1 / 6

OLIGONUKLEOTYDY ANTYSENSOWNE (ASO)

OLIGONUKLEOTYDY ANTYSENSOWNE (ASO) Syntetyczne lub syntezowane in vivo oligonukleotydy (rybo- i deoksyrybonukleotydy) liczące około 20 nukleotydów, których sekwencja jest komplementarna do mRNA wyciszanego genu. NIĆ SENSOWNA. OLIGONUKLEOTYDY ANTYSENSOWNE działają na różnych poziomach.

sine
Download Presentation

OLIGONUKLEOTYDY ANTYSENSOWNE (ASO)

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. OLIGONUKLEOTYDY ANTYSENSOWNE (ASO) Syntetyczne lub syntezowane in vivo oligonukleotydy (rybo- i deoksyrybonukleotydy) liczące około 20 nukleotydów, których sekwencja jest komplementarna do mRNA wyciszanego genu NIĆ SENSOWNA

  2. OLIGONUKLEOTYDY ANTYSENSOWNE działają na różnych poziomach Uważa się, że stabilność kompleksów RNA:RNA jest większa niż dupleksów RNA:DNA lub DNA:DNA

  3. OLIGONUKLEOTYDY ANTYSENSOWNE hamują translację na 2 sposoby: • blokowanie działania rybosomów • inicjacja RNAzyH degradującej kompleksy DNA:RNA Działania niespecyficzne: • Degradacja RNA powoduje powstawanie dużych ilości dGMP i dAMP • ciąg 4 reszt guaninowych hamuje proliferację • hamowanie proliferacji przez szkielet polianionowy (wiązanie białek zasadowych na powierzchni komórek – hamowanie wiązania mitogenów) • inhibicja PKC – kinazy białkowej C

  4. OLIGONUKLEOTYDY ANTYSENSOWNE – kryteria strukturalne do projektowania: • długość: 12-25 nt • krótkie są mało specyficzne • długie – słabo rozpuszczalne, trudniej się wprowadza, mogą tworzyć struktury 2 i 3-rzędowe • skuteczność dla końca 5’ większa • fragmenty 3’ mRNA mogą tworzyć struktury 2 i 3-rzędowe • fragmenty 3’ mRNA są opłaszczone białkami • modyfikacje chemiczne które pozwalają zwiększyć stabilność oligonukleotydów w komórce oraz zwiększyć ich wchłanianie MODYFIKACJE: • rybozy (wodór w pozycji 2’ na gr. metylową lub tlen 3’ na gr. aminową) • zasada azotowa • wiązanie fosforowe

  5. WŁAŚCIWOŚCI MODYFIKACJI WIĄZANIA FOSFODIESTROWEGO:

  6. OLIGONUKLEOTYDY ANTYSENSOWNE – kryteria dla projektowania: 1. Kryteria strukturalne: • brak komplementarności z innymi sekwencjami mRNA niż badana • wiązanie do rejonu 5’ mRNA • unikanie motywów indukujących mechanizmy odpowiedzi immunologicznej w komórce (4-krotne powtórzenia GGGG, sekwencje palindromowe o długości > 6 nukleotydów, motywy CG). 2. Kryteria termodynamiczne (wartość ΔG (energia swobodna)): • tworzenie stabilnych hybryd ASO-mRNA (ΔG37 < -30 kcal/mol) • niski potencjał tworzenia połączeń (dimerów) między cząsteczkami ASO (ΔG37 > -8 kcal/mol) • unikanie możliwości tworzenia wewnętrznych struktur drugorzędowych w cząsteczkach ASO (ΔG37 > -1,1 kcal/mol)

More Related