blokeerib DNA sünteesi peatee). Nobeli preemia 1984. Niels K. Jerne Taani. Georges J.F. Köhler Saksamaa. César Milstein Argentiina ja Suurbritannia.

keala
Download Presentation

Monoklonaalsete antikehade saamise meetod.

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Monoklonaalsete antikehade saamise meetod. HPGRT ensüüm -DNA sünteesi varutee eest vastutav H-hüpoksantiin T-tümidiin A-aminopteriin (blokeerib DNA sünteesi peatee)

  2. Nobeli preemia 1984 Niels K. Jerne Taani Georges J.F. Köhler Saksamaa César Milstein Argentiina ja Suurbritannia 1911-1994 1946-1995 1927-2002

  3. Preparaatide alusklaaside ja katteklaaside ettevalmistamine. • Alusklaaside ja katteklaaside puhastamine 1) 3 osa lämmastikhapet ja 1 osa soolhapet 2) 2M NaOH 3) Detergent Alusklaaside ja katteklaaside katmine 1) želatiiniga 2) aminoalküülsilaan 3) polü-L-lüsiin

  4. Preparaatide fikseerimine. • Orgaanilised solvendid ja valkudevahelisi ristseoseid tekitavad ained. • 1. Orgaanilised solvendid (eraldavad rakust vee ja membraanidest lipiidid, valgud koaguleeruvad ning sadenevad rakustruktuuride külge): etanool, metanool, atsetoon, ksülool, toluool. • 2. Ristseoseid tekitavad ained (seosed tekivad valkude vabade aminorühmade kaudu): formaldehüüd, paraformaldehüüd, glutaaraldehüüd; formaliin (37% formaldehüüdi lahus vees). • 3. Kombineeritud fikseerimine: • Paraformaldehüüd-atsetoon • Metanool-jää-äädikas • Metanool-atsetoon • Paraformaldehüüd-glutaaraldehüüd 4. Külmutsuslõigud. 5. Parafiini sisestamine (kasutatakse põhiliselt tahkete kudede korral). Koe fikseerimine, veetustamine, rasva eemaldamine (ksüleen), parafiini sisestamine, deparafiniseerimine.

  5. Rakkude fikseerimine ja permeabiliseerimine. metüleenhüdraat metüleensild Glutaaraldehüüd: HCO-(CH2)3-CHO

  6. Elektronmikroskoopia. • 1. Fikseerimine. • Paraformaldehüüd (2-4%)või glutaaraldehüüd (4-8%). • Osmium oksiid (OsO4)-seostub küllastamata lipiididele. Kasutatakse elektronmikroskoopia preparaatide järelfikseerimiseks. • Uranüülatsetaat (UO2(CH3COO)2·2H2O)-negatiivne värv elektronmikroskoopias (2%) • 2. Veetustamine (25%, 50%, 75%, 95%, 100% etanool). • 3. Sisestamine. • Epoksüüdvaik: Epon 812 • LR White • Lowicryl • Krüo e. külmutus elektronmikroskoopia (rakusisesed struktuurid ja valkude konformatsioon säiluvad kõige paremini)

  7. Värvained. • Hematoksüliin. Kreeka k. Haimato (veri) and Xylon (puu, Haematoxylon campechianum). Aluseline värv, mis värvib rakkudes happelisi piirkondi (DNA, RNA). • Eosiin on flourestseiini derivaat. Happeline värv, mis värvib rakus aluselisi piirkondi (tsütoplasma). • Trüpaansinine-happeline värv, mis läbib surnud rakkude kahjustatud plasmamembraani ning värvib tsütoplasma valke. • Propiidiumjodiid ja etiidiumbromiid-positiivselt laetud fluorestseeruvad ained, mis läbivad surnud rakkude kahjustatud plasmamembraani ning värvivad nukleiinhappeid (DNA, RNA). Seostuvad aluspaaride vahele, mille järel nende fluorestsents tõuseb ligi 30 korda. Absorbtsiooni maksimum 535 nm ja emissiooni maksimum 617 nm. • DAPI fluorestsiin eosiin propiidiumjodiid etiidiumbromiid DAPI= 4',6-diamidino-2-fenüülindool

  8. Wright’i värviga värvitud vererakud.James Homer Wright (1869–1928) monotsüüt eosinofiil basofiil lümfotsüüt Eosiin Y ja metüleensinine, mis on lahustatud metanoolis. Gustav Giemsa (1867-1948)lisas sellele stabiliseerimiseks glütserooli. neutrofiil

  9. Rakutuum.

  10. Mitokondrid.

  11. Golgi kompleks.

  12. Hepatotsüüt. 1-mitokonder 2-sile tsütoplasma võrgustik 3-kare tsütoplasma võrgustik 4-Golgi kompleks

  13. Karedapinnaline tsütoplasma võrgustik. 1-tuum 2-mitokonder 3-tsütoplasma võrgustik 4-polüribosoomid

  14. Siledapinnaline tsütoplasma võrgustik.

  15. Hepatotsüüt. Glükogeeni graanulid

  16. Peroksüsoomid ja lüsosoomid.

  17. Immunokullaga värvitud MHC II antigeen.

  18. α-amülaasi värvimine kõhunäärme koes immunokulla/hõbetamise meetodiga.

  19. Paljutuumsed Langerhansi rakud epiteelis.

  20. Paljutuumsed rakud (hiiglaslik sarkoomi rakk).

  21. Inimese platsenta (süntsütsiaalsed rakud).

  22. Polüploidsus (maisi juure rakk).

  23. Seljaaju motoneuron.

  24. Epiteeli karikrakud.

  25. Säilitusgraanulid maksa epiteelirakkudes.

  26. Tuuma struktuur.

  27. Sibula meristeemi rakkude mitokondrid.

  28. Spinaalganglioni Golgi aparaat.

  29. Kõhunäärme eksokriinsete rakkude Golgi aparaat.

  30. Kloroplastide graanumid Tradescantia võrses.

  31. Taime mesofülli rakk kloroplastidega.

  32. Taime mesofülli rakkude kloroplastide graanumid.

  33. Meioos: liilia tolmutera areng. Diploteeni staadium. Kiasmid.

  34. Imetajate munaraku areng (oogenees), noor Graafi folliikul.

  35. Imetajate munaraku areng (oogenees), küps Graafi folliikul.

  36. Imetajate munaraku areng (oogenees), küps munarakk (ootsüüt).

  37. Merisiiliku (Echinus) areng.

More Related