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Identificación y medición de la respuesta inmune

Identificación y medición de la respuesta inmune. PRUEBAS SECUNDARIAS. La prueba a realizar depende de las características del Ag. SOLUBLE PARTICULADO SUPERFICIE + COMPLEMENTO. PRECIPITACIÓN. AGLUTINACIÓN. FIJACIÓN DE COMPLEMENTO. Y. Y. Y. Y. Y. Y. Y.

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Presentation Transcript

  1. Identificación y medición de la respuesta inmune PRUEBAS SECUNDARIAS

  2. La prueba a realizar depende de las características del Ag • SOLUBLE • PARTICULADO • SUPERFICIE + COMPLEMENTO PRECIPITACIÓN AGLUTINACIÓN FIJACIÓN DE COMPLEMENTO

  3. Y Y Y Y Y Y Y Comparación precipitación - aglutinación Antígeno SOLUBLE Antígeno PARTICULADO Anticuerpo Y Formación de “retículo” “Amontonamiento” Y Y AGLUTINACIÓN PRECIPITACIÓN

  4. PRECIPITACIÓN Fundamento: un antígeno soluble, al ser puesto en contacto con su anticuerpo específico, forma complejos inmunes que al encontrarse en proporciones óptimas se insolubilizan dando una reacción de precipitación

  5. Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Precipitación Exceso de Ag Exceso de AC Proporciones óptimas MEDIO PROPORCIÓN AC ESPECÍFICO Ag SOLUBLE Ag/mg RETÍCULO SOLUBLE

  6. LÍQUIDO SÓLIDO MEDIO Test de Ascoli - Valente CARBUNCLO • DIFUSIÓN DOBLE • INMUNOELECTROFORESIS (IEF) • INMUNODIFUSIÓN RADIAL (IDR) • CONTRAINMUNOELECTROFORESIS (CIEF)

  7. DIFUSIÓN DOBLE Inmunodifusión en Gel de Agar Fundamento: empleando el medio adecuado (agar gel), es posible hacer migrar por difusión tanto Ag como Ac (difusión “doble”), de modo que al encontrarse en proporciones óptimas, interaccionen, produciendo una banda de precipitado visible Ejemplo: test de Coggins para diagnóstico de AIE

  8. 7 2 4 6 5. Antígeno específico (reactivo) 4. Suero testigo (+) (reactivo) 1 2 2 2 6 6 6 7 7 7 3 5 4 4 4 Test de Coggins para AIE Placa de Petri 1 3 5 3. Suero problema 1. Agar gel 1 6 2 7 5 3 4 2.Sacabocados

  9. G A D H B E F I C 2 6 7 4 6.Cámara húmeda 48 hs 7. LECTURA (fondo oscuro) e INTERPRETACIÓN D. NEGATIVO E. Fuertemente POSITIVO F. POSITIVO A. NEGATIVO B. POSITIVO C. Débilmente POSITIVO G. POSITIVO H. Banda INESPECÍFICA I. Banda INESPECÍFICA

  10. APLICACIONES EN VETERINARIA • ANEMIA INFECCIOSA EQUINA • PIROPLASMOSIS EQUINA • LEUCOSIS BOVINA • BRUCELOSIS OVINA • BRUCELOSIS CANINA

  11. AGLUTINACIÓN Fundamento: un antígeno particulado (ejemplo: bacterias, eritrocitos), al ser puesto en contacto con su anticuerpo específico en proporciones óptimas, se une por medio de enlaces cruzados. Este complejo de unión agruma, produciendo una reacción de aglutinación.

  12. FENÓMENO DE ZONA O PROZONA Se produce cuando existe un marcado exceso de Ac con respecto a los determinantes antigénicos de la partícula, de tal manera que es poco probable que los dos sitios de unión de la Ig puedan unirse a dos determinantes antigénicos de dos partículas distintas, inhibiéndose de este modo la aglutinación. Generalmente ocurre en las diluciones bajas de sueros muy positivos.

  13. AGLUT I NAC I ÓN AGLUTINACIÓN AGLUTINACIÓN PASIVA COAGLUTINACIÓN HEMOAGLUTINACIÓN / INHIBICIÓN H. A.

  14. Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Proporción + Antígeno particulado (reactivo) AGLUTINACIÓN Suero problema Medio

  15. En PLACA En TUBO AGLUTINACIÓN Salmonella Brucella Micoplasma Brucella BPA SAT+2-ME PAL

  16. Aglutinoscopio + placa de vidrio Aglutinación en placa: BPA Prueba del Antígeno Brucélico Acidificado 1. Suero problema 2. Antígeno específico (reactivo)

  17. 8 MINUTOS LECTURA E INTERPRETACIÓN 3. Mezclar Con GRUMOS Sin GRUMOS AGLUTINACIÓN POSITIVA Negativa

  18. Aglutinación en tubo: SAT + 2-ME SAT (Seroaglutinación en Tubo) + Se realizan en simultáneo Ig M Ig G 2- ME (2- Mercaptoetanol)

  19. 1/50 1/25 1/100 1/200 En TUBO: SAT + 2- ME 2. Solución fisiológica fenicada (SFF) 1. Suero problema 3. Antígeno 60 MINUTOS SUERO BPA (+) SAT 37ºC-48 hs Título 2-ME 2. Solución 2-ME

  20. LECTURA e INTERPRETACIÓN 37ºC-48 hs INCOMPLETA NEGATIVA POSITIVA

  21. Aglutinación en tubo: PAL PRUEBA DEL ANILLO EN LECHE Fundamento: si en una muestra de leche se encuentraun anticuerpo específico, y se le agrega un antígeno particulado coloreado, ambos se unirán, formando un complejo Ag-Ac que se adhiere a los glóbulos de grasa y asciende con la nata

  22. PAL 2. Antígeno (reactivo) 1. Leche problema LECTURA e INTERPRETACIÓN 37ºC-1 hora + ++++ ++ +++

  23. APLICACIONES EN R. A. BRUCELOSIS BOVINA

  24. PRUEBAS TERCIARIAS • IN VITRO NEUTRALIZACIÓN PROTECCIÓN • IN VIVO

  25. NEUTRALIZACIÓN Fundamento: estimación de la capacidad de una anticuerpo de neutralizar la actividad biológica de un antígeno cuando se mezcla con él in vitro

  26. PROTECCIÓN Fundamento: forma de análisis de neutralización que se realiza totalmente in vivo para determinar la capacidad protectora de un anticuerpo específico frente a su antígeno

  27. RESPUESTA INMUNE CELULAR • PURIFICACIÓN DE LINFOCITOS • IDENTIFICACIÓN LINFOCITOS T • IDENTIFICACIÓN LINFOCITOS B • PRUEBA DE FUNCIÓN DE LINFOCITOS

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