Herpesvirus del ostión

1. Herpesvirus del ostión Jorge Cáceres-Martínez Rebeca Vásquez-Yeomans

2. Características morfológicas del OsHV-1 TEGUMENTO CÁPSIDE (116 nm) NÚCLEO ENVOLTURA Familia Malacoherpesviridae 207.4 kpb ADN lineal de doble cadena Forma esférica poligonal (icosaédrica)

3. Entre las especies donde se ha encontrado tenemos: Crassostrea virginica Crassostrea gigas Crassostrea ariakensis Ostrea edulis Ostrea angasi Tiostrea chilensis Ruditapes philippinarum Pecten maximus Nodipecten subnodosus

4. Diferentes variedades genéticas del virus de diferentes localidades Reece Lab-Moss et al. 2007 y Reece et al. datos no publicados; Reece, 2013

5. Estas variedades pueden tener diferente virulencia Las variedades de herpesvirus en zonas endémicas pueden tener diferente virulencia como el caso del OsHV-1 μVar, detectada en Francia Se requiere de mapas de distribución geográfica de lasvariedades de herpesvirus y sus hospederos

6. Distribución

7. Se ha demostrado transmisión horizontal % sobrevivencia Larvas de C. gigas, C. hongkongensisy C. ariakensis, expuestas a tejido infectado de C. gigas Días Kimberly S. Reece, 2011

8. El periodo de tiempo más largo para la detección de ADN en el OsHV-1 liberado a partir de larvas maceradas e inoculado en agua de mar fue de 22 días a 4°C y de 12 días a 20°C (Vigneronet al. 2004) Sin embargo, la relación entre la detección del ADN en la PCR y la infectividad del virus no se conoce Mayo, 2013

9. Se ha detectado en tejidos de ostras adultas, incluido el tejido gonadal (Arzulet al. 2002;Lipart & Renault2002) Los adultos pueden ser un origen dela infección para las larvas Sin embargo, lo que no está claro es si se trata de una verdadera transmisión vertical (transmisión por los gametos) Mayo, 2013

10. Se ha detectado el ADN de OsHV-1 mediante PCR en tiempo real en el agua de alrededor de C. gigas enfermos (Sauvageet al. 2009) La enfermedad inducida por la variante OsHV-1 μVar puedeser transmitida experimentalmente a través del agua (Schikorskiet al. 2011) Este es, presumiblemente, el principal modo natural de transmisión del OsHV-1 La transmisión a través del agua ayuda a explicar episodios de mortalidad distribuidos en parches en zonas de producción Mayo, 2013

11. Signos de la enfermedad en larvas y semilla • Reducción en actividad de nado y alimentación • Lesiones en manto y velo • Nado errático en círculos, deposición en el fondo • A nivel histológico en ocasiones se ven núcleos anormales con cromatina marginal

12. Causa mortalidad de hasta 100 % en cultivos de larvas y juveniles de ostión • Eventos recurrentes, principalmente en verano • CAUSAS • Compleja interacción de factores tales como, incremento de la temperatura, estrés fisiológico, malas prácticasy contaminantes, entre otros IFREMER

13. Impacto en la Industria ostrícola Francesa Francia produce 130,000 toneladas al año, siendo el cuarto productor a nivel mundial después de China, Japón y Corea del Sur

14. Problema de graves consecuencias en Francia OsHV-1 OsHV-1 µVar 2008-2011 A herpes virus has decimated oysters along France’s 5,500- kilometer coast for a fourth season

15. Diagnosis Incremento en la tasa de mortalidad Histopatología, permite observar lesiones típicas asociadas al virus y permite excluir otras posibles causas de mortalidad como protozoos parásitos PCR se usa para vigilancia y para confirmación de casos sospechosos Se utilizan diferentes iniciadores La falta de estandarización representa un problema potencial Los test actuales deben ser validados Hibridación in situ permite ubicar al virus en células y tejidos asociándolo con alteraciones e indicando su condición

16. Mayo, 2013 a = el método es el recomendado por razones de disponibilidad, utilidad y especificidad y sensibilidad de diagnóstico; b = el método es estándar, con buena sensibilidad y especificidad de diagnóstico; c = el método tiene aplicación en algunas situaciones, pero el costo, la precisión u otros factores limitan seriamente su aplicación; y d = el método no se recomienda actualmente para este fin

20. Herpesvirus OsHV-1 en México

21. Estudios de herpes virus en México Cáceres-Martínez, J. A. y R. Vásquez-Yeomans. (2003) Presence of giantpolymorphiccells in Crassostrea gigas cultured in Bahia Falsa, Baja California NW Mexico. Journal of ShellfishResearch. 22(3): 711-714 Vásquez-Yeomans, R., J. A. Caceres-Martinez y A. Figueras Huerta. (2004) Herpes-like virus associatedwitherodedgills of thePacificoysterCrassostrea gigas in Mexico. Journal of ShellfishResearch. 23(2): 417-419 Vásquez-Yeomans, R., A. M. García-Ortega y J. A. Cáceres-Martínez. (2010) Gillerosion and herpesvirus in Crassostrea gigas cultured in Baja California, México. Diseases of AquaticOrganisms. 89: 137-144 Cáceres-Martínez, J. A. y R. Vásquez-Yeomans. (2010) Presence of epibionts and herpesvirus in thelion-pawscallopNodipectensubnodosus. En Aquaculture 2010 Del 01 al 05 de marzo. San Diego, California, Estados Unidos. WorldAquacultureSociety. Abstract. Chávez Romero, Y. A., J. A. Cáceres-Martínez, R. Vásquez-Yeomans y A. M. García -Ortega. (2011) Geneticcharacterization of ostreidherpesvirusassociatedwithmortalities of PacificoysterCrassostrea gigas in northwestern México. En 2011 International MalacologyReunion Del 27 al 30 de junio. La Paz, Baja California Sur, México. Western Society of Malacologists. Abstract. Grijalva-Chón, J. M., R. Castro-Longoria, J. Ramos-Paredes, T. L. Enríquez-Espinoza y F. Mendoza-Cano. (2013) Detection of a new OsHV-1 DNA strain in the healthy Pacific oyster, Crassostrea gigas Thunberg, from the Gulf of California. Journal of FishDiseases. 36(11): 965-968.

22. Se han presentado episodios de mortalidades recurrentes de ostión en la región asociados con el Herpesvirus, especialmente en semilla y juveniles Al menos un episodio de mortalidades y bajo rendimiento de almeja mano de león Baja California Sonora Sinaloa Baja California sur

23. El primer registro se logró a través de MET Afecta al ostiónCrassostrea gigas y a la almejaMano de León

24. Lo podemos encontrar activo o en degradación dentro de las células de defensa de hospederos adultos Los adultos son menos susceptibles pero pueden ser portadores asintomáticos (Vásquez-Yeomans et al. 2010) A B Dégremont (2013) encontró mayor resistencia a mortalidad causada por OsHV-1 en ostiones de mayor edad y talla, lo que sugiere una maduración del sistema inmune en contra del virus. 10 µm 100 µm C D 10 µm 10 µm

25. Alteraciones histológicas Evidencias y validación 3 ? MET b Lesiones 4 2 Mortalidades 1 HIS PCR- secuenciación 6

26. Presencia del OsHV en Baja California 2 -37 mm 73% (40-97%) Verano

27. Presencia del OsHV en Baja California Sur. 5 -55 mm.

28. Presencia del OsHV en Sonora. 5-55 mm 80% (60-100%) Primavera

29. Presencia del OsHV en Sonora

30. Presencia del OsHV en Sinaloa Sinaloa Sinaloa 30 a 47 mm 75% (70-80%)

31. 8 7 3 6 2 5 1 4 M M 600 pb 100 pb Los resultados de secuenciaciónindicanque las variedadesencontradas en EUA y México, son mássimilares al OsHV-1 que al OsHVμVar Cinco o más variedades Mexicanas de OsHV-1 Detection of Oyster herpesvirus (OsHV) using PCR: M) 100bp Molecular marker (Invitrogen); Line 1) Positive control (Genomic viral DNA, 100 ng per reaction); Lines 2, 8) Negative control (Sterile water); Lines 3 to 7) tissue samples. Tesis de Maestría de YosefAminChávez Romero

32. ¿Qué sabemos del herpesvirus? 1.- Se tienen evidencias de transmisión vertical de Herpesvirus en moluscos. 2.- Se ha demostrado transmisión horizontal en moluscos. 3.- Se ha encontrado que el Herpesvirus puede infectar diversas especies de moluscos. 4.- El Herpesvirus puede permanecer latente después de la primera infección. 5.- El Herpesvirus puede activarse en condiciones de estrés.

33. Posible ciclo de acción viral en el ambiente Semilla ¿Infectada? No Si Zona de cultivo OSTIÓN sano OSTIÓN portador ¿Infección? Si ESTRÉS No Resistencia ¿Se mantiene en el ecosistema? No ¿Se mantiene en el ecosistema? Si Si No Si No MORTALIDAD MERCADO HERPESVIRUS

34. Prácticas generales de manejo La bioseguridad puede aplicarse con éxito en laboratorios de producción de larva y semilla (hatcheries) Los herpesvirus son frágiles fuera de sus hospederos. La temperatura elevada, las sustancias químicas o la luz solar (UV) pueden destruir su cubierta de contenido lipídico Sin embargo, se ha demostrado que cada especie individual de virus herpes puede tener una estabilidad diferente frente al tratamiento de inactivación y que las sales inorgánicas como el Na2SO4 presentes en el agua de mar pueden estabilizar los virus herpes (Wallis & Melnick, 1965) Mayo, 2013

35. En laboratorios, los brotes de OsHV-1 pueden controlarse mediante una cuarentena y medidas de higiene como la inactivación del virus mediante el uso de tratamientos, como la irradiación ultravioleta del agua de recirculación y las tecnologías de filtración del agua Sin embargo, es necesario tener presente que la reducción de la carga vírica depende del título inicial y de la capacidad de reducción del virus que tengan las técnicas utilizadas para la inactivación. El equipo utilizado en una zona infectada no debe ser enviado y utilizado en una zona no afectada sin una limpieza y desinfección adecuadas

36. RECOMENDACIONES • Evitar la introducción de moluscos bivalvos provenientes de zonas con antecedentes de mortalidad asociadas al OsHV-1 y OsHV-1 µVar y evitar la exportación de organismos provenientes de zonas con antecedentes de mortalidad asociadas al OsHV-1 y OsHV-1 µVar hacia zonas libres de herpesvirus para evitar su propagación • Después de la aparición del OsHV-1 µVar, nuevas variantes siguen emergiendo. El número de mutaciones depende del número de ciclos de replicación durante la fase infectiva del virus, por lo tanto, es sumamente importante controlar los eventos de mortalidad ya que estos favorecen la aparición de mutantes • Monitoreo ambiental (alerta temprana) • Exigir y presentar certificados de sanidad en la comercialización de moluscos bivalvos • Vigilar el cumplimiento de las buenas prácticas de producción acuícola • Evitar la introducción de especies exóticas sin un estudio previo de carga parasitaria • Crear un programa de selección genética de organismos resistentes al OsHV-1 y OsHV µVar • Planificar épocas de siembra y manejo (desdoble)

37. Temperatura Salinidad Oxígeno pH Conductividad Mareas Corrientes Nitritos Nitratos Amonio Clorofilas Turbidez Viento RED MAREOGRÁFICA REGIONAL RED NACIONAL DE MONITOREO ACUÍCOLA AMBIENTAL (RENAMOA) RENAMOA Salud del organismo Salud del agua Salud del sedimento

38. RED MAREOGRÁFICA REGIONAL RED NACIONAL DE MONITOREO ACUÍCOLA AMBIENTAL (RENAMOA) RENAMOA

39. RED MAREOGRÁFICA NACIONAL RED NACIONAL DE MONITOREO ACUÍCOLA AMBIENTAL RENAMOA RENAMOA RENAMOA RENAMOA RENAMOA RENAMOA RENAMOA RENAMOA Base de datos Análisis de información

40. Hospedero NE NE NE NE NE NE Parásito Ambiente Tríada de la enfermedad Estudio del hospedero Tríada de la enfermedad Estudio del ambiente Estudio del parásito-patógeno E INTERACCIÓN PARÁSITO-HOSPEDERO-AMBIENTE

41. Hospedero Ambiente NE NE NE NE Manejo Parásito Tétrada de la enfermedad Estudio: E INTERACCIÓN PARÁSITO-HOSPEDERO-AMBIENTE-MANEJO

42. Apoyo de: Dr. Miguel Ángel del Río Portilla (CICESE) Dra. Carmen Paniagua Chávez (CICESE) M.C. Mauricio García Ortega (ISA) Dr. Antonio Figueras (CSIC) Dr. Tristan Renault (IFREMER) Dra. KimberyReece (VIMS) Dra. Collen Burgen (Washington University) Dra. CarolynFriedman (Washington University) Dr. James Moore (UC Davis) Tesistas: M.C. Yosef Amín Chávez Romero (CICESE) M.C. JennifferVillalva Vega (CICESE)

43. AGRADECIMIENTOS SUBNARGENA del CICESE

44. La investigación continua ¡Gracias!