310 likes | 675 Views
KLINIČKA VAŽNOST DNA FRAGMENTACIJE SPERMIJA - naša iskustva. Marijan Tandara Ana Bajić, Martina Šunj. KBC Split. Povijesni pregled analize sjemena. 1860 Prisutnost spermija/pokretni spermiji 1929 Prvi objavljeni rad o analizi sjemena u NEJM (Macomber)
E N D
KLINIČKAVAŽNOST DNA FRAGMENTACIJE SPERMIJA - naša iskustva • Marijan TandaraAna Bajić, Martina Šunj KBCSplit
Povijesni pregled analize sjemena 1860Prisutnost spermija/pokretni spermiji 1929Prvi objavljeni rad o analizi sjemena u NEJM (Macomber) 1940-tihSjemeni parametri (MacLead and Gold) 1944Sistematska analiza sjemena (Hotchkiss) 1980Morfologija spermija (Kruger and Menkveld) 1986Objektivni biokemijski markeri sazrijevanja spermija i potencijala plodnosti (Huszar Lab)
1992. Palermo UvođenjemICSI-aizazvao revoluciju u rješavanjumuškog faktoraneplodnosti !
Parametri reproduktivnog uspjeha Jajna stanica80% Uterus 10% Spermij 10% Modificirano - DannySakkas
50% 50%
2000.Integritet kromatinaspermija Ispitivanje DNA fragmentacije ?
Potencijalni uzroci DNA fragmentacije • Varikocela(Saleh, 2003; Fischer, 2003; Zini, 2000) • Kemoterapija i radioterapija(Chatterjee, 2000; Deane, 2004; Kobayashi, 2001) • Pušenje cigareta (Mak, 2000; Kunzle, 2003; Potts, 1999, Sun, 1993) • Leukocitospermija (de Laminrande, 1993; Zini, 1995, Twigg, 1998; Iwasaki, 1992; Zini, 1993) • Povećana tjelesna težina (Kort 2006) • Testikularnahipertermija(Sailer J 1997,BanksReproduction 2005)
Etiologija oštećenja DNA spermija Posttestikularno Intratestikularno
Intratestikularno • Nedostatak protamina • (nađen kod 5-15% neplodnih muškaraca) • De Yebra et al, J BiolChem 1993; Bianchi et al, BiolReprod 1993; Kramer et al, Genet Test 1997, • Cho, 2003 • Poremećaj topoizomeraze II i tranzicijskih proteina Balhorn, J Cell Biol 1982; Kierzenbaum, Mol Reprod Dev 2001;Bissoneault, FEBS Lett 2002 • Apoptoza • Sakkas et al, Exp Cell Res 1999, Sakkas et al. ReprodBiomedOnline 2003
Posttestikularno VARIKOKELA LIJEKOVI PUŠENJE ZAGAĐENJE INFEKCIJA • prostate • sjemenih vezikula • epididimisa KARCINOM NEZRELI/ABNORMALNI SPERMIJI Oksidativni Produženo zadržavanje spermija u epididimisu stres Apoptoza DNA oštećenje Lipidnaperoksidacija Oštećenjespermija • Aitken et al, Biol Reprod 1998; • Irvine et al, J Androl 2000 NEPLODNOST
Određivanje integriteta DNA spermija u ispitivanju muške neplodnosti DIREKTNI TUNEL(terminal deoxynucleotydil transferase-mediated deoxyuridin triphosphatenick-endlabelingassay ) ( sdSB ) ISNT( insitu-nicktranslation ) Comet Assay (neutral pH – sdSB) INDIREKTNI( zahtjeva denaturaciju DNA) SCSA (sperm chromatin structure assay) Comet Assay (acidic oder basischem pH) (sdSB) SCD (sperm chromatin dispersion test)
DFI% Tandara M. i sur. 2012
Korelacija između DNA fragmentacije i sjemenih parametara Tandara M. i sur.
Korelacija između DNA fragmentacije i sjemenih parametara A. Agarwal i sur; Human Reprod 2003
Deskriptivna statistika Tandara M. i sur.
? ? ? ? Granična vrijednost DNA fragmentacije ? ? ? ?
Uspješnost trudnoće s obzirom na % DNA fragmentacije M. Benchaib i sur. Human Reprod 2003
DNA fragmentacija • Da li visoka razina oštećenja DNA spermija pogađa • fertilizaciju i razvoj embrija?
Korelacija kvalitete zametaka s DNA fragmentacijom Tandara M i sur. 2012. *statistički značajno p< 0,05
Integritet DNA spermija postaje važan – ekspresija genoma embria blastocista 2 pronukleusa 2 st embrio 8 st embrio 4 st embrio
Analiza DNA fragmentacije…. • ….jepreporučljiva • Za pacijente sa više od 3 uzastopna IVF neuspjeha • U slučajevima kad je primijećen zastoj razvoja embrija • U slučaju ponavljanih pobačaja • U slučajevima neobjašnjene neplodnosti
IMSI PICSI