Monoklonális ellenanyagok

1. Monoklonális ellenanyagok

2. Antitestek Az ellenanyag molekulák nagy része az úgynevezett immun-globulin (IgG) fehérjecsalád tagja Feladatuk, hogy specifikusan az adott antigénhez kapcsolódva, olyan folyamatokat indítsanak el ami az antigén hatástalanításá-hoz vezet Az antigén felületén a kapcsoló-dási rész: epitóp A szervezet 107-109 nagyság-rendű különböző antitest előál-lítására képes

3. Poliklonális antitestek (Polyclonal antiserum) immunizing Monoklonális antitestek

4. Monoklonális ellenanyagok - egyetlen B-limfocita klón termékei - homogének (antigénspecifitás, affinitás, izotípus) - kiszámítható hatás, kevés mellékhatás - előnye a poliklonális ellenanyaggal szemben, hogy a meghatározott specificitású és izotípusú ellenanyagok nagy mennyiségben és azonos minőségben („pharmacology-grade”) állíthatók elő - jelentős a szerepük biokémia, a molekuláris genetika, és a gyógyászat területein

5. Miért hibridóma? • Az antitesteket termelő plazmasejtek nem képesek osztód-ni, nem lehet sejttenyészetben szaporítani és termeltetni. • Csak a tumorsejtek képesek korlátlanul osztódni (immortal-ity). • E két tulajdonság egyesítésével kaphatunk olyan sejtvonalat, amely: • monoklonális antitestet termel • korlátlanul szaporítható

6. Monoklonális ellenanyag előállítás menete • egér/patkány beoltása antigénnel (több lépcsőben) • - lép vagy nyirokcsomó eltávolítása, homogenizálása • lépből származó plazmasejtek + egér tumorsejtek (plazmacitóma/mielóma sejtek) fúziója • Az ellenanyag termelő klónok azonosítása, izolálása • A termelő hibridómák folyamatosan szaporodnak és ellenanyagot termelnek, ami a tápoldatban feldúsul

8. Hibridóma szelekció, a “HAT Trick” A fúzió után többféle sejt van jelen: • fuzionálatlan plazmasejtek • fuzionálatlan tumorsejtek • hibridómák ezek közül kell izolálni a hibridómákat. A szelekció azon alapul, hogy a tumorsejtekbe még a fú-zió előtt két anyagcsere markert építenek be (két enzim hiánya) → HAT médiumon (hipoxantin, aminopterin, timidin) csak a fúzionált sejtek képesek szaporodni. →

9. Hibridóma szelekció, a “HAT Trick”

10. A monoklonális antitestek felhasználása • Az antitestek több célra is felhasználhatók: • Nem terápiás antitestek: • Biokémiai kutatások • Immun-analitikai eljárások • Feldolgozási műveletekben (pl. affin-kromatográfia) • Humán felhasználású antitestek: • Diagnosztikában (pl. Prostascint) • Terápiában (elsősorban tumorok ellen)

11. (Humán) terápiás antitestek Az emberi antigénekkel immunizált egérben termelt an-titestek az egérre jellemző aminosav-szekvenciákat, gli-koproteineket tartalmaznak, tehát emberbe adva fajide-gen fehérjeként immunválaszt indukálnak → allergia Hogyan kerülhető meg a probléma? → aterápiás antitestek humanizálása

12. Kiméra Egér Humanizált Humán A monoklonális antitestek fejlődése

13. Murine típusú antitestek • A kezdeti terápiás antitestek murine (= rágcsáló) analógok voltak (kudarc) • Kudarc okai: rövid felezési idő (in vivo), limitált bejutás a tu-morba, elégtelen funkció = kicsi volt a citotoxikusstimuláló hatás. • Anyaga az ismételt bedás után gyakran erős allergiás roha-mot, rosszabb esetben anafilaxiás sokkot okozott. • Ezért modern rekombináns DNS manipulációs technikákkal tovább fejlesztették. • HIBRIDÓMA → E. coli → SEJTTENYÉSZET

14. Kiméra és humanizált monoklonális antitestek • A kiméra antitestek: murine antitest variábilis régióját egyesítették a humán konstans régióval. Az eredmény 65% humán antitest (kappa könnyűlánc,nehézlánc) • Humanizált antitesthez akkor jutunk a murine antitestből ”átvisszük” a hipervariábilis domént a humán antitestbe. 95%-a humán eredetű, de valamiért a kötődés az antigén-nel gyengébb, valamint az affinitása is kisebb, mint a kiindulási murine antitestnek

15. Monoklonális ellenanyagok a tumor-terápiában

16. Monoklonális antitestek nevezéktana

17. Monoklonális antitestek nevezéktana • Az előtag nem hordoz semmiféle imformációt, csak egyedi-nek kell lennie, általaban utalás a gyógyszernevére • A második tag utalás a gyógyszer célpontjára (pl -ci(r)- ke-ringési rendszerre ható) • A következő tag a forrásról, illetve az antitest típusáról nyújt információt • Végül pedig a -mab utótag következi, amiről tudjuk, hogy monoklonális antitestről van szó.( monoclonal antibody) • Melyik gyógyszer lehet szó, és mit lehet tudni róla? • tras- + -tu(m)- + -zu- + -mab.???