1 / 13

A muraminsav meghatározása talajból

A muraminsav meghatározása talajból. Készítette: Bolla Zsuzsanna Környezetmérnök MSc. A muraminsav.

wyatt-leon
Download Presentation

A muraminsav meghatározása talajból

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. A muraminsav meghatározása talajból Készítette: Bolla Zsuzsanna Környezetmérnök MSc

  2. A muraminsav

  3. A muraminsav (2-amino-3-o-(1carboxyethyl)-2-deoxy-D-glucose) egy aminosav cukor részét képezi. A muraminsav kizárólag prokariótákban található meg, ezért használnak bakteriális és ciano-baktérium (cyanophyte) biomasszát. • A peptidoglikán alapvetően N-acetilglukózamin-ból (NAG) és az N-acetil-muraminsav-ból (NAM)tevődik össze. A NAG és a NAM ß (1→4) kötéssel kapcsolódnak, ahogy a diszacharid egységek is ß (1→4) glikozidos kötéssel poliszacharid láncot alkotnak.

  4. A peptidoglikán kialakulása: a muraminsavhoz kötődő tejsav szabad karboxilcsoportja rövid tetrapeptidet köt meg. A peptid oldalláncok aminosavai közül néhányan D konfigurációjúak, ami a prokarióták kizárólagos tulajdonsága. • A bakteriális sejtfal merevsége a sejt felszínén párhuzamosan futó poliszacharid láncok peptidkötések révén való összekapcsolódásából adódik. A peptid keresztkötések kialakulását a diaminosav szolgálja.

  5. A peptidoglikánban nem minden NAM rendelkezik pentapeptiddel és nem minden peptid vesz részt a keresztkötés kialakításában, viszont a terminális alaminok minden peptidrőllehidrolizálódnak, ezért minden peptidet tartalmazó NAM csak tetrapeptideket tartalmaz. • A Gram negatív és a ciano-baktériumokbanadiaminosav mindig mezo-diamino-pimlinsav, a Grampozítív baktériumok viszont nagy változatosságot mutatnak a diaminosavat illetően. A második nagy különbség, hogy a peptidglikán láncok nem közvetlenül vannak keresztkötve, hanem hidakkal kapcsolódnak össze, amik aminosavakból álló rövid peptidek.

  6. A módszer alapelve: A módszer alapja a muraminsav ecetes extrakciója a talajmintából, származékképzés o-ftálaldehiddel, elválasztás és mennyiségi meghatározás HPLC mérőműszerrel. • Eszközök és készülékek: HPLC készülék, precíziós szivattyú, oldószer szállító rendszer, befecskendező szelep, fluoreszcencia monitor 340nm gerjesztési és 445nm emissziós hullámhosszra állítva, C-18 oszlop, rotációs bepárló, reflux készülék, laboratóriumi centrifuga (30ml térfogatú), mikrocentrifuga csővel (2 ml-es), gömblombik (100ml), pipetta.

  7. Vegyszerek és oldatok: • mozgó fázis HPLC elválasztáshoz • borát puffer • o-ftálaldehid-2-merkaptoetanolt • muraminsav származékképző reagens • muraminsav referencia (standard) vegyület • sósav

  8. Eljárás: 100ml-es gömblombikba 1g száraztömegű nedves talajmintához 10ml sósavat adunk. A keveréket 3 órára és 100oC-ra állítva reflux készülékbe tesszük . A hűtés után a hidrolizátum tömegét lemérjük, majd az eredetire állítjuk vissza. Ezt centrifugáljuk 10 percig 3000 rpm-mel.A felülúszóból 300μl-t lombikba kiveszünk és 50 oC-on rotációs bepárlóban szárítjuk. Ezt a száraz hidrolizátumot 300-1000μl o-ftálaldehid reagensben visszaoldjuk. Az oldatot mikrocentrifugában 1 percig centrifugáljuk mielőtt a HPLC készülékbe injektálnánk.

  9. Kalibrációs görbe: 1, 10, 100, 1000 és 10000pg muraminsavat származtattunk és a relatív fluoreszcencia hozamnak egy lineáris függvényét kaptuk. (1.0-1000 relatív egység). • Számítása: A muraminsav mennyisége a kalibrációs görbe alapján határozható meg. A híg oldatokból, a talajmennyiségből, a felhasznált származékképző reagens mennyiségéből és a befecskendezett anyag térfogatából határozható meg a mennyiség.

  10. Megjegyzés: Annak érdekében, hogy elérjük a maximális kioldódást, az extrakciós paramétereket ( sósav koncentráció, a talajminta mennyisége és a sósav koncentráció közötti kapcsolat, és a hidrolízis ideje) minden egyes talajminta esetében meg kellett keresni.

  11. Felhasznált forrás: • Alef K. and Nannipieri P. (Editors): Methods in Applied Soil Microbiology and Biochemistry, Academic Press Limited, London, 1995 • http://www.cellcycle.bme.hu/oktatas/mikrofiz/szoveg/cellwall.PDF

More Related