260 likes | 367 Views
Stanovení počtu vybraných indikátorových mikroorganismů v potravinách pomocí automatizované metody TEMPO ®. Mikrobiologie potravin, IV. ročník Ústav hygieny a technologie mléka, FVHE, VFU Brno Listopad 2011. TEMPO. Automatizovaná metoda stanovení počtu MO
E N D
Stanovení počtu vybraných indikátorových mikroorganismů v potravinách pomocí automatizované metody TEMPO® Mikrobiologie potravin, IV. ročník Ústav hygieny a technologie mléka, FVHE, VFU Brno Listopad 2011
TEMPO • Automatizovaná metoda stanovení počtu MO • Založena na principu MPN (miniaturizace metody)
1 ml 1 ml 1 ml 10-2 10-4 10-3 3 + 2 + 2 + 3/2/2 Součet pozitivních zkumavek MPN - Sériovéředění & inkubace Inkubace
Stanovení počtu 3/2/2 = Most probable Number MPN statistická tabulka x.10y cfu/g
Patentovaná karta pro stanovení počtu (miniaturizace metody) 2.25 µl 22.5 µl 225 µl TEMPO 3 řady zkumavek – 16 zkumavek v jedné řadě
TEMPO TC: acidifikace • Total Coliforms (TC) – Stanovení celkového počtu koliformních MO • fluorescenční pH indikátor :4-Methylumbeliferon (4MU) Acidifikace media způsobená rozkladem cukrů 4MU bez fluorescence pH £ 6 4MU fluorescence pH ³ 7 Pozitivní : není fluorescence Negativní : fluorescence
Stanovení počtu E. coli TEMPO EC specifický enzymatický substrát pro detekciE.coli : 4-methylumbeliferyl-D-glukuronid (MUG) + b-D glukuronidáza (E. coli) Glukuronát 4-methylumbeliferon MUG Pozitivní: fluorescence
Detekce - - - + + - - - - - + - + - - - - + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + ++ + + + + + + +
MPN kombinace - - - + + - - - - - + - + - - - - + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + ++ + + + + + + + MPN tabulka + ředění cfu/g 16 / 15 / 4
TEMPO System Příprava vzorku Filler - Inokulace Reader – čtečka (interpretace výsledků) Inkubace
Plnící stanice Preparation station Tempo kit PC Filler Čtečka čárových kódů Dispenzory Stojánky Vortex
TEMPO KIT - karta • Čárový kód • Barevné rozlišení Transfer tube Citlivá oblast, riziko kontaminace
Dehydratované médium Čárový kód Barevné rozlišení TEMPO KIT -Vialky s médiem + Vzorek potraviny + PPV (10-1)
Sekundární: Destilovanávoda STERILNÍ Ředící roztok Re-hydratace mediave vialce
ŘEDĚNÍ Ředící roztok (sekundární) Vzorek (1/10) Celkový objem Finalníředění 3 ml + 1 ml = 4 ml 1/40 3,9 ml + 0,1 ml = 4 ml 1/400
Ředění 1/40: 10 to 49 000 cfu/g Ředění 1/400: 100 to 490 000 cfu/g Ředění 1/4000: 1 000 to 4 900 000 cfu/g Stanovení počtu - rozpětí
Příprava -Filler Čtečka čárových kódů Filler Připravené vzorky do filleru Inkubace
Meat 12354-55 Označení vzorku
Po naskenování karty Nastavení ředění
TEMPO - čtečka 5.3 E4 CFU/g