7 . szeminárium

1. 7. szeminárium VAKCINÁCIÓ, POLIKLONÁLIS ÉS MONOKLONÁLIS ELLENANYAGOK

2. AZ ELSŐ VÉDŐOLTÁS Edward Jenner - 1796 Bebizonyította, hogy egy másik egyedből izolált gyenge patogénnel történő vakcináció védettséget adhat egy hasonló, azonban veszélyesebb kórokozó ellen. A WHO oltási kampányának köszönhetően 1975-re az ellenőrzött országokban nullára csökkent a fertőzések száma, így 1979-ben kijelentették, hogy a feketehimlő vírusa kipusztult.

3. IMMUNIZÁLÁS ATTENUÁLT (LEGYENGÍTETT) KÓROKOZÓKKAL VESZETTSÉG ELLENLouis Pasteur- 1880 Nyulakban tenyésztett vírusokat, majd az érintett idegek szárításával legyengítette azokat, és belőlük készített oltóanyagot.

4. DIPHTERIA ÉS TETANUS TOXIN ELLENI ANTITESTEK (ANTITOXINOK)KochLaboratórium,Németország, 1890. Megfigyelések: Védő hatású anyagok (kórokozó-specifikus antitestek) a vérben • Néhány betegség csak egyszer fordul elő életünk során (a fertőzés későbbi védettséget vált ki) • Egyes betegségek oltással megelőzhetőek • A vér antibakteriális komponenseket tartalmaz, pl. antitoxinok szérum terápia= passzív immunizálás ShimbasaruKitasato Emil Behring

5. MI TÖRTÉNIK, AMIKOR MEGFERTŐZŐDÜNK EGY PATOGÉNNEL? EXTRACELLULÁRIS PATOGÉNEK (ec. baktériumok, többsejtű paraziták) INTRACELLULÁRIS PATOGÉNEK (vírusok, ic. baktériumok, egysejtű paraziták) Osztódás a sejten kívül Osztódás a sejten belül A veleszületett és szerzett immunitás legtöbb effektor sejtje közreműködik, de kitüntetett szerepet játszanak az antitestek. NK- és CD8+ T-sejtek, valamint Th1-makrofág válasz jellemző. A neutralizáló antitestek segítenek.

6. A VAKCINÁCIÓ ALAPELVEII. • Célok: fertőzések megelőzése, a betegség illetve a továbbterjedés megakadályozása • Specificitás: egy adott kórokozó elleni immunválasz kiváltása • Memória:A fertőzést követő folyamat amely lehetővé teszi az adott, vagy hasonló korokozó elleni azonnal védelmet

7. A HATÉKONYABB IMMUNVÁLASZ ALAPELVE Antigén felismerése első alkalommal (elsődleges immunválasz) Antigén felismerése második alkalommal (másodlagos immunválasz) effektorsejtek effektorsejtek Naív sejt memória sejtek memória sejtek

8. ELSŐDLEGES ÉS MÁSODLAGOS ADAPTÍV IMMUNVÁLASZ

9. A VAKCINÁCIÓ ALAPELVEIII. A védelem mechanizmusai: • antitestek: • neutralizáció – megtelepedés gátlása • precipitáció/agglutináció – terjedés gátlása • T-sejtes válasz: A segítő T-sejtek elősegítik az antitesttermelést, fokozzák a sejtes immunválaszt, valamint az immunológiai memória kialakulását

10. VAKCINÁK TÍPUSAI I.Élő, attenuált(legyengített) kórokozót tartalmazó vakcinák Élő, csökkentett fertőzőképességű mikróbák (ált. vírusok): MMR (Morbilli /kanyaró/ -Mumpsz -Rubeola /rózsahímlő/), OPV (orális polio vakcina = Sabin-csepp),BCG (tuberkulózis), Rotavírus, Influenza,Sárgaláz • Hátrányuk: • Legyengült immunrendszer esetében fertőzést válthat ki • Előnyeik: • Utánozzák a természetes kórokozót • Beindítja a természetes immunválaszt is (PAMP-PRR) • CD4 és CD8 T-sejt válasz • Hatékonyabb CTL válasz A sejtek belsejében szintetizálódó vírusfehérjéket a sejt hatékonyan prezentálja az MHC I molekulákon keresztül. (A többi vakcina típusra nem igaz.)

11. VAKCINÁK TÍPUSAI II.Elölt (inaktivált) kórokozót tartalmazó vakcinák Vegyi anyagokkal, hővel, vagy radioaktivitással elölt patogének Influenza, Pertussis(szamárköhögés), HepatitisA, IPV (Inaktiváltpolio vakcina = Salk) • Előnyeik: • Tartalmazza a mikrobiálismintázatot (PAMP), melyet a természetes immunitás felismer • Hátrányaik: • Nem serkenti a CD8+ T-sejtek működését • az inaktivációs eljárás következtében csökkenhet az immunogenitás

12. VAKCINÁK TÍPUSAI III.Alegység vakcinák Vegyi anyagokkal, hővel, vagy radioaktivitással elölt patogének Tetanuszésdiftériatoxoidok (DT), HepatitisB, Hib (HaemophilusinfluenzaeB típus), Meningococcus C antigen Toxoidok: inaktiváltexotoxinok Hib: kapszulárispoliszacharidottartalmaz HepB: sejtfelszíni antigén, amelyet élesztő sejtekben klónoznak MenC: poliszacharidantigén fehérje hordozóhoz kötve (komplex antigén) • Előnyeik: • Tisztított mikrobiális antigének • Egyszerűen előállíthatóak • Mellékhatások kockázata kissebb • Hátrányaik: • Nem serkenti a CD8+ T-sejtek működését • Adjuvánsokhozzáadása szükséges

13. NE FELEDD! • A biztonsági szabványok sokkal szigorúbbak a preventív kezelések esetében a terápiás kezelésekhez képest • Az élő-attenuált vakcinák hatékonyabbak lehetnek, mint a nem-replikálódó vakcinák, ám használatuk kockázatosabb Hatékonyság Biztonság • Az indukált immunválasznak elég erősnek kell lennie ahhoz, hogy klinikailag releváns legyen • Egyéni és társadalmi szintű kockázatok és haszon (relatív, és idővel változik) • Etikai kérdések

14. NÉHÁNY ELLENJAVALLAT A VAKCINÁCIÓVAL SZEMBEN • Ne adjunk oltást aktuálisan beteg személynek! • Ne oltsunk élő vakcinával immunszupprimáltbetegeket! • Ne adjunk élő vakcinát terhes nőknek! • Minden típusú oltást kerüljünk a terhesség első trimeszterében! • HIV fertőzött egyén (immunszuppresszált állapot!) oltható MMR-el de BCG-velnem.

15. MONOKLONÁLIS ELLENANYAGOK monoklonális ellenanyagok egy B-limfocita klónjai kötődés egy fajta epitóphoz POLIKLONÁLIS ELLENANYAGOK poliklonális ellenanyagok több B-limfocita klónjai kötődés több fajta epitóphoz

16. Ag Ag Ag POLIKLONÁLIS ELLENYANYGOK Poliklonális antitest Immunszérum • Több B-limfocita klón termékei • Különböző antigén-specificitás, affinitás és izotípus B-sejt készlet Aktivált B-sejtek Ellenanyag termelő plazmasejtek Antigén specifikus antitestek

17. MONOKLONÁLIS ELLENANYAGOK (MAb) • egyetlenB-limfocita klón termékei • azonos antigén-specificitás, affinitás és izotípus • jelenléte emberekben patológiás állapotot jelez (plazmasejt tumor = myeloma multiplex)

18. MONOKLONÁLIS ANTITESTEK ELŐÁLLÍTÁSA (1) Egér immunizálása (antigénnel) (2) B-sejtek izolálása a lépből(3) Myeloma sejtek tenyésztése(4) Myeloma sejtek és B-sejtek fúziója(5) A sejtvonalak elkülönítése(6) A megfelelő sejtvonalak kiválasztása (7) In vitro (a) vagyin vivo (b) felsokszorozás(8) Összegyűjtés (az előállításról bővebben a függelékben)

19. POLIKLONÁLIS ÉS MONOKLONÁLIS ANTITESTEK TULAJDONSÁGAI

20. humanizált monoklonális ellenanyag Humán immunglobulint termelő transzgénikus egér VESZÉLYEZTETETT EGYÉN (immundeficiens - hypogammaglobulinaemia) PASSZÍV IMMUNIZÁLÁS immunizálás egér monoklonális ellenanyagok immunizálás VÉDETT EGYÉN szérum ellenanyag humán monoklonális ellenanyagok • A recipiens immunrendszere nem aktiválódik • Azonnali, de ideiglenes védelem/hatás  Immunglobulin lebomlás: 3-6 hónap

21. Humán Egér Humanizált TERÁPIÁBAN HASZNÁLT ANTITESTEK KÜLÖNBÖZŐ TÍPUSAI Kiméra *A humanizált ellenanyagok nem humán fajokból származnak, amelyek fehérjeszekvenciáit megváltoztatták, annak érdekében, hogy fokozzák hasonlóságukat az emberekben termelődő antitest variánsokhoz (kivéveCDR hurkok)!

22. PASSZÍV IMMUNIZÁLÁS Ezek mesterségesen szerzett immunitást eredményeznek, míg az anyai IgGátjutását a magzatba rendszerint természetesen szerzettnek nevezzük.

23. A MONOKLONÁLIS ELLENANYAGOK DIAGNOSZTIKUS ALKALMAZÁSAI Sejt típusok azonosítása Immunhisztokémia Leukémiák/limfómák jellemzése sejtfelszíni (CD „clusterof differentiation”) markerekkel Sejtek izolálása CD34+ őssejtek izolálása autológ/allogén transzplantációhoz(perifériás vérből) Vércsoport meghatározás (anti-A, anti-B, és anti-Dmonoklonális ellenanyagokkal) Sejtfelszíni és intracelluláris antigének azonosítása Sejt aktivációs állapot

24. A MONOKLONÁLIS ELLENANYAGOK TERÁPIÁS ALKALMAZÁSAI • Anti-TNF-αterápiaA TNF-αtúltermelése jellemző több szisztémás autoimmun betegségre is. • Tumorellenes terápia / Célzott kemoterápiaKevés tumor-specifikus marker, ezért limitált a használhatósága, azonban a mellékhatások tekintetében sokkal jobbak, mint a többi szer. • Immunszuppresszió,transzplantációt követő kilökődés megelőzése Sejttípus specifikus • Gyógyszer semlegesítésPl. anti-digoxin antitestek digoxin túladagolás kezelésére

25. 1) ANTI-TNF-α TERÁPIA Infliximab(Remicade): 1998 óta, kiméra Adalimumab(Humira): 2002 óta, rekombináns humán Etanercept(Enbrel) – dimerfúziós fehérje (TNF-α receptor + IgFc-rész) Nem valódi monoklonális ellenanyag, nincs Fabvég,a specificitástaTNF-receptor adja! Az anti-TNF-α terápia alkalmazási területei: • Rheumatoidarthritis • Spondylitisankylopoetica(Behterew-kór) • Psoriasisvulgaris, arthritispsoriatica • Crohn-betegség, colitisulcerosa (rendszerint – még – nem a terápia első vonalaként)

26. 2) TUMOR ELLENES TERÁPIA Nem konjugált antitest (ábrán: NakedMAb) Anti-CD20 (rituximab – Mabthera/Rituxan, kiméria): B-sejtesNon-Hodgkinlymphoma Anti-CD52 (campath – Mabcampath, humanizált): krónikus lymphoidleukémia Anti-ErbB2 (trastuzumab – Herceptin, humanizált): mellrák Anti-VEGF (bevacizumab – Avastin, humanizált): colorectalistu. (+ Lucentis!) Anti-EGFR (cetuximab – Erbitux, kiméra): colorectalistu. (+ Vectibix, rekomb. humán!) A tumoros sejtek pusztítása opszonizáltfagocitózis, ADCC vagy komplement-mediáltlízis útján. Konjugált antitest (ábrán: Immunoconjugates) Anti-CD20 + ittrium-90 izotóp (ibritumomab - Zevalin) Anti-CD20 + jód-131 (tositumomab – Bexxar) A konjugátumatumorsejtek közvetlen közelében fejti ki hatását.

27. 3) IMMUNSZUPPRESSZIÓ Basiliximab Daclizumab IL-2Rantagonista antitestek – meggátolják a T-sejt aktivációt, és vele a transzplantátum kilökődését • Egyéb: • Omalizumab (Xolair) Anti-IgEközepes-súlyos allergiás asztmára • Efalizumab(Raptiva): anti-CD11a, humanizált – psoriasis (pikkelysömör)

28. CÉLZOTT MAb TERÁPIÁK

29. KIEGÉSZÍTŐ INFORMÁCIÓK

30. OLTÁSI NAPTÁR BCG: Bacillus Calmette-Guérin/tuberculosis elleni oltóanyag, TBC (gümőkór) ellen DTPa: diftéria-tetanusz-acellulárispertussis komponenseket tartalmazó oltóanyag. Diftéria: torokgyík, Tetanusz: merevgörcs, Pertussis: szamárköhögés IPV: Inaktiváltpoliovírus vakcina. Polio: gyermekbénulás Hib: Haemophilusinfluenzae b elleni oltóanyag B típusú Haemophilusinfluenzae [Hib]: bakteriális agyhártyagyulladás PCV 13: 13-valens konjugált pneumococcus vakcina A pneumococcus baktérium egyebek mellett tüdő-, középfül- és agyhártyagyulladást okozhat MMR = morbilli-mumpsz-rubeola elleni vakcina. Morbilli: kanyaró, Mumpsz: parotitisepidemica, Rubeola: rózsahímlődTap = diftéria-tetanusz-acellulárispertussis komponenseket tartalmazó oltóanyag újraoltás céljára HeptatitisB: Hepatitisz B elleni oltás, Hepatitis B: fertőző májgyulladás

31. A MONOKLONÁLIS ELLENANYAGOK NEVEZÉKTANA

33. Spleen Immunisation B cells, HGPRT+ Myeloma cell HGPRT- PEG fusion HAT selection Testing supernatantsforspecificantibodyproduction Selection of hybridomacells aminopterine * HAT= hypoxanthine, aminopterine, thymidine *Hypoxantine-guaninephosphoribosyltransferase

34. egészséges egyén plazmasejtjei Myelomamultiplexes beteg plazmasejtei Myeloma multiplex = plazmasejt tumor Klónok korlátlan szaporodása  monoklonális antitest termelés (azonos könnyű- és nehézlánc típus, azonos alosztály – ha van)