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实验四 孚尔根 （ Feulgen ） 反应

实验四 孚尔根 （ Feulgen ） 反应. 光镜标本制作. 切片法： 取材 固定 脱水 透明 包埋 切片 贴片 染色 封片 观察 非切片法： 涂片法 磨片法 分离法等. 一、实验目的. 了解 DNA 的显示原理并掌握其操作过程。. 二、实验用品. 器材：显微镜、盖玻片、染色缸、眼科剪、解剖刀、镊子、水浴锅 试剂： 95 ％乙醇（固定液）、 Schiff 氏试剂、 1N 盐酸、亚硫酸水、 1% 亮绿甲苯、酒精、中性树胶 材料：鸡血或鱼血涂片. 三、实验原理.

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Presentation Transcript

  1. 实验四 孚尔根（Feulgen）反应

  2. 光镜标本制作 • 切片法： 取材 固定 脱水 透明 包埋 切片 贴片 染色 封片 观察 • 非切片法： • 涂片法 • 磨片法 • 分离法等

  3. 一、实验目的 • 了解DNA的显示原理并掌握其操作过程。

  4. 二、实验用品 • 器材：显微镜、盖玻片、染色缸、眼科剪、解剖刀、镊子、水浴锅 • 试剂： 95％乙醇（固定液）、Schiff氏试剂、1N盐酸、亚硫酸水、1%亮绿甲苯、酒精、中性树胶 • 材料：鸡血或鱼血涂片

  5. 三、实验原理 • 细胞中DNA经1N60℃盐酸水解后，DNA双螺旋结构中的嘌呤与脱氧核糖之间的连接打开，并在脱氧核糖的一端形成潜在的醛基。这些醛基与Schiff氏试剂作用，形成紫红色的三苯甲烷衍生物。

  6. 四、实验方法 1．血涂片放入90％乙醇中固定1’30’’ 2．放入70%酒精1’, 放入蒸溜水1’ 3．稀酸水解：1N HCl (室温) 1’ 1N HCl 60℃水浴 8’ 1N HCl (室温) 1’ 蒸馏水 1’ 对照片以5%三氯醋酸90℃水浴l5’抽提核酸后，再经稀酸水解。 link link

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  8. 4．染色： Schiff氏试剂30’-40’ 5．分色 ：亚硫酸水I、Ⅱ、Ⅲ 各 2’ 流水洗 5’蒸馏水洗 1’ 6．复染 ：1% 亮绿 30～60”左右 蒸馏水洗 (两次) 2’ 7．脱水：以70%酒精，80％酒精，95%酒 精，l00%酒精各2’ 8．透明：1／2 100%酒精+1／2二甲苯，二甲苯Ⅰ、Ⅱ，各5’ 9．封片：中性树胶封片 10．贴标签，镜检

  9. 鱼血涂片 95％乙醇固定 Feulgen反应 日期 姓名 组织切片

  10. 五：实验结果 • 细胞核呈紫红色，细胞质呈浅绿色，对照片只呈浅绿色。

  11. 六、作业 • 简述Feulgen反应的原理及关键步骤。

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