1 / 5

… z drugimi besedami: ali obstaja protein Y?

(ribo)lov s kvasnim dvohibridnim sistemom. ali se X veže. na kakšen protein?. bait. transkripcijski aparat. X. Y. prey. lac 2. b. -galaktozidaza. X-gal. modra barva.

lou
Download Presentation

… z drugimi besedami: ali obstaja protein Y?

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. (ribo)lov s kvasnim dvohibridnim sistemom ali se X veže na kakšen protein? bait transkripcijski aparat X Y prey lac 2 b -galaktozidaza X-gal modra barva Bruce Jenks, Odd. za celično fiziologijo živali, Univerza v Nijmegnu, Nizozemskahttp://www.celanphy.sci.kun.nl/jenks.htm vaba plen … z drugimi besedami: ali obstaja protein Y? Da bi to ugotovili, bomo uporabili kvasni dvohibridni sistem. in lovili Y. Kot vabo bomo uporabili X... Skica na desni opisuje, kako deluje kvasni dvohibridni sistem. (če ne razumete, kako deluje, si oglejte razlago samega sistema še preden se odpravite lovit!)

  2. (ribo)lov s kvasnim dvohibridnim sistemom vaba protein X cDNA za X ali se X veže na kakšen protein? kvasni plazmidni DNA-vezavna domena ekspresijski vektor transfekcija kvasovke bait transkripcijski aparat X Y prey lac 2 b -galaktozidaza X-gal modra barva vaba plen Na začetku bomo pripravili kvasovke, ki bodo izražale protein X...

  3. (ribo)lov s kvasnim dvohibridnim sistemom vaba plen plen neznani protein tkivo ali se X veže na kakšen protein? celotna mRNA reverzna transkriptaza kvasni plazmidniekspresijski vektor transfekcija aktivacijska domena bait transkripcijski aparat X Y prey lac 2 b -galaktozidaza X-gal modra barva vaba protein X cDNA za X kvasni plazmidni DNA-vezavna domena ekspresijski vektor transfekcija transformirane kvasovke kvasovke Zdaj pripravimo še kvasovke, ki bodo izražaleprotein Y (če ta sploh obstaja)….

  4. (ribo)lov s kvasnim dvohibridnim sistemom ali se X veže na kakšen protein? izolacija plazmidov transfekcija bait transkripcijski aparat X Y prey lac 2 b -galaktozidaza X-gal modra barva vaba plen plen vaba protein X neznani protein cDNA za X tkivo kvasni plazmidni DNA-vezavna domena ekspresijski vektor celotna mRNA reverzna transkriptaza transfekcija kvasni plazmidni ekspresijski vektor transfekcija kvasovke aktivacijska domena Zdaj pripravimo retransformirane kvasovke. retransformirane kvasovke Y smo ujeli, če pride do izražanja reporterskega gena (lac).

  5. (ribo)lov s kvasnim dvohibridnim sistemom ali se X veže na kakšen protein? pozitivne kvasovke bait transkripcijski aparat X Y vsebujejo prey lac 2 vabo + plen! agarna plošča b -galaktozidaza X-gal modra barva vaba plen plen vaba protein X neznani protein cDNA za X tkivo kvasni plazmidni DNA-vezavna domena ekspresijski vektor celotna mRNA reverzna transkriptaza transfekcija kvasni plazmidni ekspresijski vektor transformirane transfekcija kvasovke aktivacijska domena izoliraj plazmide transfekcija re-transformirane kvasovke (ribo)lov je uspel!

More Related