Hmotnostní spektrometrie (1)

1. Hmotnostní spektrometrie (1) Josef Chudoba

2. OBSAH Hmotnostní spektrometrie Hmotnostní spektrum – základní pojmy, molekulová hmotnost, izotopy prvků způsoby měření spekter Rozlišovací schopnost spektrometru Ionizační techniky v hmotnostní spektrometrii Typy hmotnostních spektrometrů Součásti hmotnostního spektrometru – iontový zdroj separátor iontů vakuový systém způsob dávkování vzorku

3. Hmotnostní spektrometrie (Mass Spectrometry – MS) Analytická technika pro analýzu organických sloučenin Kvalitativní analýza – identifikace sloučenin (především nízkomolekulární sloučeniny), pomoc při odvození resp. potvrzení struktury molekuly (výšemolekulární sloučeniny) Kvantitativní analýza – sledování obsahu vybraných analytů v různých matricích Ale i sledování obsahu kovů (ICP MS) Speciální aplikace pak např. ISOTOPE RATIO MS Podstatou MS je detekce nabitých částic (iontů), které vznikají z molekul vzorku při IONIZACI – jedná se o destruktivní metodu – vzorek je při analýze znehodnocen VZORKY JAKÉHO SKUPENSTVÍ A S JAK VELKOU MOLEKULOU LZE POMOCÍ MS ANALYZOVAT ?

4. VZORKY JAKÉHO SKUPENSTVÍ A S JAK VELKOU MOLEKULOU LZE POMOCÍ MS ANALYZOVAT V hmotnostní spektrometrii se používají různé ionizační techniky, ale v praxi lze ionty vytvořit i z vysokovroucích, vysokomolekulárních sloučenin Od vodíku (1 Da) po proteiny s molekulovou hmotností v řádech 10 000 Da, záleží na ionizační technice a hmotnostním spektrometru CO LZE ROZLUŠTIT Z HMOTNOSTNÍHO SPEKTRA • Hmotnost iontu (popř. molekulovou hmotnost sloučeniny) • Přítomnost prvků, které mají výrazné zastoupení izotopů (např. Cl, Br) • Při pokročilé fragmentaci molekuly informace o struktuře sloučeniny • Je-li hmotnost molekulového resp. pseudomolekulového iontu měřena s dostatečnou přesností tak i možné elementární složení sloučeniny

5. Hmotnostní spektrum Intenzita Molekulový resp. pseudomolekulový ion [ M + H ]+ Izotopické příspěvky m/z Osa x: m/z – hmotnost iontu dělena jeho nábojem Osa y: intenzita (četnost) fragmentů, které detekuje detektor – je vždy normalizována na nejvyšší změřenou intezitu ve spektru – nejvyšší pík má výšku 100 %

6. Režim záznamu dat Hmotnostní spektrum centrovaný (centroid) – především u GC/MS instrumentace - intenzity m/z iontů tvar „čáry“ kontinuální (continous) – u LC/MS instrumentace intenzity m/z iontů tvar chromatografického píku [ M + H ]+ Erythromycin

7. MOLEKULOVÁ HMOTNOST Molekolová hmotnost - jednotka dalton (Da) 1 Da = 1 amu (atomic mass unit) = hmotnost 1/12 izotopu 12C 1 Da = 1,660 338 782 x 10-27 kg Molekulová hmotnost – hmotnost molekuly /prvků/ (jednotka amu) Molární hmotnost – hmotnost 1 molu molekul (jednotka g/mol) číselně molární hmotnost a molekulová hmotnost shodné monoisotopická - v praxi počítána z hmotností nejstabilnějších (nejvíce zastoupených izotopů prvků), průměrná - zohledňuje hmotnosti všech izotopů prvků nominální – zaokrouhlená (celočíselná) monoisotopická hmotnost

8. MOLEKULOVÁ HMOTNOST V MS spektrech vždy MONOISOTOPICKÁ hmotnost

9. Nutné doplňující informace k hmotnostnímu spektru • Jaká ionizační technika byla při měření použita • tvrdé ionizační techniky – vlivem přebytku dodané energie se vzniklý molekulový ion dále štěpí • měkké ionizační techniky – malá nebo skoro žádná fragmentace • S jakým rozlišením bylo spektrum měřeno • hmotnost s přesností celého čísla (jednotkové rozlišení) – v praxi nejvíce rozšířené u GC/MS přístrojů • hmota s přesností na desetinná místa • Jaký experiment • (MS vs MS/MS nebo IN SOURCE fragmentace MS)

10. Rozlišovací schopnost spektrometru (R) – jak se rozdělí ionty s blízkou hmotností R = m/ D m m … m/z iontu, D m . . . rozdíl m/z dvojice sledovaných iontů Různé definice rozlišení: „valley“ definice vycházející s překryvu píků „FWHM“ (Full Width at Half Maximum) definice vycházející ze šířky píku Převzato z materiálu Fischer Scientific

11. VYSOKÉ rozlišení (HIGH RESOLUTION) Jsou-li MS spektra měřenas vysokým rozlišením je možné rozdělit sloučeniny se stejnou nominální, ale odlišnou monoisotopickou hmotou [ M + H ]+

12. Je naměřená hmotnost iontu (m/z) správná? Před měřením se provádí kalibrace hmotnostní stupnice pomocí kalibračních standardů – chyba naměřené m/z a skutečné m/z závisí na rozlišovací schopnosti resp. typu spektrometru a kvalitě kalibrace Chyba při měření hmoty ( macc)   macc = m MEASURED -m TRUE  macc (ppm) =106 x macc / m TRUE Kalibrace externí nebo interní - přidavek referenční (lockovací) látky přímo při měření vzorku

13. Hmotnostní spektrum sloučeniny je vždy závislé na použité IONIZAČNÍ TECHNICE IONIZACE – tvrdá (vysoká energie stačí na vytvoření iontu z neutrální molekuly a na další štěpení vzniklých iontů) Elektronová ionizace (Electron Impact) s energií elektronů 70 eV / EI + 70 eV / - rutinně používaná při GC-MS analýzách, proměřeny statisíce látek – databáze spekter (NIST, WILLEY) V praxi pouze kladný mód (tvorba kladně nabitých iontů) IONIZACE – měkká (dodaná energie stačí většinou pouze na vytvoření iontu z neutrální molekuly) Příklad: ionizační techniky rutinně používané při LC-MS analýzách Elektrosprejová ionazace / ESI /. chemická ionizace za atmosferického tlaku / APCI / - kladný i záporný mód (tvorba kladně resp. záporně nabitých iontů) MALDI (Matrix Assisted Laser Desorption) – pro vysokomolekulární sloučeniny

14. Vliv použité ionizační techniky na MS spektrum GC/MS analýza efedrinu

15. Informace z MS spektra – zastoupení izotopů prvků Relativní zastoupení izotopů prvků v přírodě A+2 prvky A+1 prvky A prvky F, I, P, H(vzhledem k nízké intenzitě A+1)

16. Cl2 Br2 Br3 Cl3 Cl I (m/z 35) : I (m/z 37) cca 3:1 Br I (m/z 79) : I (m/z 81) cca 1:1

17. m/z 77 45,3 % m/z 112 100 % m/z 113 6,9 % m/z 114 32,9 % m/z 77 100 % m/z 156 61,8 % m/z 157 4,1 % m/z 158 59,8 % m/z 77 100 % m/z 204 74,5 % m/z 205 4,4 %

18. Přibližný počet atomů uhlíku ve sloučenině (Cn) A:m/z 78 100 % A+1:m/z 79 6,5 % A:m/z 154 100 % A+1:m/z 155 12,9 %

19. Molekulový ion v hmotnostním spektru Rozpoznání molekulového iontu v MS spektru není vždy jednoduché EI+ 70 eV u některých látek chybí (vysoký stupeň fragmentace) nebo je jeho intenzita velmi nízká (možnost záměny s ionty pozadí MS spektra) ESI – tvorba vícenásobně nabitých iontů, tvorba aduktů iontů s Na, K, tvorba dimerů APCI – možné štěpení (vlivem vyšší teploty ve zdroji) Existují však pravidla a postupy, které určení molekulového iontu usnadní EI+ 70 eV: Počet kruhů a dvojných vazeb (RINGS + Double Bonds R+DB); zakázané ztráty iontů, pořadí eluce látek na GC koloně (obvykle vyšší molekulová hmotnost – vyšší bod varu – delší retenční čas) ESI: Známé adukty, výpočet molekulové hmotnosti ze série vícenásobně nabitých iontů

20. Chemická pravidla: Dusíkové pravidlo Dusík – m= 14 Da, třívazný prvek žádný nebo sudý počet atomů dusíku v molekule-> molekulová hmotnost látky je SUDÉ číslo lichý počet atomů dusíku v molekule-> molekulová hmotnost látky je LICHÉ číslo EI+70 eV: 0 nebo sudý počet N: m/z molekulového iontu sudé číslo m/z fragmentů liché číslo lichý počet N: m/z molekulového iontu liché číslo m/z fragmentů sudé číslo ESI+:0 nebo sudý počet N: m/z [M+H]+iontu liché číslo lichý počet N: m/z [M+H]+ iontu sudé číslo ESI-: 0 nebo sudý počet N: m/z [M-H]-iontu liché číslo lichý počet N: m/z [M-H]-iontu sudé číslo

21. Chemická pravidla: Počet kruhů a dvojných vazeb – Rings + Double Bonds (R + DB) Vyjadřuje stupeň nenasycenosti molekuly R+DB = C – ½ H + ½ N +1 C = počet čtyřvazných atomů – C, SiH = počet jednovazných atomů - H, Cl, Br, F … (halogeny)N = trojvazných atomů N, P, As Počet dvouvazných se neuvažuje (dvouvazebná S, O), ale třeba DMSO – síra je čtyřvazná 1 kruh Příklad: fenol C6H5OHR+DB = 6 –1/2*6+1/2*0+1 = 4 3 dvojné vazby Aromáty : R+DB = minimálně 4

22. Využití R+DB a dusíkového pravidla EI+ 70 eV: Celočíselná hodnota R+DB  ion s lichým počtem elektronů může být molekulový ion Neceločíselná hodnota R+DB ion se sudým počtem elektronů nemůže být molekulový ion Využití při strukturní analýze Elementární analýza z High Res MS spektra Vždy nutné předpokládat jaké prvky a kolik kterého maximum – org. látky C, H, N, O, popř. S, přítomnost halogenů lze zjistit z izotopického zastoupení, hrubý odhad max. počtu uhlíků (Cn) Cn (max) = Mw/14 (přesněji z izotop. zastoupení)

23. 10 5 2 1 ELEMENTÁRNÍ ANALÝZA Z HMOTNOSTNÍHO SPEKTRA Přesnost měření hmoty: High-RES MS spektrometry 1 – 3 ppm Erythromycin C37H67NO13 Mw monoiso = 734,4691 Da Příklad vstupní parametry: Cmax = 52, Hmax = 106, Nmax = 15, Omax = 15 Výsledek: navržené kombinace CxHy(Nz,Oz,Sz …) Přesnost měření - chyba hmoty (ppm) Aplikace „chemických“ pravidel (max. počet kruhů a dvoj.vazeb, dusíkové pravidlo, izotopické zastoupení prvků) snižuje počet nalezených kombinací !! – řešeno softwarově 38 výsledků 17 výsledků 9 výsledků 4 výsledky

24. Jakou ionizační techniku vybrat pro jaké sloučeniny? GC/MS Elektronová ionizace(EI+ 70 eV) - v praxi hmotnost do cca 1000 Da, nutná teplotní stálost sloučeniny, ionizace probíhá po zplynění (zahřátí látky) z plynného stavu za vakua, není vyrazně omezena přítomností nějakých funkčních skupin ale např. problematické skupiny NH2-CO- (teplotně labilní) Chemická ionizace (CI) - v praxi hmotnost do cca 1000 Da, nutná teplotní stálost, ionizace probíhá po zplynění (zahřátí látky) z plynného stavu za vakua s přídavkem ionizačního plynu (methan, isobutan) – většinou pouze na vybrané typy sloučenin LC/MS Elektrosprejová ionizace(ESI) – pro teplotně nestálé i vysokomolekulární sloučeniny, ionizace probíhá z roztoku sloučeniny a rozpouštědla (mobilní fáze), sloučeniny musí ale vykazovat určitou polaritu (např. mají kyslík nebo dusík v molekule), vhodný pro iontové sloučeniny Atmosferická chemická ionizace(APCI) - pro teplotně nestálé i vysokomolekulární sloučeniny, ionizace probíhá z roztoku sloučeniny a rozpouštědla (mobilní fáze) ale při vyšší teplotě než ESI, sloučeniny musí ale vykazovat určitou polaritu MATRIX ASSISTED LASER DESORPTION(MALDI) – ionizace vzorku v přítomnosti pevné matrice vzorku laserem – vhodné pro vysokomolekulární, teplotně nestálé sloučeniny i nepolární (polymery, proteiny) Existuje celá řada dalších ionizačních technik – cílem je vždy vytvořit nabitou částici, která je následně analyzována.

25. Jak velké molekuly lze analyzovat Zdroj: Agilent Technologies

26. Jak velké molekuly lze analyzovat GC/MS LC/MS Kvadrupol (Q) Iontová past (IT) V praxi většinou jednotkové rozlišení, maximální m/z cca 1000 – 2000, velmi vysoká frekvence sběru dat (spekter) Měří i s vysokým rozlišení (Rmax ~ 40000), maximální m/z až 500 kDa, velmi vysoká frekvence sběru dat (spekter) GC/MS LC/MS TOF (Time of Flight) LC/MS měří i s vysokým rozlišení (Rmax ~100000), maximální m/z ~4 kDa, pomalejší frekvence sběru dat (spekter) ORBITRAP GC/MS měří i s vysokým rozlišení (Rmax ~40000), maximální m/z ~2000, pomalejší frekvence sběru dat (spekter), Magnetický sektor Přístroje hybridní – umožňují provedení tzv. MS/MS měření (více iontových separátorů) GC/MS LC/MS Tripple Quad (QQQ) Trojitý quadrupol LC/MS Q-TOF Quadrupol – Time Of Flight LC/MS Ion Trap – ORBITRAP iontová past - Orbitrap nebo IT-TOF

27. Jak velké molekuly lze analyzovat ? MALDI 100 - 1000 kDa ESI až 100 kDa APCI až 2 kDa EI+ 70 eV / CI až 1 - 2 kDa TOF ORBITRAP ION TRAP QUADRUPOLE

28. Inlet Analyzátor Plynový chromatograf Kapalinový chromatgraf Direct Insertion (Infussion) Probe MALDI destička Iontový separátor Iontový zdroj Detektor Ionizační techniky: EI+, CI, APCI, ESI, MALDI vakuum Schéma hmotnostního spektrometru

29. SIM (SIR) TIC Full SCAN (Total Ion Current TIC) cyklicky se snímá celé MS spektrum požadovaného rozsahu m/z Rekonstruovaný chromatogram (RIC)  z TICu se vybere požadovaný ion a vykreslí se chromatografický záznam Selected Ion Monitoring (SIM)  cyklicky se snímají jen vybrané ionty  citlivější než TIC režim např. u kvadrupolu detegované absolutní množství analytu činí: TIC řádově ng (10–9g) SIM řádově pg (10–12g) až fg (10-15 g) Režimy snímání dat: MS experiment Intenzita čas m/z

30. Režimy snímání dat: MS/MS experimenty Detektor Iontový zdroj Kolizní cela Pouze hybridní MS spektrometry a tripple Quad Product Ion Scan: Q1: izolace iontu (SIM) Q2: fragmentace iontu Q3: TIC detekce Instrumentace: Tripple Quad, Q-ToF (MS2); Ion Trap (až MS10) s vyšším MSn klesá citlivost! Precursor Ion Scan: Q1:TIC (m/z1 – m/z2) Q2: fragmentace iontu Q3: SIM detekce Instrumentace: nelze na Ion Trap Constant Neutral Loss Scan: Q1:TIC (m/z1 – m/z2) Q2: fragmentace iontu Q3: TIC ((m/z1- DN) – (m/z2-DN)) detekce;DN – rozdíl hmotností iontů – hmotnost odpadající neutrální částice z iontu Instrumentace: nelze na Q-ToF a Ion Trap Selective Reacrion Monitoring (SRM): Q1: izolace iontu (SIM) Q2: fragmentace iontu Q3: SIM detekce Fragmentace probíhá srážkou iontů s molekulami kolizního plynu (Argon)

31. Které vlastnosti MS spektrometru jsou v praxi důležité … Cena, provozní náklady, účel využití !!! Napojení na separační techniku: GC/MS X LC/MS Technické parametry: Single (jeden iont. separátor) x hybridní (více separátorů) Rozsah scanování m/z (nejnižší a nejvyšší m/z) Rychlost scanování (počet scanů/s) Citlivost, dynamický rozsah (pro kvantitativní analýzu) Rozlišovací schopnost (vysokorozlišující X jednotkové rozlišení) Kompatibilita s ionizačními technikami (dostupné iontové zdroje) Vakuum (je-li třeba vyšší stupeň vakua – vyšší cena) Požadavky na instalaci: Chlazení pump vakuového systému (vodní nebo vzdušné) Velikost systému - přenosné x stolní (BENCH-TOP) x velké (hmotnost > 500 kg) Plyny – např. LC-MS průtok N2 až 500 l/min – nutný generátor N2 nebo zdroj kapalného N2

32. MS - iontový zdroj a ionizační technika Electron Impact (EI + 70 eV) – elektronová ionizace nejpoužívanější u GC/MS, nejvíce prozkoumaná ionizační technika U většiny látek se hodnota energie pro tvorbu moleku-lového iontu pohybuje okolo 10 eV  70 eV přebytek energie dostatečný pro tvorbu moleku-lového iontu a také pro tvorbu fragmentů z molekulového iontu Dnes jsou k dispozici obsáhlé databáze (knihovny) spekter EI+ dnes běžně ve spojení s GC Látka je ionizována proudem elektronů ve vakuu z plynné fáze Ionizace probíhá ve vakuu Schéma EI+ ionizačního zdroje

33. MS - iontový zdroj a ionizační technika ESI (Electrospray) V proudu dusíku za zvýšené teploty dojde v elektrickém poli k tvorbě spreje. V kapičkách kapaliny dojde k povrchové lokalizaci náboje a následné tvorbě iontu. Při této ionizaci vznikají často i vícenásobně nabité ionty a adukty např. (M+Na)+ - ionizace probíhá za atmosferického tlaku

34. MS - iontový zdroj a ionizační technika APCI (Chemická ionizace za atmosferického tlaku) V proudu dusíku za zvýšené teploty dojde k tvorbě spreje a vypařování látky i mobilní fáze. Na jehlu je vloženo vysoké napětí, výbojem vzniká plazma a v ní ionty zmlžovacího plynu (N2) , mobilní fáze a analytu. Ionty plynu reagují s molekulami mobilní fáze a vzniklé ionty předají náboj analytu.

35. MS - iontový zdroj a ionizační technika Zdroj pro APCI a ESI je prakticky konstrukčně shodný, liší se v přítomnosti jehly pro koronový výboj (APCI). Existují i kombinované zdroje ESI/APCI. U sprayových ionozací vždy záleží na povaze analytu – nutno zvolit pozitivní nebo negativní mód APCI – první komerční využití – 1986 oproti ESI lze použít vyšší průtok mobilní fáze, vyšší teplota, vyšší stupeň fragmentace ESI – první komerční využití – 1988 2002 – Nobelova cena za chemii: John Bennett Fenn Kompatibilní pouze s LC s reverzním uspořádáním fází (polární mobilní fáze), tvorba vícenásobně nabitých iontů, ionizace z roztoku, lze analyzovat i soli

36. MS - iontový zdroj a ionizační technika MALDI (Matrix Assisted Laser Desorption) Roztok vzorku je smíchán s roztokem matrice (nízkomolekulární UV absorbující látka) na spotovací destičce. Ta je vložena do zdroje, kde dochází k tvorbě „pevné směsi“ matrice a vzorku. Účinkem energie dodané laserovým pulzem dochází k ionizaci aduktu matrice-vzorek a následně odtržení matrice. Ionty analytu jsou měřeny obvykle TOF analyzátorem. Příklad matrice: 2,5-dihydroxybenzoová kyselina, laser 337 nm.Vzorek mM roztok, matrice 100 mM roztok Tvorba obvykle jednonásobně nabitých iontů (M+H)+, (M+K)+, (M+Na)+ Spotovací destička NELZE spojit s HPLC!!!

37. Zdroj:Agilent Technologies

38. Zdroj:Agilent Technologies

39. MS - separátory iontů lineární kvadrupol konstrukčně se jedná o 4 kovové tyče hyperbolického nebo kruhového průřezu, které jsou připojeny ke zdrojům DC a AC napětí. Ionty, které vlétnou do prostoru mezi tyčemi, se dostanou do střídavého elektrického pole a začnou oscilovat. Při vhodném poměru DC a AC složky napětí a dané hodnotě těchto napětí projdou kvadru-polem pouze ionty o určitém poměru m/z. Zařízení se chová jako filtr nastavený na určitou hodnotu m/z. Změnou vkládaných napětí je možné nechat projít filtrem postupně ionty v celém rozsahu hodnot m/z

40. MS - separátory iontů Iontová past (ion trap)  účinkem elektrického pole jsou ionty uzavřeny v ohraničeném prostoru. Iontová past se skládá ze vstupní a z výstupní elektrody kruhového průřezu a z prstencové středové elektrody. Krajní elektrody jsou uzemněny, na středovou elektrodu je vkládáno vysokofrekvenční napětí s proměnnou amplitudou. Ionty jsou nuceny pohybovat se uvnitř iontové pasti po uzavřených kruhových drahách  s rostoucí amplitudou napětí se ionty s rostoucím m/z dostávají na nestabilní trajektorie a opouštějí prostor iontové pasti směrem do detektoru

41. MS - separátory iontů Průletový analyzátor (time of flight TOF) je tvořen prázdnou trubicí. K časovému rozdělení iontů podle m/z dochází na základě jejich odlišné doby letu z iontového zdroje do detektoru. Nutná konstatantní stabilní teplota - st Hmotnější ionty se pohybují nižší rychlostí než ionty lehčí a dorazí do detektoru později.Dosažené rozlišení závisí na délce dráhy, kterou ionty v průletovém analyzátoru urazí.

42. B V MS - separátory iontů Magnetický - sektorový hmotnostní analyzátor umožňuje prostorové rozdělení svazku iontů podle hodnoty m/z, konstrukčně se jedná o elektromagnet, mezi jehož pólovými nástavci prochází fokusovaný paprsek iontů z elektrického pole r ionty o rozdílném poměru m/z opisují dráhy o různých poloměrech  dochází k prostorové disperzi iontů podle jejich hmotnosti

43. MS - separátory iontů ORBITRAP Svazek iontů je v C-trapu zbržděn kolizí s molekulami dusíku, stlačen a vystřelen do Orbitrapu. Na jeho centrální elektrodě se postupně zvyšuje napětí a ionty se začínají spirálově pohybovat – generují proudový signál, který je pomocí Fourierovy tranformace převeden na MS spektrum Octapole Osa z elektroda

44. MS - detektor iontů detektor  zařízení, které detekuje ionty separované hmotnostním separátorem Elektronový násobič konverzní dynóda umožňuje konvertovationty na sekundární elektronya ty dále lavinovým jevem, v tzv. channeltronu tvaru rohu, emitují další elektrony. Měří se vzniklý proud. Elektronásobič je citlivý na přetížení. Fotonásobičkonverzní dynóda umožňuje konvertovat ionty na sekundární elektrony. Tyto elektrony při interakci s fosforem emitují fotony. Fotonový signál je zesílen ve fotonásobiči. Fotonásobič je zataven ve skle a je tak velmi rezistentní vůči poškození.

45. MS - vakuum EI+ 70 eV, CI, MALDI – vakuum i ve zdroji spektrometru, všechny spektrometry vakuum v analyzátoru: aby byla zachována dlouhá dráha letu nabitých částic (mohly být detekovány) Spektrometry mají vždy dvoustupňový systém vakua 1. Stupeň vakua rotační olejové vývěvy – vakuum cca 10-2 mBar – slouží pro provoz pump 2. stupně vakua

46. MS - vakuum 2. Stupeň vakua cca 10-5 až 10-8 mBar (1 mBar = cca 100 Pa) turbomolekulární pumpa difuzní olejová pumpa

47. MS - způsob vnosu vzorku EI+ 70 eV: GC/MS – kapilární GC kolona (split, splitless, PTV inlet) evakuvatelný reservoar se septem kapilárou napojený do iontového zdroje sonda přímého vstupu (Direct insertion Probe - DIP) – vzorek je v mikrovialce v držáku vyhřívané sondy zaveden přímo do iontového zdroje přes vacuum lock • ESI, APCI: LC/MS – mobilní fáze je pumpou čerpána přes LC kolonu a (popř. přes celu UV detektoru)kapilárou do zdroje (v případě potřeby se průtok před vstupem do MS splituje) • Direct Infusion (DI) - přímý nástřik robotickou stříkačkou (mechanický posuv pístu) kapilárou do zdroje • Flow Injection Analysis (FIA) nástřik přes vebtil do proudu mobilní fáze čerpané pumpou LC chromatografu kapilárou do zdroje

48. Hmotnostní spektrometr Přenosný GC-MS HAPSITE (firma Inficon, Inc. U.S.A) Nasazení v Afganistánu (britské jednotky)

49. Hmotnostní spektrometr Sektorový hmotnostní spektrometr

50. Hmotnostní spektrometr Kvadrupolový hmotnostní spektrometr s GC chromatografem