DMSO 对 293T 细胞生长的影响

1. DMSO对293T细胞生长的影响 ——细胞工程自主实验答辩 指导老师：张铭 葛学振 3070701015 孙 艺 3070921071

2. Outline • 实验设想 • 实验用品 • 实验方法 • 实验结果 • 实验体会 • 参考文献

3. 实验设想 • 试剂选择过程

4. DMSO • 一种透明、无色、无臭、呈微苦味的液体，毒性极低。它是一种水溶性的化合物，能溶解绝大多数有机化合物，甚至对无机盐也能溶解。 • 本身具有消炎、止痛、镇静、利尿、促进伤口愈合作用；并能将溶于其中的其它药物通过皮肤涂抹渗入体内，代替口服或注射。用于治疗关节炎、皮炎、脚气、牛皮癣、扭伤、肿瘤等各种疾病。

5. DMSO • DMSO有很好的渗透性及水溶、脂溶性 ， 由于它能快速穿透细胞膜， 并使细胞膜通透性增加， 常用来低温冻存各种细胞及脏器器官， 作为抗肿瘤药物的媒介。 • DMSO 是一种常用的分化诱导刑，主要用于对粒细胞白血病 、 白血病等间叶系统肿瘤细胞的诱导分化研究。

6. 实验用品 • 293T细胞 • 含10%胎牛血清的1640培养液2mg/mlMTT（用PBS配制） • DMSO • 酶联免疫检测仪 • 倒置相差显微镜 • 96孔板 • 血细胞计数板等

7. 实验方法 • 培养基配制 • 铺板 • 活性检测

8. 培养基配制配制培养基，其中DMSO的浓度分别为：培养基配制配制培养基，其中DMSO的浓度分别为： 0.1%，1%，2%，5%，10%，20%； 铺板 每孔接种细胞2×10，DMSO的浓度梯度0,0.1%，1%，2%，5%，10%，20%，每个浓度梯度设三个平行。分两组，一组为贴壁前添加DMSO培养基培养，另一组等细胞贴壁后培养基添加DMSO； 活性检测 20h后，细胞形态拍照记录，MTT检测细胞活性。

9. 实验结果 • 细胞形态 • 细胞活性（MTT检测）

10. 一、贴壁前加DMSO组 处理3h后细胞形态 0%(DMSO) 0.1% 1% 2%

11. 一、贴壁前加DMSO组 处理3h后细胞形态 10% 5% 20%

12. 二、贴壁前加DMSO组处理20h后细胞形态 0% 0.1% 1% 2%

13. 二、贴壁前加DMSO组处理20h后细胞形态 10% 5% 20%

14. 三、贴壁后加DMSO组处理20h后细胞形态 0% 0.1% 1% 2%

15. 三、贴壁后加DMSO组处理20h后细胞形态 10% 5% 20%

16. 四、处理20h后 MTT数据 *** *** 细胞存活率 *** DMSO浓度（%） 细胞存活率与DMSO浓度的关系图 （经T检验，用***标注显著性差异）

17. 实验体会 DMSO对细胞生长的影响 DMSO对细胞贴壁的影响 DMSO影响细胞的方式

18. DMSO对细胞的影响DMSO对293T细胞生长具有抑制作用，抑制作用随浓度升高而增强，1%DMSO时抑制率为50%；DMSO对细胞的影响DMSO对293T细胞生长具有抑制作用，抑制作用随浓度升高而增强，1%DMSO时抑制率为50%； DMSO对细胞贴壁有显著性抑制作用，从细胞形态观察及MTT检测都能证明DMSO抑制细胞贴壁。 DMSO影响细胞的方式 DMSO使细胞失水，在低浓度时细胞因失水个体变小，状态变差；高浓度时细胞积聚在一起，最终死亡。推测DMSO通过影响细胞水分代谢，调节渗透压影响细胞生理状态。

19. 检测DMSO与细胞增殖 Trubiani O等研究表明DMSO能下调c-myc表达，与细胞增殖、分化和凋亡相关的鸟氨酸脱羧酶(ODC)合成减少，细胞生长受抑制、停滞于 G0／G1、凋亡增加 。 DMSO常用作诱导分化剂，可能通过诱导细胞分化来抑制增殖。

20. 参考文献 • 张卫国，史雪勤，王小虎等.不同浓度 DMSO对 胃癌细胞生长的影响.重庆医学,2004， 33(11): 1731 • Trubiani O，Pieri C，Rapino M，et al. The c-myc gene regulates the polyamine pathway in DMSO-induced apoptosis[ J ] . CelI Prolif，1999，32(2-3):119

21. Thank you all ！