原理： 酵素反應法 cholesterol esterase cholesterol ester ＋ H 2 O → cholesterol ＋ fatty acid

1. 膽固醇測定法 討論： • 原理： • 酵素反應法 • cholesterol esterase cholesterol ester ＋ H2O → cholesterol ＋ fatty acid • cholesterol oxidase • cholesterol ＋ O2 → 4-cholesten-3-one ＋ H2O2 • H2O2＋ phenol + 4-amino-antipyrine • peroxidase • → red quinone ＋ 4 H2O • red quinone可於500nm下測其生產量 步驟： （1） Blank Calibrator Sample Working reagent 1 mL 1 mL 1 mL • 高密度脂蛋白（HDL）與低密度脂蛋白（LDL） • 正常血中總膽固醇含量應小於200mg/dL • 每日攝取膽固醇含量不應超過300mg • 高血脂症 • 膽固醇的益處 Calibrator 0 10μL 0 Sample 0 0 10μL （2）分別於37℃反應5分鐘 （3）以分光光度計測A500nm之吸光值 （4）計算Sample中膽固醇含量 食二B B92320150 杜 宜 結果： • Concsample ＝（ODsample÷ODcalibrator）× Conccalibrator • （Conccalibrator ＝ 200mg / dL，已知） • ∴ Concsample ＝391mg / dL • 使用之sample為十倍稀釋液 • → 391mg/dL × 10 = 3910mg/dL • 假設一個蛋的蛋黃為20mL， • ∴其中所含之膽固醇為3910mg / dL÷5＝782mg

2. Lysozyme-substrate option 食二B B92320112 蕭巧馨 Glycol chitosan 經酵素水解後會產生還原糖。 將3,5-dintrosalicylic acid(yellow)->3-amino-5-nitrosalicylic acid(orange red) • 0.5ml glycol chitosan 與0.5ml(0.20.40.unknown ug/ml)的lysozyme混合->在40度恆溫15min->加1mlDNS至沸水中5min->稀釋後用分光光度計測吸光值(A540nm)求unknown Unknown=0.171nm,31.387(ug/ml) 討論：1.利用標準曲線可 以求出未知物濃度。 2.DNS作為呈色劑 3.不同濃度吸光值 不同，濃度越高， 吸光值越高。

3. 結果: 1. 2. 設蛋黃20ml，求一顆蛋的膽固醇含量 材料之膽固醇定量 原理: 利用酵素法使材料中的Cholesterol ester經Cholesterol esterase及Cholesterol oxidase 反應後變成4-Cholestern-3-one及H2O2,而所生成之H2O2會與4-amino-antipyrine的作用生成red quinone,可於500nm下測其生成量。 步驟: 討論: 1. 因為1dL=100mL，所以計算後的結果要再除以100做為單位換算。 2. 根據多項報導中顯示，總膽固醇的正常值為130~200mg/dl，平均約190mg/dl。但上列結果2中所列出之蛋黃中的膽固醇含量，比起正常值超過許多，故人體攝取過多蛋黃時，較容易引起膽固醇過高的狀況，進而造成許多心血管疾病的發生。 1.依組別添加上列試劑 2.分別於37C反應5分鐘 3.以分光光度計測500nm之吸光

4. 原理： SDS-PAGE為變性的蛋白質電泳，可依分子量分離出不同大小的蛋白質成分，其後以CBR染色或銀染判讀結果。而SDS是界面活性劑，讓四級捲曲的蛋白質分子整個展開變性，且使周圍佈滿負電荷，以移除此會影響跑膠的因子。又因其孔徑的產生，可利用分子大小的不同以達到分離的效果 步驟： 下層製膠(Running Gel) ↓ 上層製膠(Stacking Gel) ↓ 樣品前處理 ↓ 電泳操作 ↓ 膠片暫存 討論： 1.成膠成分： a. 單体分子(monomer) b. 架橋分子(bridge) ◆a：b=37.5：1 c. 自由基(free radical)產生者 d. 催化劑 2.集膠作用 3.成膠時注意事項 實驗三 食二b b92320149 林嘉慶蛋白質SDS-PAGE膠電泳分子量分析