1 / 7

Stanovení metanefrinů v plazmě vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií

Stanovení metanefrinů v plazmě vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií. (G.Eisenhofer, Clinical Neurochemistry laboratory, NIH, Bethesda, USA). Alice Vránková Laboratoř endokrinologie a metabolismu ÚLBLD - VFN a III.interní kliniky 1. LF UK, Praha, Česká Republika.

misae
Download Presentation

Stanovení metanefrinů v plazmě vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Stanovení metanefrinů v plazmě vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (G.Eisenhofer, Clinical Neurochemistry laboratory, NIH, Bethesda, USA) Alice Vránková Laboratoř endokrinologie a metabolismu ÚLBLD - VFN a III.interní kliniky 1. LF UK, Praha, Česká Republika

  2. Dieta a odběr vzorku před stanovením • Interferující medikace: • Acetaminofen v jakékoli formě (např. Tylenol, Paralen, Excedrin a kombinované léky proti • nachlazení). • Léky obsahující katecholaminy a jejich deriváty (např. α-methyldopa, α- methyl-para-tyrosin, • isoproterenol, dobutamin, carbidopa). • Interferují rovněž některá antidepresiva. • Interferující potraviny: • Kofein (káva, čaj a další povzbuzující nápoje). • Odběr krve: • Odběr krve ráno, nalačno, kanylou. (Kanyla se zavádí nejméně 15 min před odběrem, ležícímu • pacientovi - omezení stresu). • Po 15i minutách - proplach kanyly heparinem nebo fyziologickým roztokem • - odběr do odpadní zkumavky (odstranění heparinu) • - vlastní odběr - zkumavka s heparinem (Vacutainer zelená) - zkumavka s EDTA (Vacutainer fialová) • Zkumavky před odběrem je vhodné předchladit, po odběru obložit ledem a do dvou hodin • zcentrifugovat. • Laboratoř: • Centrifugace při 4°C, odběr plazmy do plastové zkumavky, zmrazení (-80°C).

  3. Extrakce analytů z plazmy Extrakční kolonky je nutné nejdříve aktivovat a promýt 10% hydroxidem amonným a 2 ml 1% hydroxidu draselného v methanolu a poté 2 ml vody. Poté je možné uvést 0,5 ml plazmy na kolonku se standardními vzorky. Současně se na všechny kolonky uvádí vnitřní standard (IS) HMBA v množství 2 ng (74 nmol.l-1) na kolonku. Dalším krokem je promytí extrakčních kolonek 2 ml 10 mmol.l-1 kyseliny octové v methanolu, poté 2 ml 20 mmol.l-1 fosforečnanu amonného o pH 8,5 a nakonec 2 ml vody. Analyty zadržené na kolonkách nakonec eluujeme 2 ml 10% hydroxidu amonného v methanolu. Eluát odpařujeme ve vakuové odparce a odparek rozpustíme ve 150 µl mobilní fáze (MF). Takto připravený roztok nakonec dávkujeme na kolonu kapalinového chromatografu.

  4. HPLC stanovení Standardy: NMN ((±) normetanefrin hydrochlorid), MN ((±) metanefrin hydrochlorid) a HMBA (4-hydroxy-3-methoxybenzylamin-hydrochlorid) používaný jako vnitřní standard (Sigma-Aldrich, St.Louis, USA) Chromatografie:HPLC systém Agilent 1100 složený z odplyňovače G1379A, kvartérní pumpy G1311A, autosampleru G1329A, termostatu autosampleru G1330B, termostatu kolony G 1316A (Agilent Technologies, Wilmington, USA) Detektor a analytická kolona: Elektrochemický (coulometrický) detektor,- Coulochem III (ESA, Chelmsford, USA), coulometrické cely (ESA, Chelmsford, USA (excl.zast.Radanal)), předkolona SecurityGuard [4,0x3,0 mm] a analytická kolona C18, velikost částic 5 µm, [250x4,6 mm] (Phenomenex, Torrance, USA) Mobilní fáze (MF): 88 mM NaH2PO4. 2H2O, 590 µM oktan sulfonát, 27 µM EDTA, CH3CN: deionizovaná H2O (7,5 : 100), pH 3,25

  5. Vybrané publikace a prezentace Původní články: ZELINKA, Tomáš; ŠTRAUCH, Branislav; PETRÁK, Ondřej; HOLAJ, Robert; VRÁNKOVÁ, Alice, et al. Increased blood pressure variability in pheochromocytoma compared to essential hypertension patients. Journal of Hypertension. 2005, 23, s. 2033-2039. WIDIMSKÝ, Jiří Jr; ZELINKA, Tomáš; PETRÁK, Ondřej; ŠTRAUCH, Branislav; ŠAFAŘÍK, Libor; KASALICKÝ, Mojmír; VRÁNKOVÁ, Alice; HOLAJ, Robert. Regrese intimo - mediální tloušťky společné karotidy u nemocných po operaci feochromocytomu. Vnitřní lékařství. 2007, 53, 4, s. 428-433. HOLAJ, Robert; ZELINKA, Tomáš; PETRÁK, Ondřej; ŠTRAUCH, Branislav; WICHTERLE, Dan; VRÁNKOVÁ, Alice; et al. Increase carotid intima-media thickness in patients with pheochromocytoma in comparison to essential hypertension. Journal of Human Hypertension. 2009, 23, 5, s. 350-358. VRÁNKOVÁ, Alice; ŠKRAMLÍKOVÁ, Tereza; WIDIMSKÝ, Jiří Jr; ZELINKA, Tomáš; et al. Determination of Metanephrine and Normetanephrine in Blood Plasma by HPLC with Electrochemical Detection. Chemické Listy. 2010, 104, s. 251-256. VRÁNKOVÁ, Alice; ŠKRAMLÍKOVÁ, Tereza; WIDIMSKÝ, Jiří Jr; ŠKRHA, Jan; JŮZOVÁ, Zdenka. Porovnání výsledků HPLC metod na stanovení metanefrinu a normetanefrinu z moče a z krevní plazmy vzhledem k diagnostice tumoru feochromocytomu. Chemické Listy. 2010, 104, 16, s. 784-787.

  6. Abstrakta k posterovým sdělením: VRÁNKOVÁ, Alice; JŮZOVÁ, Zdenka; WIDIMSKÝ, Jiří Jr; ZELINKA, Tomáš; ŠKRHA, Jan. Příprava metody stanovení volných plazmatických metanefrinů vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií s elektrochemickou detekcí. Chemické Listy. 2006, 100, 8, s. 605. VRÁNKOVÁ, Alice; JŮZOVÁ, Zdenka; WIDIMSKÝ, Jiří Jr; ZELINKA, Tomáš; ŠKRHA, Jan. Stanovení plazmatických katecholaminů vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií s elektrochemickou detekcí. FONS. 2006, s. 127. (Ocenění posterového sdělení) VRÁNKOVÁ, Alice; JŮZOVÁ, Zdenka; WIDIMSKÝ, Jiří Jr; ZELINKA, Tomáš; ŠKRHA, Jan. Příprava metody stanovení volných plazmatických metanefrinů vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií s elektrochemickou detekcí. Chemické zvesti. 2007, 1, 3, s. 162. VRÁNKOVÁ, Alice; JŮZOVÁ, Zdenka; WIDIMSKÝ, Jiří Jr; ZELINKA, Tomáš; ŠKRHA, Jan. Stanovení volných plazmatických metanefrinů vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií s elektrochemickou detekcí. Klinická Biochemie a metabolismus. 2007, 15, s. 84. VRÁNKOVÁ, Alice; JŮZOVÁ, Zdenka; WIDIMSKÝ, Jiří Jr; ZELINKA, Tomáš; ŠKRHA, Jan. Determination of plasma metanefrines by HPLC-EC. Vitamins 2007 Nutrition and diagnostics. The abstract book. 2007, s. 154-155. PETRÁK, Ondřej; ŠTRAUCH, Branislav; ZELINKA, Tomáš; ROSA, Ján; HOLAJ, Robert; VRÁNKOVÁ, Alice. Influence of Catecholamines on Arterial Stiffness in Pheochromocytoma. Artery Research. 2007, 1, 2, s. 62-63.

  7. Příprava na program TIP - Katecholaminy: Vzorky plazmy: Počet vzorků změřené plazmy od pacientů s normálními hodnotami NMN a MN: 905 Počet vzorků změřené plazmy od pacientů s vysokými (patologickými) hodnotami NMN a MN: 65 3 – Methoxytyramin:

More Related