Agar citrato de simmons
AGAR CITRATO DE SIMMONS: FUNDAMENTO, PREPARACIu00d3N Y USO El agar Citrato de Simmons es un medio su00f3lido utilizado como prueba bioquu00edmica de identificaciu00f3n de microorganismos, especialmente de bacilos Gram negativos. El medio original fue creado por Koser en 1923. El medio Citrato de Koser consistu00eda en un caldo que contenu00eda fosfato de sodio, fosfato de amonio, fosfato monopotu00e1sico, sulfato de magnesio y citrato de sodio. A. Medio comercial de Agar Citrato de Simmons deshidratado B. Agar Citrato de Simmons preparado. Como puede verse, la u00fanica fuente de carbono del medio es el citrato, y de nitru00f3geno es el fosfato de amonio, omitiu00e9ndose las proteu00ednas y los carbohidratos como fuente de estos elementos, comu00fanmente estu00e1n presentes en otros medios. Por tanto, la bacteria inoculada en ese medio solo puede reproducirse si es capaz de tomar el carbono del citrato. La prueba era positiva si habu00eda turbidez en el medio, sin embargo tenu00eda el inconveniente de que podu00eda ocurrir turbidez no especu00edfica. Este problema fue resuelto por Simmons en 1926 agregu00e1ndole agar y azul de bromotimol a la fu00f3rmula original de Koser. Aunque el principio es el mismo, se interpreta de forma diferente. Aunque puede usarse en otros formatos (por ejemplo, placas de Petri), el agar citrato de Simmons se usa a menudo en tubos con el agar inclinado. Fundamento Algunas bacterias tienen la capacidad de sobrevivir en ausencia de fermentaciu00f3n o producciu00f3n de u00e1cido lu00e1ctico, necesitando conseguir energu00eda a travu00e9s de la utilizaciu00f3n de otros sustratos. En esta prueba la u00fanica fuente de carbono ofrecida es el citrato. Las bacterias que son capaces de sobrevivir bajo estas condiciones metabolizan el citrato de forma ru00e1pida por una vu00eda alterna a la tradicional, utilizando el ciclo del u00e1cido tricarboxu00edlico o el ciclo de fermentaciu00f3n del citrato. El catabolismo del citrato por parte de las bacterias comprende un mecanismo enzimu00e1tico sin la intervenciu00f3n de la coenzima A. Esta enzima se conoce con el nombre de citricasa (citrato oxalacetato-liasa) o citrato desmolasa. La reacciu00f3n requiere la presencia de un catiu00f3n bivalente, que en ese caso es suministrado por el magnesio. La reacciu00f3n genera oxaloacetato y piruvato, que luego dan origen a u00e1cidos orgu00e1nicos en medio de un pH alcalino formado por la utilizaciu00f3n de la fuente de nitru00f3geno. Estos u00e1cidos orgu00e1nicos son usados como fuente de carbono generando carbonatos y bicarbonatos, alcalinizando au00fan mu00e1s el medio. Modo de sembrado El medio citrato de Simmons debe ser ligeramente inoculado en cola de pescado usando ansa recta o aguja, e incubarse durante 24-72 horas a 35-37u00b0C. Culminado el tiempo se observan los resultados. Algunos microorganismos pueden requerir hasta 7 du00edas de inoculaciu00f3n. El sembrado se realiza u00fanicamente en la superficie del agar. No hacer punciu00f3n. Interpretaciu00f3n Si el medio queda del color original (verde) y no hay crecimiento visible, la prueba es negativa, pero si el medio cambia a color azul, indica la presencia de productos alcalinos, que es detectado por el indicador de pH. En este caso la prueba es positiva. Esto sucede porque si la bacteria utiliza el carbono del citrato tambiu00e9n es capaz de tomar el nitru00f3geno del fosfato de amonio con el cual libera amonu00edaco, alcalinizando el medio. Por otra parte, si se observa crecimiento de la bacteria en el medio, pero no hay cambio de color, tambiu00e9n la prueba debe considerarse positiva, ya que si hay crecimiento quiere decir que la bacteria fue capaz de utilizar el citrato como fuente de carbono, aunque no haya un cambio del pH en el momento (en ocasiones puede tardar). Si existe duda en la interpretaciu00f3n del color final, se puede comparar con un tubo de citrato no inoculado. Preparaciu00f3n Pesar 24,2 gr del medio deshidratado para un litro de agua. Mezclar y dejar en reposo durante 5 minutos aproximadamente. Terminar de disolver el medio calentando durante 1 o dos minutos, agitando frecuentemente. Servir 4 ml en tubos de ensayo y autoclavar a 121u00b0C durante 15 minutos. Al salir del autoclave, inclinar con ayuda de un soporte de tal manera que el agar se solidifique en forma de pico de flauta con poco taco o fondo y mu00e1s bisel. El pH final del medio citrato es de 6,9 (color verde). Este medio es muy sensible al cambio de pH. A pH 6 o por debajo, el medio se torna color amarillo. Este color no es observado en la prueba con bacterias. Y a pH 7,6 o por encima, el medio cambia a color azul de prusia intenso. Uso El agar citrato de Simmons es usado para la identificaciu00f3n de ciertos microorganismos, en especial los bacilos pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae y otros bacilos no fermentadores de glucosa. No se debe hacer un inoculo bacteriano muy grueso o cargado, pues el mismo puede ocasionar que se desarrolle un color amarillo cobrizo en el lugar del sembrado, sin afectar el resto del medio, pero puede hacer creer que hay crecimiento. Es importante que la prueba del citrato sea la primera en inocularse, para evitar el arrastre de proteu00ednas o carbohidratos de otro medio. La manera de evitar el arrastre de sustancias es quemar bien el asa y tomar nuevo inoculo entre una prueba y otra. Tambiu00e9n se debe tener cuidado al tocar la colonia para realizar el inoculo, pues debe evitarse arrastrar parte del agar del cultivo del cual provienen las bacterias. Referencias 1.tMac Faddin J. (2003). Pruebas bioquu00edmicas para la identificaciu00f3n de bacterias de importancia clu00ednica. 3era ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires. Argentina. 2.tForbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnu00f3stico Microbiolu00f3gico de Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina. 3.tKoneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnu00f3stico Microbiolu00f3gico. 5ta ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina. 4.tLaboratorios BD. BBL Simmons Citrate Agar Slants. 2015. Disponible en: bd.com 5.tLaboratorios Britania. Simmons Citrate Agar. 2015. Disponible en: britanialab.com 6.tLaboratorios Valtek Diagnostic. Agar Citrato de Simmons. 2016. Disponible en: andinamedica.com.
97 views • 8 slides
