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AISLAMIENTO DE DNA GENÓMICO A PARTIR DEL EPITELIO BUCAL

AISLAMIENTO DE DNA GENÓMICO A PARTIR DEL EPITELIO BUCAL. 1. Obtener células epiteliales de la parte interna del carrillo raspando con palillo de punta plana. 2. Llevar el palillo al tubo con 200µl de tampón de lisis 1 , agitar para desprender las células y dejar el palillo

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AISLAMIENTO DE DNA GENÓMICO A PARTIR DEL EPITELIO BUCAL

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Presentation Transcript

  1. AISLAMIENTO DE DNA GENÓMICO A PARTIR DEL EPITELIO BUCAL 1. Obtener células epiteliales de la parte interna del carrillo raspando con palillo de punta plana. 2. Llevar el palillo al tubo con 200µl de tampón de lisis1, agitar para desprender las células y dejar el palillo dentro del tubo durante 5 minutos (agitando de vez en cuando). 3. Mantener a 55º C durante una hora. Vortex un minuto. 4. Precipitar con 200µl de isopropanol, 30 minutos a –20º C. 5. Centrifugar 10 minutos, 10.000 rpm, 4º C. 6. Eliminar sobrenadante con micropipeta. 7. Secar al vacío 15 minutos. 8. Resuspender en 20µl de tampón TE2 estéril 30 minutos a 37º C. 9. Correr 15µl en electroforesis durante toda la noche. 10. Ver el resultado al día siguiente. 1Tampón de lisis: Tris.HCl pH 8,5 100mM, EDTA 5mM, SDS 0,2%, NaCl 200mM, Proteinasa K 100mg/ml. 2Tampón TE: Tris.HCl pH 8,5 10mM, EDTA 1mM Usando como DNA molde 1µl de chDNA aislado procederíamos a realizar las PCR para determinar qué variante alélica poseemos de cada uno de los 13 loci principales del CODIS (Combined DNA Index System)

  2. http://www.youtube.com/watch?v=vpAyYYArB0Y&feature=related

  3. A continuación se presentan los resultados del análisis de los loci: D1S7, D2S44, D4S139 y D10S28 para una serie de individuos. 1. Los abuelos, ¿son maternos ó paternos? 2. ¿Cuáles y cuántos alelos comparten los hermanos? Razona las respuestas

  4. Para realizar las actividades que vienen a continuación debes consultar el árbol genealógico de la familia Blackett, que previamente has realizado

  5. Si no lo has hecho, deberás hacerlo ahora para continuar con la práctica

  6. Recogida de datos para los loci: D3S1358 vWA FGA

  7. Aplicación del análisis de polimorfismos a determinación de paternidad Rellena la tabla. A la vista de los resultados, ¿son Bob y Ana los padres de David y María? Razona la respuesta

  8. Aplicación del análisis de polimorfismos a personas desaparecidas Rellena la tabla. A la vista de los resultados, determina el perfil de DNA de Esteban. Razona la respuesta

  9. Aplicación del análisis de polimorfismos a personas desaparecidas A la vista de los resultados, ¿es consistente que Carlos, Jorge, Marina y Elena sean descendientes biológicos del mismo padre y la misma madre? Razona la respuesta

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