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Iván Palomo Facultad de Ciencias de la Salud Universidad de Talca

II Congreso Científico de Estudiantes de Tecnología Médica del Sur Universidad de la Frontera. PLAQUETAS Y ANTICUERPOS ANTIFOSFOLÍPIDOS. Iván Palomo Facultad de Ciencias de la Salud Universidad de Talca. Octubre, 2005.

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  1. II Congreso Científico de Estudiantes de Tecnología Médica del Sur Universidad de la Frontera PLAQUETAS Y ANTICUERPOS ANTIFOSFOLÍPIDOS Iván Palomo Facultad de Ciencias de la Salud Universidad de Talca Octubre, 2005 Figuras blanco-negro: libro Hematología: Fisiopatología y Diagnóstico, 2005

  2. Plaquetas

  3. Megacariopoyesis

  4. ? Médula ósea Trombopoyesis Megacariocitos Bazo, Hígado, MO Remoción Macrófagos Sangre Hemostasia (8-10 días) Remoción fisiológica de plaquetas desde la circulación Marcadores de envejecimiento: Serotonina Densidad

  5. 1200 1000 800 600 400 200 Moléculas IgG/ Plaqueta PBD PDI PAD (Jóvenes) (Envejecidas) PAIgG en plaquetas humanas separadas en gradiente de densidad(n:18) PBD vs PAD p<0.01

  6. Expresión de PS, GPIV y P-Selectina en plaquetas humanas de diferente densidad

  7. Recuento de plaquetas y exposición de PS Inyección de estradiol en perros (n:7) Exposición de PS* Recto Plaquetas *, citometría de flujo

  8. Recto Plaquetas ψm DIOC, MFI Recto plaquetas y potencial de mb mitocondrial Inyección de estradiol en perros (n:13)

  9. FcR IgG Macrófago FS Scavenger R Remoción fisiológica de plaquetasmecanismo inmune y no inmune

  10. Estructura plaquetaria ADP ATP Serotonina Calcio P selectina FvW, fibronectina Vitronectina Trombospondina FV, HMWK Fibrinógeno, FXI Proteína S, PAI-I PF4 PDGF, TGF 

  11. Función plaquetaria

  12. Ac Antifosfolípidos

  13. Ac Antifosfolípidos • Trombosis (venosa y arterial) • Abortos espontáneos a repetición • Trombocitopenia • Grupo heterogéneo de anticuerpos • IgG, IgM, IgA • ELISA de fase sólida (aCL) • Anticoagulante Lúpico (AL)

  14. CLASIFICACIÓN DEL SAF • Variantes del SAF • SAF catastrófico • Asociado a otros Sínd.microangiopáticos • Síndrome de hipoprotrombinemia • SAF seronegativo • Primario • Secundario • Enf.Auntoinmunes LES • Lupus probable • Otras mesenquimopatías • Neoplasias Tumores sólidos • Neoplasias hematológicas • Inducido por drogas • Asociado a infección

  15. Antígenos • Beta-2 Glicoproteína I (b2GPI) • Protrombina (PT) • Proteínas del Sistema Proteína C • PC, PS, Trombomodulina • Anexina-V • Kininógeno de alto peso molecular • Fosfolípidos aniónicos: FS, CL

  16. ≈60aa ≈60aa Patrón de PM b2GPI kDa ≈60aa 200 97 68 50 43 29 ≈60aa ≈80aa b2GPI Glicoproteína 5 dominios 12 Lis, 1 Arg, 1 His 326 aa

  17. Epítopos * * * * * Ac antiβ2GPI Ac antiβ2GPI -β2GPI: Baja afinidad en solución Ausencia de CI séricos en SAF β2GPI – Superficie FL: Baja afinidad Aumenta con Ac antiβ2GPI

  18. Dominios Gla Complejo Protrombinaa Protrombina • 72 kDa • 579 aa

  19. Epítopos A B Fragmento 1.2 s-s Complejo protrombinasa Ac anti-Protrombina (aPT) • Aumentan unión PT a superficie FL, sin interferir C. Protrombinasa. • Inhiben acción de Antitrombina. • Interferen acción de la Plasmina. Acción anticoagulante: Interfire acción C. Protrombinasa

  20. Ac anti-b2GPI (dominio I) b2GPI Ac anti-b2GPI (dominio II) Complejos Ac antiβ2GPI –β2GPI Reversible Irreversible Similar en Ac antiPT - PT

  21. 145(5): 336-340 Ac aFL en pacientes con LES

  22. Pacientes (n=226) Controles (n=95) n % n % OR** p* aCL 57 25.2 4 4.2 4.8 0.01 (1.4-16.1) aPT 31 13 .7 3 3.2 8.9 0.004 (2.1-38.5) anti-2GPI 14 6.2 2 2.1 3.2 0.2 (0.5-19.5) *, Trombosis Venosa o Arterial **, ajustado por edad y sexo Continua Ac aFL en pacientes con trombosis* y controles Palomo I, Pereira J, Alarcón M, Vasquez M, Pinochet C, Velez MT, Sandoval J, Icaza G, Pierangeli S. Prevalence and isotype distribution of antiphospholipid antibodies in unselected Chilean patients with venous and arterial thrombosis. Clin Rheumatol. 23(2):129-33, 2004.

  23. aCL anti-2GPI aPT n % n % n % Cualquier isotipo 57 25.2 14 6.2 31 13.7 IgG 23 10.2 5 2.2 12 5.3 IgM 27 11.9 4 1.8 19 8.4 IgA 22 9.7 7 3.1 3 1.3 *, Trombosis Venosa o Arterial Prevalencia y Distribución Isotípica de Anticuerpos aCL, anti-2GPI y aPT en Pacientes con Trombosis* (n=226) (cont.)

  24. Prevalence of Val/Leu247 and Trp/Ser316 polymorphisms of β2GPI among patients with thrombosis and controls. Palomo I, Pereira J, Alarcón A, Vásquez M, Pinochet C, Poblete F, Mendez E, Sandoval J, Vidal R, Pierangeli S. Val/Leu247 and Trp/Ser316 polymorphisms in β2 glycoprotein Ι and their association with thrombosis in unselected Chilean patients. (enviado)

  25. Mecanismos protrombogénicos de los Ac aFL Activación celular • Células endoteliales • Up regulation de Moléculas de Adhesión • Activación celular • Aumento expresión FT • Aumento unión de Protrombina • Monocitos • Aumento expresión de FT en monocitos circ. • Plaquetas Inhibición de anticoagulantes naturales Sistema PC, AT, IVE Anexina V Inhibición del Sistema Fibrinolítico

  26. CE TM EPCR PS APC T PC Plaqueta tPA PAI-1 Plaqueta PS PT Plasmina Plg Ac aFL β2GPI PT T Plaqueta Va Plaqueta Xa T AT Xa TFPI X Anexina A5 TF VIIa CE Mecanismos protrombóticos de los Ac aFL Bárbara Fuentes Forastiero R, Martinuzzo ME. Antigen Specificity and Clinical Relevance of Antiphospholipid Syndrome. Current Rheumatology Reviews, 2005, 1,

  27. Ac Antifosfolípidos y Plaquetas

  28. Unión de Ac aFL a plaquetas • Plaquetas con algún grado de activación o envejecidas • Células apoptóticas unen β2GPI. • Podrían generan epítopos que inducen respuesta del tipo autoinm. • Ac aFL se unen a plaquetas en reposo (separ. por filtración en gel) • Elución de Ac aFL desde plaquetas de pacientes con LES • En presencia de β2GPI y PT, Ac aFL se unen a plaquetas activadas. • Unión de Ac aFL IgG a plaquetas incub. con colágeno o cong-desc.

  29. Interacción de los Ac aFL a las plaquetas • Región Fab a β2GPI (dímero) unida a apo ER2. • Región Fab con antígenos específicos de plaquetas. • Región Fc (de C. inmunes Ag-aFL) a FcγRII.

  30. Efecto de los Ac aFL en las plaquetas • Aumento de la agregación plaquetaria • (con concentraciones subagregantes de ADP, trombina o colágeno). • Mayor expresión de CD63. • Mayor liberación de P-selectina (CD62P). • Aumento expr. GPIIb-IIIa c/ bajas dosis de TRAP y aFL. • Aumento de micropartículas plaquetarias. • Aumento de síntesis in vitro de TXA2

  31. Efecto de los Ac aFL en las plaquetas (cont) • F(ab’)2 de Ac aFL aumentan: • Fosforilación de la p38MAPK • Fosforilación de fosfolipasa A2 • TXB2

  32. Anti-β2GPI Dímero β2GPI ApoE2 ApoR2 P P CD63 I II III IV I II III IV MAPp38 Kinasa CD62P V V Activación ADP P2Y1 P2Y12 GPIIb-IIIa TXA2 TXA2R Ac aFL y Plaquetas

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