1 / 14

VLIV KONZERVACE TKÁNÍ NA VÝSLEDKY MOLEKULÁRNĚ GENETICKÝCH ANALÝZ K. Horká, Á. Bóday

VLIV KONZERVACE TKÁNÍ NA VÝSLEDKY MOLEKULÁRNĚ GENETICKÝCH ANALÝZ K. Horká, Á. Bóday. TKÁŇOVÁ BANKA. září 2007 – založení tkáňové banky ( nejedná se o tk. banku ve smyslu platných právních předpisů )

oma
Download Presentation

VLIV KONZERVACE TKÁNÍ NA VÝSLEDKY MOLEKULÁRNĚ GENETICKÝCH ANALÝZ K. Horká, Á. Bóday

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. VLIV KONZERVACE TKÁNÍ NA VÝSLEDKY MOLEKULÁRNĚ GENETICKÝCH ANALÝZK. Horká, Á. Bóday

  2. TKÁŇOVÁ BANKA • září 2007 – založení tkáňové banky ( nejedná se o tk. banku ve smyslu platných právních předpisů ) • indikované případy – Ca prsu a kolorekta – část tkáně zamražena na – 80°C, druhá část konzervována v RNA lateru • výrazné zefektivnění výsledků molekulárně genetických analýz

  3. CO SE DĚJE S TKÁNÍ V LABORATOŘI GENETIKY ? • izolace nukleových kyselin • polymerázová řetězová reakce ( PCR ) • SSCP • sekvenování

  4. IZOLACE NUKLEOVÝCH KYSELIN( dříve) r. 1869 – F. Miescher – první izolace z buněk hnisu ( nuklein)

  5. IZOLACE NUKLEOVÝCH KYSELIN( dnes ) • genetický materiál – leukocyty, lymfocyty, amniocyty, fibroblasty, buňky choriových klků, bukální sliznice, biopsie • komerční kity – rychlá, spolehlivá a pohodlná izolace

  6. METODY IZOLACE NK • 4 základní kroky : • lýza erytrocytů ( krev ), mechanické narušení tkáně • lýza buněk ( leukocytů ) • pročištění NK • vysrážení NK • měření čistoty a koncentrace DNA

  7. PCR polymerázová řetězová reakce • Nobelova cena za objev r. 1983 • metoda mnohonásobného zmnožení (amplifikace) vybraných úseků DNA in vitro • obdoba replikace DNA, která se odehrává v buňkách • probíhá v termocycleru

  8. PCR polymerázová řetězová reakce 4.cyklus 3.cyklus úsek k namnožení 2.cyklus 1.cyklus 32.cyklus templ. DNA 4 kopie 8 kopií 16 kopií 1 miliarda kopií

  9. cyklické střídání těchto teplotních kroků : • - denaturace – 94-98°C , rozvolnění dvoušroubovnice • annealing – 50 – 65°C, nasednutí primerů a polymerázy • elongace – prodlužování vybraného úseku DNA

  10. SSCP( single strand conformation polymorhism) • orientační metoda k vyhledávání neznámých mutací v genomu

  11. SSCP v praxi • polyakrylamidový gel • teplota 4°C • napětí 110 V • 20 – 30 hodin • barvení gelu stříbrem • hodnocení rozdílů v polohách jednotlivých pruhů • účinnost metody 70 - 90 % mutace

  12. SEKVENOVÁNÍ • potvrzuje a přesně definuje přítomnost mutace • sekvenátory - přístroje s laserovým detektorem ke zjištění pořadí nukleových bazí A, C, G, T mutace

  13. SHRNUTÍ formolová fixace RNA later -80°C parafínový bloček míra degradace DNA

  14. DĚKUJI ZA POZORNOST

More Related