260 likes | 768 Views
Penyiapan Kultur Starter. Bioindustri Minggu 6 Oleh : Sri Kumalaningsih. Pendahuluan. Ada beberapa faktor yang mempengaruhi keberhasilan produksi barang dan jasa dengan menggunakan mikroorganisme diantaranya adalah jenis mikroorganisme, kondisi lingkungan dan media/kultur yg digunakan.
E N D
Penyiapan Kultur Starter Bioindustri Minggu 6 Oleh : Sri Kumalaningsih
Pendahuluan • Ada beberapa faktor yang mempengaruhi keberhasilan produksi barang dan jasa dengan menggunakan mikroorganisme diantaranya adalah jenis mikroorganisme, kondisi lingkungan dan media/kultur yg digunakan. • Salah satu hal yang menentukan keberhasilan kultur adalah adanya penyiapan kultur yang baik. • Untuk itu perlu dipelajari tentang penyiapan kultur dan mikroorganismenya.
Mikroba Industri • Tahappertamadalamseleksimikroba yang akandigunakanuntukindustriadalahisolasimikroba, sehinggadiperolehkulturmurni (sifatmorfologi & fisiologiseragam). • Setelahitudilakukanseleksisehinggadiperolehgalurdengankinerja terbaik. • Terakhirbarudilakukanidentifikasidenganmenggunakankunci-kunci yang sesuai, sehinggadiketahuinama (klasifikasi) mikrobatersebut • Mikrobaygtelahdiperolehsepatutnyadisimpandenganbaikdgnteknikpenyimpananygbaik, sehinggakemurniannyaterpeliharadalamjangkawaktuygpanjang.
PENYIAPAN KULTUR • Isolasikultur : kegiatanpemisahansuatukulturmikrobadaricampuranbiakanmikrobadialamselindividuterpisah • Sebelummengisolasi, harusdiketahuimikrobaapa yang akandiisolasidanhabitatnyamenentukansampelapa yang akandiambildarialamdan media apa yang akandigunakan • Sampelbiasanyasegeradipakaiataudisimpanpadasuhudingin (kulkas)
TEKNIK ISOLASI a. TeknikPenggoresan (Streak-plate) danPenyebaran (Spread-plate) • Menggunakan agar cawan • Untukbakteri paling sesuai • Teknikinimerupakanprosedurrutinuntukisolasibakteri & menggunakanperalatan yang sederhana. • Kelemahan : hanyasejumlahkecilcontoh yang dapatdigunakan/disebarkanpada media • Duaseldapatbergabungmanjadimembentuksatukoloni, contoh : bakteri yang menghasilkanlendir & yang tidakpencegahandenganmenambahkandeterjen
TeknikPenggoresan (Streak-plate) danPenyebaran (Spread-plate) Sampel Pengenceranberseri dg larutangaramfisiologis (0,85 %) Penggoresan(jarumOse) ataupenyebaran (batanggelas) pada media agar , sehinggakolonitumbuhmenyebar Penggoresandilakukanberulang, sehingga Diperolehkulturmurni 1 sel 1 koloni
TeknikPenggoresan (Streak-plate) danPenyebaran (Spread-plate) Goresan T Goresan Kuadran
b. TeknikPenuangan (Pour-plate) • MetodePenuanganPengamatandapatdilakukansecarakualitatif (morfologi) & kuantitatif (jumlahselmikroba) • Teknikpenggoresan/penyebarandanpenuanganinilebihefektifdenganmenggunakan media selektif/ diferensialataudenganperlakuankhusussebelumpenanamanpada agar cawan • Contoh : Isolasibakteripembentuksporacontoh dipanaskanterlebihdulus.d 850C 5 menit
Lanjutan... • Media Selektif : • Media dg NaCl 7,5 % untmengisolasiStaphylococcusdarifaeces • Media BGLBB (Brilliant Green Lactose Bile Broth) : Salmonellae • Media Diferensial : • Media agar EMB (eosin-methylene blue agar) terbentukkoloniberbeda & mudahdikenali Misal : E. coli : hijaukehitaman/hijaumetalik Aerobacteraerogenes : tengahungutua/coklat, tepiungumuda
TeknikPenuangan (Pour-plate) Sampel +/- 1 g) . . . . . . . . 1 loop . . A A Agar cair Diperiksa . . . . . . . . . . B B Koloni terisolasi Pengenceran Suspensi Bakteri Penuangan Dibiarkan mengeras . . . . . . . . . . C C Inkubasi Tahap I Tahap II Tahap III Media agar miring
c. TeknikKultur yang Diperkaya • Untukmengisolasibakteri yang mempunyaisifatfisiologis yang khusus (jumlahkecil & tumbuhlambat) • Prinsip : menggunakankomposisi media dankondisiinkubasitertentu, sehingga yang tumbuhhanyabakteritertentu • Cara: 1 2 3 4 Media cair dgn substrat khusus Contoh : bakteri tanah : α-conidendrin (-) (+) Verifikasi
d. TeknikPengenceranBerseri (Serial dilution) • Digunakanjikamikrobadlmkulturcampuranterdapatdalamjumlahlebihbesardaripadamikroba lain. Contoh : S. lactisdalamsusuasam • Dengantingkatpengencerantinggi, sampelhanyamengandung 1 galurmikroba • Perludicekkemurniankultur
e. TenikIsolasiSel Tunggal • MenggunakanalatMikromanipulator yang digabungdenganmikroskopuntukmengambilsuatuselmikrobatunggaldaripreparattetesbergantung • DenganMikromanipulator, operator dapatmengontrolgerakanmikropipetdibawahlensaobyek, sehinggadapatdiambilseltunggalkedalamtabungdanselanjutnyadipindahkanke media yang sesuai • Lebihcepat, namunkelemahannya : alatmahal & operator harustrampil
Contoh 1. KarakteristikMorfologis Aspergillus E. coli Streptomyces Penicillium
PEMELIHARAAN DAN PENGAWETAN • Tujuan : • menjagasampaiperiodetertentumikrobatetapdalamkondisihidup (viable), mencegahterjadinyaperubahangenetik & tidakterkontaminasiharusmampumelestarikankarakteristikspesiesmikrobaselamadiawetkan • Cara : • PemindahanSecaraPeriodik • Pelapisan kultur dengan minyak mineral • Liofilisasi • Penyimpanan pada suhu sangat rendah • Penyimpanan pada tanah steril