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RECUENTOS CELULARES

LAB HEMATOLOGÍA 2011. RECUENTOS CELULARES. Pueden ser: Manuales o automatizados . Materiales: Cámara de Neubauer Pipetas de Thoma Tips Pipeta automática Diluyente Microscopio Aspirador o pipetor . CÁMARA DE NEUBAUER. Esta hecha de vidrio óptico. Especial de precisión.

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RECUENTOS CELULARES

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  1. LAB HEMATOLOGÍA 2011 RECUENTOS CELULARES

  2. Pueden ser: Manualeso automatizados. • Materiales: • Cámara de Neubauer • Pipetas de Thoma • Tips • Pipeta automática • Diluyente • Microscopio • Aspiradoro pipetor.

  3. CÁMARA DE NEUBAUER • Esta hecha de vidrio óptico. Especial de precisión. • Base rectangular y gruesa. • En el tercio medio se hallan cuatro ranuras longitudinales. • La superficie del puente central es más profunda que los dos puentes exteriores. • En el puente central (fondo de la cámara) están grabadas las redes de conteo.

  4. Cuando se coloca la cubrecámara:

  5. PIPETAS THOMA • Pipetas de leucocitos  perla blanca • Pipetas de rojos  perla roja 11 0.5 0.5 101

  6. DILUCIONES • Blancos: 1:20 (0.5 + 9.5 ) • 10 uL+190 uL/10 uL= 20 • 20 uL+380 uL/20 uL= 20 • Rojos: 1: 200 (0.5 + 99.5) • 5uL+ 995 uL/10 uL = 200 • Cantidades exactas • Evitar burbujas • Mezclar gentilmente y descartar 3 gotas Soluto + solvente soluto

  7. Colocar la punta de la pipeta de Thoma en el borde • Empezar a llenar la cámara y por capilaridad se llena la hendidura. • Evitar el rebalse de la muestra. • Sedimentar 2-3 min. • Contar

  8. RECUENTO CELULAR

  9. ACEPTABLE: diferencia 10%

  10. LECTURA DE LA CÁMARA • Para recuento celular de góbulos blancos enfocar cámara en 10X. • Para recuento celular de glóbulos rojos enfocar cámara en 40X en el cuadrante de en medio.

  11. CÁLCULO • RG/mm3 = # células * FD * inverso de volumen # cuadrantes contados • 20*10/4 = 50 (FACTOR BLANCOS) • 200*250/5 = 10,000 (FACTOR ROJOS)

  12. EJEMPLOS • Leucocitos1. Células contadas: 161 leucocitos 2. Superficie recontada: 4 cuadrados 3. Volumen del cuadro: (1mm x 1 mm x 0.1 mm) 0.1 mm34. Dilución 1 : 20 • Eritrocitos1. Células contadas: 507 eritrocitos 2. Superficie recontada: 5 cuadrados 3. Volumen del cuadro: (0.2 mm x 0.2 mm x 0.1 mm) 0.004 mm34. Dilución 1 : 200 R/ 8,050 GB/mm3 R/ 5.07*106 GR/mm3

  13. LIMPIEZA DE LA CÁMARA • Limpiar con agua o con una solución limpiadora suave. • Secar con un paño blando y acetona. • Las pipetas de Thoma se limpian con agua y se secan con acetona.

  14. OBSERVACIONES • Diafragma del condensador cerrado en su mayoría • Diferencia < 10 células entre cuadrantes • Realizar dobles determinaciones • Tener en cuenta que la cámara no esté reseca • Cámara limpia • Cubrecámaracolocada correctamente • No tener burbujas de aire en el relleno de la cámara/pipeta • Cámara sobrellenada • Tiempo de sedimentación corto

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