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Cripto-1 和 p-STAT3 蛋白表达与胃癌发生和转移的关系及意义

Cripto-1 和 p-STAT3 蛋白表达与胃癌发生和转移的关系及意义. 张建国 赵晶 辛彦 中国医科大学附属第一医院 肿瘤研究所. Cripto-1(CR-1) 为表皮生长因子 -CFC(Epidermal Growth Factor-Cripto-1/FRL-1/Cryptic) 家族成员，具有调节细胞分化和早期胚胎发育的功能。 CR-1 也是一个重要的癌基因生长因子，与人类多种恶性肿瘤的发生和转移密切相关。 目前研究表明 CR-1 主要通过激活丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 与 PI3K/AKT 信号通路及阻遏活化素

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Cripto-1 和 p-STAT3 蛋白表达与胃癌发生和转移的关系及意义

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Presentation Transcript

  1. Cripto-1和p-STAT3蛋白表达与胃癌发生和转移的关系及意义Cripto-1和p-STAT3蛋白表达与胃癌发生和转移的关系及意义 张建国 赵晶 辛彦 中国医科大学附属第一医院肿瘤研究所

  2. Cripto-1(CR-1) 为表皮生长因子-CFC(Epidermal Growth Factor-Cripto-1/FRL-1/Cryptic)家族成员，具有调节细胞分化和早期胚胎发育的功能。 • CR-1也是一个重要的癌基因生长因子，与人类多种恶性肿瘤的发生和转移密切相关。 • 目前研究表明CR-1主要通过激活丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 与 PI3K/AKT信号通路及阻遏活化素 （activin）、TGF-β信号的抑癌效应发挥其癌基因功能，如促进肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭及肿瘤血管形成等。

  3. STAT3是JAK-STAT信号途径中的一种关键性转录因子，该通路受细胞因子与生长因子的刺激而活化，并通过调控其下游靶基因来促进细胞异常增殖和恶性转化，进而参与肿瘤的发生发展。STAT3是JAK-STAT信号途径中的一种关键性转录因子，该通路受细胞因子与生长因子的刺激而活化，并通过调控其下游靶基因来促进细胞异常增殖和恶性转化，进而参与肿瘤的发生发展。 本研究通过免疫组化及Western blot方法检测CR-1与p-STAT3蛋白在正常胃黏膜、癌前病变及胃癌组织中的表达，分析并探讨二者在胃癌发生发展过程中的作用及意义。

  4. 材料与方法 • 1、标本收集 178 95 48 40 25 • 另取32例新鲜原发胃癌及其配对远癌正常胃黏膜组织标本，进行免疫蛋白印迹实验

  5. 178例胃癌临床病理资料： Borrmann分型 WHO组织学分型 12 4 22 6 2 65 19 3 74 140 男性121 例，女性57例

  6. 2、实验试剂 鼠抗人CR-1单克隆抗体（R&D公司） 1：80（免疫组化）,1：300（Western blot） 兔抗人p-STAT3单克隆抗体（SAB公司） 1：25（免疫组化）,1：300（Western blot） 鼠抗人β-Actin单克隆抗体（Santa Cruz） 1:1000 PV-9000 免疫组化检测试剂盒、DAB 显色试剂盒（北京中杉金桥公司） Wesetern blot二抗（Santa Cruz）

  7. 3、免疫组化及结果判定 • 采用PV-9000二步法进行免疫组化染色 • 结果判定：CR-1蛋白定位于细胞浆，p-STAT3定位于细胞浆和细胞核，二者均以出现清晰棕黄色颗粒为阳性细胞。

  8. 结果判定A×B ：0分为阴性(-)；1~4分为弱阳性 (+)；5~8分为中度阳性(++)；9~12分为强阳性(+++)

  9. 4、蛋白免疫印迹与结果判定 • 蛋白免疫印迹实验 • 结果判定：对成像结果进行扫描，并使用QUANTITY • ONE 4.6采集数据。用目的蛋白CR-1及p-STAT3分 • 别与β-actin的比值作为目的蛋白相对表达水平

  10. 5、统计学分析 • 结果采用SPSS13.0统计学软件分析 （蛋白表达阳性率的比较应用χ²检验；相关性分析应用Kendall’s tau-b等级相关；蛋白免疫印迹图像灰度值用独立样本t检验） • P<0.05视为差异有统计学意义

  11. 实验结果 • CR-1在正常胃黏膜、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化 生、异型增生及胃癌中的表达（表1，图1） • p-STAT3在正常胃黏膜、慢性萎缩性胃炎、肠上皮 化生、异型增生及胃癌中的表达（表2，图2） • 免疫蛋白印迹法检测CR-1与p-STAT3在胃癌及正常 胃黏膜中的表达(表3、图3） • 胃癌组织中CR-1与p-STAT3表达与胃癌临床病理特征的 关系（表4、5，图4） • 胃癌组织中CR-1与p-STAT3蛋白表达的相关性分析 (表6）

  12. 表1，CR-1在正常胃黏膜、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、异型增生及胃癌中的表达表1，CR-1在正常胃黏膜、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、异型增生及胃癌中的表达 注：a正常胃粘膜 vs 慢性萎缩性胃炎; b正常胃粘膜vs 肠上皮化生; c慢性萎缩性胃炎vs肠上皮化生; d慢性萎缩性胃炎vs异型增生; e肠上皮化生vs胃癌; f正常胃粘膜vs异型增生; g异型增生vs胃癌; h正常胃粘膜vs胃癌; i异型增生vs胃癌 83.3% 80.0% P〈0.05 71.3% 65.0% 43.2%

  13. A B C 肠上皮化生 胃癌 正常胃黏膜 图1，CR-1在正常胃黏膜、肠上皮化生和胃癌中表达情况（A,B,C X200,PV-9000二步法）

  14. 表2， p-STAT3在正常胃黏膜、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、异型增生及胃癌中的表达 注：*Fisher确切概率法 ; a正常胃粘膜 vs 慢性萎缩性胃炎; b正常胃粘膜vs 肠上皮化生; c慢性萎缩性胃炎vs肠上皮化生; d慢性萎缩性胃炎vs异型增生; e肠上皮化生vs胃癌; f正常胃粘膜vs异型增生; g异型增生vs胃癌; h正常胃粘膜vs胃癌; i异型增生vs胃癌 77.1% 68.0% P〈0.05 60.0% 60.1% 41.1%

  15. A B C 胃癌 正常胃黏膜 肠上皮化生 图2，p-STAT3在正常胃黏膜、肠上皮化生和胃癌中表达情况（A,B,C X400,PV-9000二步法）

  16. T N T N T N T N Cripto-1 p-STAT3 β-actin 表3，Western blot法检测CR-1与p-STAT3蛋白在胃癌及正常胃黏膜中的表达 图3，Cripto-1和p-STAT3蛋白在胃癌（T）与正常胃黏膜（N）中的表达

  17. 表4，CR-1蛋白在胃癌中的表达与胃癌临床病理因素的关系表4，CR-1蛋白在胃癌中的表达与胃癌临床病理因素的关系 注：a高-中分化胃癌vs低分化胃癌，b肠型胃癌vs弥漫型胃癌 CR-1蛋白在胃癌中的表达与胃癌患者的性别、年龄和胃癌的Borrmann分型未见相关(P>0.05)

  18. 表5，p-STAT3蛋白在胃癌中的表达与胃癌临床病理因素的关系表5，p-STAT3蛋白在胃癌中的表达与胃癌临床病理因素的关系 p-STAT3蛋白在胃癌中的表达与胃癌患者的性别、年龄和胃癌的Borrmann分型未见相关(P>0.05)

  19. A B C D THANK YOU 图4，CR-1与p-STAT3蛋白在无淋巴结转移胃癌(A, C)及伴淋巴结转移胃癌(B,D) 的表达（A,B,C,Dx400，PV-9000二步法）

  20. 表6，胃癌组织中CR-1与p-STAT3表达的关系 rk=0.189, P=0.002

  21. CR-1能通过与类肝素硫酸蛋白聚糖-1（Glypican-1）特异结合而活化酪氨酸激酶(c-Src)，进而激活下游信号转导通路，如MAPK与PI3K/AKT信号通路参与肿瘤发生发展。CR-1能通过与类肝素硫酸蛋白聚糖-1（Glypican-1）特异结合而活化酪氨酸激酶(c-Src)，进而激活下游信号转导通路，如MAPK与PI3K/AKT信号通路参与肿瘤发生发展。 CR-1也可通过间接结合表皮生长因子受体（EGFR）促进细胞增殖，而酪氨酸激酶和EGFR均能活化STAT3。 讨论

  22. Adamson E D, Minchiotti G, Salomon D, et al. Cripto：A tumor growth factor and more.Journal of Cellular physiology, 2002,190: 267-278.

  23. Adamson E D, Minchiotti G, Salomon D, et al. Cripto：A tumor growth factor and more.Journal of Cellular physiology, 2002,190: 267-278.

  24. 本研究发现在178例胃癌组织中CR-1与p-STAT3的表达呈正相关，进一步提示STAT3可能是CR-1的一个下游分子，异常高表达的CR-1蛋白可能通过活化STAT3而参与了胃癌的发生发展，但CR-1和STAT3信号通路的相关分子生物学机制尚需深入研究探索。本研究发现在178例胃癌组织中CR-1与p-STAT3的表达呈正相关，进一步提示STAT3可能是CR-1的一个下游分子，异常高表达的CR-1蛋白可能通过活化STAT3而参与了胃癌的发生发展，但CR-1和STAT3信号通路的相关分子生物学机制尚需深入研究探索。

  25. CR-1和p-STAT3蛋白的高表达可能是胃黏膜癌变过程中的早期事件，二者的异常表达与代表胃癌恶性生物学本质的淋巴结转移密切相关，提示CR-1和p-STAT3蛋白可以作为胃癌预后判断的分子标志物。CR-1和p-STAT3蛋白的高表达可能是胃黏膜癌变过程中的早期事件，二者的异常表达与代表胃癌恶性生物学本质的淋巴结转移密切相关，提示CR-1和p-STAT3蛋白可以作为胃癌预后判断的分子标志物。 CR-1与STAT3信号通路在胃癌的发生发展过程中起重要作用，对其进行深入研究有望为胃癌的诊断与治疗提供新的思路。

  26. 谢谢！

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