DETECCION DE VIRUS RESPIRATORIOS: NUEVAS ESTRATEGIAS

1. DETECCION DE VIRUS RESPIRATORIOS: NUEVAS ESTRATEGIAS DETECCION DE VIRUS RESPIRATORIOS: NUEVAS ESTRATEGIAS Loreto Fuenzalida Loreto Fuenzalida

2. INTRODUCCION Los virus respiratorios son un problema a nivel mundial

3. INTRODUCCION En muchas situaciones biológicamente complejas, como puede ser una enfermedad causada por diferentes virus, el agente etiológico no se ha identificado.

4. Las nuevas técnicas están enfocadas al desarrollo de microarrays. • La tecnología actual de los microarrays, sin embargo, involucra la compleja y estricta ejecución de múltiples procesos experimentales y la contaminación cruzada puede conducir a falsos resultados. • Microarrays: Chips o arrays de una serie de biosondas en un soporte sólido, en una disposición regular y prefijada.

5. SARS-CoV • El Síndrome Respiratorio Agudo Severo (SARS) es una enfermedad infecciosa seria, de impacto mundial. • Esta enfermedad es producida por un coronavirus humano (SARS-CoV). • El estadío temprano de la infección por SARS es caracterizado por fiebre, disnea y rápidos cambios en el pulmón visibles por rayos X. Problema: puede ser diagnosticado como influenza

6. Técnicas actuales para detectar el SARS • Métodos serológicos que prevalecen para la detección de SARS: - Ensayo de inmunofluorescencia indirecta - ELISA • Detección de ácidos nucleicos mediante PCR

7. El sistema consta de 3 partes: • Tapa ópticamente transparente que lleva un microarrays de oligonucleótidos en su superficie interior. • Recipiente interno negro. • Cuerpo del tubo Eppendorf Integra procesos múltiples de PCR y microarrays de DNA en un tubo Eppendorf para la detección de múltiples virus

8. The Structure and the Operation of the Microarray-in-a-tube Solution prepare PCR Hybridization Detection

9. A B Imagen del microarray en tubo con muestras negativas (A) y muestras positivas (B).

10. Es un sistema rápido para la detección de múltiples virus respiratorios. • Disminuye las horas de trabajo. • Prevención de contaminación cruzada de los productos de PCR. • Uso potencial para la detección de múltiples genes.

11. Construcción de un microarray de proteína que contiene el proteoma completo del coronavirus humano SARS • Detección de anticuerpos contra SARS-CoV en muestras de suero humano, además de otros coronavirus.

12. Muestras diagnosticadas clínicamente y por ensayo de ELISA. • Se utilizaron 82 proteínas purificadas de los diferentes virus. • Se utilizó menos de 1 µl de suero para el ensayo de microarray de proteína.

13. La técnica identificó y distinguir entre SARS-CoV y HCoV-229E, rápidamente en pacientes, con alta sensibilidad y especificidad. • El ensayo fue 50 veces más sensible que el ensayo de ELISA (dilusión 1/200 v/s 1/50). • El fragmento carboxilo terminal de la proteína N muestra una elevada actividad antigénica. • Los microarrays de proteínas pueden ser un método rápido, sensible y simple para identificación a gran escala de anticuerpos específicos en suero.

14. Conclusiones • Debido al problema actual que representan las infecciones respiratorias virales, se está tratando de diseñar nuevos métodos de detección más rápidos y sensibles. • La técnica de microarrays tiene un gran potencial para la detección de agentes patógenos. • Utilizando nuevos formatos, es posible hacer que esta técnica sea de más fácil manipulación en el laboratorio.

16. GRACIAS¡¡