1 / 17

Nová mutace v genu ATP8B1/FIC1 u nemocného s benigní rekurentní intrahepatální cholestázou

Nová mutace v genu ATP8B1/FIC1 u nemocného s benigní rekurentní intrahepatální cholestázou. Jirsa M., Budišová L., Taimr P., Cebecauerová D., Dvořáková L., Hřebíček M., Brodanová M., Vítek L., Wurm P., Hůlek P. Podpořeno grantem IGA MZ ČR reg.č. NM/ 7510-3.

lynne
Download Presentation

Nová mutace v genu ATP8B1/FIC1 u nemocného s benigní rekurentní intrahepatální cholestázou

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Nová mutace v genu ATP8B1/FIC1 u nemocného s benigní rekurentní intrahepatální cholestázou Jirsa M., Budišová L., Taimr P., Cebecauerová D., Dvořáková L., Hřebíček M.,Brodanová M., Vítek L., Wurm P., Hůlek P. Podpořeno grantem IGA MZ ČR reg.č. NM/ 7510-3

  2. Benigní rekurentní intrahepatální cholestáza (BRIC, syndrom Summerskill- Walsheův) • Geneticky podmíněná intrahepatální cholestáza • Ataky žloutenky provázené úporným svěděním • Manifestace obvykle do konce 2. dekády, trvání ataky týdny až řadu měsíců, počet atak 1 až 30 za život • Laboratorně hyperbilirubinémie, zvýšená aktivita ALP a koncentrace sérových žlučových kyselin • Normální S-GMT a cholesterol • Prognóza většinou dobrá, asi 6% progreduje v cirhózu

  3. Protein ATP8B1/FIC1 Exprimovaný v apikální membráně hepatocytů, cholangiocytů, enterocytů a acinárních buněk pankreatu, nízká exprese v řadě dalších tkání Funkce neznámá, hypotézy: flipáza membránových fosfolipidů transportér hydrofobních žlučových kyseli iontový kanál

  4. Gen ATP8B1/FIC1 • je lokalizovaný na 18q21, zaujímá 98kb • sestává z 27 exonů • kóduje ATPasu o MW 140 kDa

  5. Mutace v genu ATP8B1/FIC1 asociované s BRIC

  6. Pacient M.K. – anamnéza RA:negativní OA, NO: • 1972 protrahovaná novorozenecká žloutenka • 1973 žloutenka po varicele, závěr nejasný, léčba kortikoidy • 1975 dvouměsíční ataka žloutenky • 1976 roční ataka, chir. revize žluč. cest bez patol. nálezu • 1990 po sinusitidě další ataka, vyloučena IHE, normální ERCP, • závěr nejasný, opět léčen kortikoidy • 1990-98 3x jaterní biopsie • 1998 další ataka, hosp. na Ústavu Klin. Imunologie LFHK

  7. Pacient M.K. – laboratorní nálezy, USG a ERCP • FW 50/86 • KO: anémie, leuko 12 • Hyperbilirubinémie, ALP 14,4 mkat/l, celk. žluč. kyseliny 220 mmol/l • GMT a cholesterol opakovaně normální • Fe, transferin, Cu, ceruloplasmin, alfa1-AT v normě • Imunologická vyšetření v normě • USG jater a žluč. cest bez patol. nálezu • ERCP bez patol. nálezu • 4. jaterní biopsie: intrahepatální cholestáza bez známek přestavby

  8. Určení sekvence ATP8B1/FIC1 z genomové DNA Izolace genomové DNA z periferních leukocytů ß PCR amplifikace jednotlivých exonů ß Agarosová elektroforéza ß Izolace produktů z gelu ß Sekvenační PCR s univerzálními značenými primery ß Sekvenování

  9. Tsp509I Tsp509I ...GCTACAAGGAAATTGAAGAAAAAGAATTTACA... ...CGATGTTCCTTTAACTTCTTTTTCTTAAATGT... 95 bp 14 bp M.K. kontrola M.K. – heterozygotní bodová mutace v 17. exonu ATP8B1 T1982T+C ę

  10. EcoO109I ...CTTGTTGCATGGGGTCCTAACATCGATGATC... ...GAACAACGTACCCCAGGATTGTAGCTACTAG... 715 bp 220 bp M.K. kontrola M.K. – heterozygotní delece ve 24. exonu ATP8B1 del3122TCCTA ę Mutovaná alela: G G G G A C A T C G A T G ... Normální alela :G G G G T C C T A A C A T ...

  11. Vyšetření rodiny Restrikční analýza mutace v 17. exonu Restrikční analýza delece v 24. exonu PeK PaK PV MK

  12. Ověření sekvence exonu 24 genu ATP8B1/FIC1 z klonovaného fragmentu DNA PCR amplifikace exonu 24 z genomové DNA ß Agarosová elektroforéza, izolace produktu ß ligace do vektoru pCR2.1-TOPO (Invitrogen) ß Transformace buněk TOP10 (Invitrogen) ß Kultivace transformovaných buněk, selekce klonů, izolace plasmidů ß Sekvenační PCR s univerzálními značenými primery ß Sekvenování

  13. 3131 (3136 normální sekvence) ę TTGATGTTAGGACATCGATG ACATCGATGTTGATGTTAGG M.K. – sekvence mutované klonované alely 24. exonu genu ATP8B1 3122 ę 3117TGGGGTCCTAACATCGATGATCCTCTTCTTCATAC 3117TGGGGTCCTAACATCGATGATCCTCTTCTTCATAC

  14. Potvrzení delečně - inzerční mutace metodou RFLP 202 bp EcoO109I 16 bp Bsp143I 167 bp ...CTTGTTGCATGGGGTCCTA ACATCGATGATC... ...GAACAACGTACCCCAGGAT TGTAGCTACTAG... Bsp143I ...CTTGTTGCATGGGGACATCGATGTTGATGTTAGGACATCGATGATC... ...GAACAACGTACCCCTGTAGCTACAACTACAATCCTGTAGCTACTAG... 233 bp 167 bp

  15. Závěr I • Fenotyp choroby je u studovaného nemocného podmíněn dvěma různými mutacemi v genu ATP8B1/FIC1 • Bodová mutace T1982C (I661T) je známá mutace asociovaná s BRIC bez progrese jaterního onemocnění • Mutace v pozici 3122 je dosud neznámá delečně - inzerční mutace, jejímž důsledkem je záměna dvou hydrofobních aminokyselin 1041 Val-Leu uprostřed 7. membránové domény proteinu ATP8B1/FIC1 za Asp--Ile-Asp--Val-Asp--Val-Arg+vedoucí pravděpodobně k chybnému vložení proteinu do buněčné membrány a tím k narušení jeho funkce

  16. Závěr II • Studovaný nemocný je prvním případem složeného heterozygota s BRIC • Mutace nalezená v exonu 24 je novou v pořadí čtvrtou mutací nalezenou u pacienta s tímto onemocněním • Prognóza pacienta M.K. je vzhledem k heterozygotnímu stavu pro mutaci T1982C (I661T) pravděpodobně příznivá

  17. ? Máte v péči nemocné s chronickou cholestázou či s konjugovanou hyperbilirubinémií nejasné etiologie? Nabízíme spolupráci při jejich vyšetřování. Kontakt: MUDr. Milan Jirsa, CSc. Laboratoř experimentální hepatologie IKEM e-mail: Milan.Jirsa@medicon.cz

More Related