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B ckerhefe und Zellalterung

Zelltod und Altern von Hefezellen. Bckerhefe (Saccharomyces cerevisiae) wird in einem geeigneten Kulturmedium angezchtet. Das Sterben von einzelnen Hefezellen kann ber mehrere Verfahren bestimmt werden:berlebensplattierungFACS-Analyse. FACS=Fluoreszenz-Aktivierter-Zell-SortiererFluoreszen

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B ckerhefe und Zellalterung

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Presentation Transcript

    1. Bäckerhefe und Zellalterung Hefezellen sind eukaryonte einzellige Pilze und vermehren sich in Kulturen sehr rasch. Die Bäckerhefe dient für viele Vorgänge auf zellulärer Ebene als Modellorganismus. So kann die Entstehung von Krebs oder aber auch das Altern und der Zelltod in der Hefe untersucht werden.

    2. Zelltod und Altern von Hefezellen Bäckerhefe (Saccharomyces cerevisiae) wird in einem geeigneten Kulturmedium angezüchtet. Das Sterben von einzelnen Hefezellen kann über mehrere Verfahren bestimmt werden: Überlebensplattierung FACS-Analyse. FACS=Fluoreszenz-Aktivierter-Zell-Sortierer Fluoreszenz-Mikroskopie Im Kurs werden die Daten aus der FACS-Analyse mit den Resultaten der Fluoreszenz-Mikroskopie verglichen

    3. Überlebensplattierung. Eine Anzahl von genau 500 Zellen (diese werden zuvor mit einem Zellzählgerät gezählt) aus der Kultur wird auf einer Agarplatte ausgebracht. Die entstehenden Kolonien werden als noch lebende Zellen aus den ursprünglich 500 gezählt. Zum Beispiel 250 Kolonien auf der Platte = 50% Überleben.

    4. FACS-Analyse Hefezellen werden einer Kultur zu einem bestimmten Zeitpunkt entnommen und mit einem Fluoreszenzfarbstoff gefärbt. DHE (Dihydroethidium) Färbung zum Nachweis von reaktiven Sauerstoff-Spezies (z.B.: H2O2) in den Zellen. Zellstress wird so nachgewiesen. DHE positive Zellen sind solche, die Apoptose betreiben (Aktiver Zell-Selbstmord) TUNEL Färbung zum Nachweis der DNA-Fragmentierung im Zellkern. TUNEL positive Zellen sind solche, die Apoptose betreiben.

    5. DHE-Färbung (FACS Analyse)

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