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杨友金 E-mail : yyoujing@zju.edu.cn Tel: 13732209796 Address: 综合楼 909 室. 绪 论. 浙江大学医学院解剖细胞生学系杨友金. 目 录. 组织学 与胚胎学 研究内容和意义. 组织学发展简史和当代组织学. 组织学的学习方法. 组织学技术简介. 一 、 组织学与胚胎学的研究内容. 组织学 ( histology ): 研究机体微细结构 及其相关功能的科 学. 胚胎学( embryology ):研究人体发生、
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杨友金 E-mail: yyoujing@zju.edu.cn Tel: 13732209796 Address: 综合楼909室
绪 论 浙江大学医学院解剖细胞生学系杨友金
目 录 • 组织学与胚胎学研究内容和意义 • 组织学发展简史和当代组织学 • 组织学的学习方法 • 组织学技术简介
一、组织学与胚胎学的研究内容 组织学(histology):研究机体微细结构 及其相关功能的科 学 胚胎学(embryology):研究人体发生、 生长及其发育机 制的一门科学
胚胎学研究内容: 胎 受精卵 儿 胚 (9~38周) (前8周) 组织学研究内容: 上皮组织 结缔组织 肌肉组织 神经组织 细胞 (cell) 细胞间质 (intercellular substance) 组织(tissue) 器官和系统 人体 胚胎早期发生
胃的细微解剖 胃的大体解剖
显微结构 超微结构 骨骼肌的光镜图 骨骼肌的电镜图
学习组织与胚胎学的意义 • 组胚学是生物学和医学的基础课程 • 组胚学与人类社会面临的众多实际问题和疾病防治密切相关 • 组胚学与众多学科交叉,如分子生物学、细胞生物学、生理学、生物化学、免疫学、病理学、组织工程学和环境毒理学等学科,理论上相互关联渗透,技术相互引用促进。 只有了解正常的机体结构、组成及其基本生命现象,才能理解机体异常的病理变化。同时也能将生命科学研究不断引向深入。
二、组织学发展简史和当代组织学 • 发展简史: • 从细胞的发现和细胞学说的建立起始 ,300余年 • Hooke、Malpighi 、leeuwenhoek、 Graaf、Bichat、Meyer 、Schleiden和Schwann等人均有所发现。 • 当代组织学: • 新仪器和相关技术,如流式细胞仪、图像分析仪、共焦激光扫描显微镜、免疫组织化学、原位杂交技术等。
组胚学发展概况 英国 Hooke 1635-1703 “cell” 意大利 Malpighi 1628-1694 脾,肺,肾等组织结构 荷兰 Leeuwenhoek 1632-1723 精子,红细胞,肌细胞,神经细胞 法国 Bichat 1771-1882 “tissue” 德国 Schleiden 1838-18? 9 创立细胞学说 Schwann 19世纪中期 组织学 20世纪初 组化,组培 20世纪40年代 细胞,组织超微结构 我国 20世纪初 从人体解剖学分化出—组织学 马文昭 1886-1965 细胞水平 张作干 1907-1969 细胞,组织超微结构 Histology (microanatomy) 细胞发现和细胞学说的建立 组织学说 迄今(经历了三百多年)
三、组织学的学习方法 • 平面与立体 • 结构与功能 • 静态与动态 • 综合与比较
结构与功能 舒张状态 收缩状态
四、组织学技术简介 光镜技术 • ⒈ 普通光学显微镜术 • 石蜡切片术:适用于大多数组织样品的制作。主要步骤: • 取材 → 固定 → 水洗 → 脱水 → 透明 → 包埋 → 切片 → 贴片 → 染色 → 封片 。 • 其它制片方法:适用于某些特殊样品的制作,许多步骤与上相同,但某些步骤则有所不同,如: • 涂片法、铺片法、磨片法、火棉胶包埋法等。
组织胚胎学研究技术 问题解决方法 观察对象太小放大显微镜 观察对象无色,无反差染色(HE染色) 观察对象生化成分不同细胞化学、免疫组织化学 观察对象是活体培养
Sampling fixed embedded staining HE染色:苏木精(Hematoxylin)伊红(Eosin)染色 碱性染料 酸性染料 将嗜碱性物质(本身酸性)染成蓝色 将嗜酸性物质(本身碱性)染成红色 细胞核中的DNA、RNA,细胞质中的RNA 细胞质、膜性结构(线粒体、溶酶体、滑面内质网) 一般光学显微镜(light microscope, LM)技术
光学显微镜 Light microscope 形态学研究 石蜡切片 冰冻切片 铺片 磨片 涂片
Stretched Ground section smear
透射电镜(Transmission electron microscopy TEM): 取材 固定 包埋 超薄切片 电子染色 透射成像 用途:观察细胞内部结构 扫描电镜(Scanning electron microscopy SEM) : 取材 固定 干燥 喷金 扫描成像 用途:观察组织或细胞表面的立体结构 电镜技术(Electron Microscopy)
扫描电镜 (Scanning electron microscope, SEM) 以电子束穿透样品,经聚合放大后,显像于荧光屏上进行观察与摄片 观察细胞或组织的表面结构
透射电子显微镜 Transmission electron microscope 组织块经取材固定后, 干燥 ,在标本表面先后喷一层碳膜和合金膜,镜下扫描成像 观察细胞内部结构
冷冻蚀刻复型术 兔胰腺腺细胞的冷冻割断电镜像 ×2000
组织化学和细胞化学技术(histochemistry&cytochemistry)利用化学或物理反应原理显示组织切片或细胞内某种化学成分,进行定位,定量及其与功能相关的研究.组织化学和细胞化学技术(histochemistry&cytochemistry)利用化学或物理反应原理显示组织切片或细胞内某种化学成分,进行定位,定量及其与功能相关的研究.
过碘酸 Schiff反应(periodic acid Schiff reaction):简称 PAS反应,是确定组织或细胞中有无多糖存在的一种方法。 原理: Schiff 试剂 PA 多糖 紫红色沉淀 醛 氧化 多糖显示法—》PAS反应 DNA显示法------》Feulgen反应
免疫细胞(组织)化学: 利用抗原(antigen, Ag),抗体(antibody)特异结合的原理,用已知抗体检测未知抗原的一种方法。
激光扫描共聚焦显微镜 Laser scanning confocal microscope
原位杂交术 In situ hybridization 通过检测细胞内mRNA和DNA序列片段,原位研究细胞合成某种多肽和蛋白质的表达.