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Streptococcus pneumoniae

Streptococcus pneumoniae. Dra. Maria Cristina de Cunto Brandileone Setor de Bactérias Piogênicas e Toxigênicas Seção de Bacteriologia -Instituto Adolfo Lutz - São Paulo. Histórico Diagnósticos Otites Coleta de amostra Identificação Streptococcus pneumoniae

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Presentation Transcript

  1. Streptococcus pneumoniae Dra. Maria Cristina de Cunto BrandileoneSetor de Bactérias Piogênicas e Toxigênicas Seção de Bacteriologia -Instituto Adolfo Lutz - São Paulo

  2. Histórico Diagnósticos Otites Coleta de amostra Identificação Streptococcus pneumoniae fluxograma Identificação Streptococcus pneumoniae Cápsula Polissacarídica Resistência do Pneumococo a Penicilina R a PEN: NCCLS Métodos para Sensibilidade Antimicrobiana de Pneumococo Difusão em disco Cuidados Isolados de liquor Fenótipos de R raros, não reportados ou erro técnico CIM Vigilância Laboratorial do S. pneumoniae R a PEN no Brasil: cepas invasivas Sorotipos Prevalentes de S.pneumoniae Brasil doença invasiva Cobertura estimada potencial da vacina conjugada 7-valente Sorotipos associados a R à PEN índice sair

  3. Histórico sair índice • 1881 • Pasteur, França • Stemberg, EUA • Estudos • transformação genética • antígeno-anticorpo • imunidade celular (fagocitose) • imunidade humoral • vacinas polissacarídicas

  4. História Natural das Infecções de Transmissão Respiratórias sair índice • Colonização de nasofaringe (Portador) • Infecção localizada: • Otite média aguda e sinusite • Pneumonia • Meningites • Abscesso • Infecção “invasiva” • bacteriemia • sepsis

  5. Diagnósticos sair índice Diagnóstico Bacteriológico das Meningites: 1- Bacterioscópico de LCR (Gram) 2- Cultura de LCR em ágar chocolate 3- Cultura de sangue Diagnóstico Bacteriológico das Pneumonias: 1- Cultura de sangue 2- Cultura de LP ou lavado brônquico 3- Bacterioscópico de aspirado traqueal

  6. Diagnósticos sair índice Secreção do Trato Respiratório Inferior 1- Cultura de líquido pleural 2 - Escarro e aspirado traqueal (?) 3 - Lavado brônquico com proteção Diagnóstico das Infecções das Vias Aéreas Superiores: • Secreções

  7. Otites sair índice 1 -Interna Timpanocentesis para casos recorrentes e crônicos S. pneumoniae, H. influenzae, Moraxella catarrhalis, S. aureus, outros 2 -Externa Com swab limpando-se bem o canal externo. P. aeruginosa, outros. Observar contaminantes.

  8. Coleta de amostra ou espécime clínico sair índice A amostra deve representar processo infeccioso evitando-se contaminação Amostra de pouco valor clínico : fonte de contaminação com microbiota - obtenção de super-crescimento. Exemplo de possíveis contaminação: hemocultura, secreção do ouvido médio, sinus nasal, infecção sub- cutânea e feridas Sucesso depende: 1- seleção da amostra 2- coleta com qualidade 3- transporte adequado 4- racional e qualidade no processamento da amostra ex: sub-cultivo da hemocultura obrigatório após 6 –18 horas, 72 hs e final - 7 dias ágar chocolate e MacConckey

  9. Identificação Streptococcus pneumoniae sair índice • Coloração de Gram • Crescimento em agar sangue-carneiro 5%: colônia e hemólise • Ausência da catalase • Sensibilidade a optoquina (5ug) • Solubilidade em sais biliares (2%)

  10. Identificação Streptococcus pneumoniae Isolamento: placa de agar sangue-carneiro 5% (AS) Observação do crescimento: colônias brilhantes, translúcidas ou mucóides alfa-hemolíticas Cultura contaminada: Reisolar colônia em placa AS 18 h 35 0C Exame microscópico da cultura: Coloração de Gram “Diplococo Gram + - DGP” 18 hrs 35 0C Repique em 2 tubos agar Chocolate (Ach) e/ou placa AS 18 h, 35 0C optoquina Suspensão do crescimento em salina: catalase, optoquina e bile-solubilidade (BS) 20 - 24 h, 35 0C Catalase - BS + Optoquina + Catalase - BS + Optoquina - Catalase - BS - Optoquina - Antibiograma e/ou CIM S. grupo viridans S. pneumoniae Manter a cepa e enviar ao IAL com os dados do paciente e da cepa: nome, idade, suspeita clínica, material clínico de isolamento S. pneumoniae: catalase -, DGP, colônias alfa-hemol em AS BS +, optoquina + / - sair índice

  11. Streptococcus pneumoniae sair índice S = 14mm R > 15mm Diplococo Gram positivo13

  12. Cápsula Polissacarídica sair índice Fator de Virulência Inibição da fagocitose Sorotipagem Importância epidemiológica • Vigilância laboratorial • Tipos mais freqüentes • Variáveis: • tempo • região geográfica • grupos etários • diferentes infecções • sorotipos versus R à penicilina

  13. Resistência do Pneumococo a Penicilina sair índice Natureza cromossômica Aquisição transformação / mutação Mecanismo de R alteração “PBPs: PBP 2b” PBPs enzimas envolvidas na síntese da parede bacteriana Característica da R progressiva / aditiva anel beta-lactâmico

  14. Métodos para Sensibilidade Antimicrobiana de Pneumococo sair índice • Difusão em disco: qualitativo; S, RI, RA • CIM microdiluição em caldo: quantitativo; _ ug/ml • CIM E-test: quantitativo; _ug/ml • Técnica: • Meio de cultura • Inóculo • Semeadura • Discos • Incubação • Leitura Cuidados em cada item !!!

  15. R a PEN: NCCLS sair índice Sensibilidade a Pen: CIM <=0,06 ug/ml (S) Infecção pela cepa S pode ser adequadamente tratada com dosagem recomendada do antibiótico. R Intermediária a Pen: CIM >= 0,1-1,0 ug/ml (RI) % de resposta pela infecção com cepa RI pode ser baixa; clinicamente pode ser usada em tecidos que a droga atinge alta concentração ou usada em alta dosagem. R Plena ou Alta R a Pen: CIM >= 2,0 ug/ml (RA) Cepa RA não é inibida pela concentração sistêmica da droga. R Total = RI + RA CLSI/NCCLS, 2005

  16. Difusão em disco sair índice disco de beta-lactâmicos amoxicilin, ampicilina, cefaclor, cefepime, cefotaxime, ceftriaxone, cefuromine, imipenem, meropenem, etc Antibiograma Geral: Oxacilina (A) Eritromicina (A) Sulfa-trimetoprim (A) Clindamicina (B) Vancomicina (B) Levofloxacin (B) Cloranfenicol (B) Tetraciclina (B) Rifampicina (C) !!?? Oxacilina: Triagem – R à Penicilina disco (1ug): S >= 20mm R <=19mm Falso positivo A - inclusão rotina e reportado B – inclusão rotina; reportado qdo A for R C – alternativos ou complementares O – indicação clínica , não rotineiros (ex: cefal. 1o. e 2o.) NCCLS

  17. Cuidados sair índice • 9 discos em placa de 150 mm ou 4 discos em placa de 100 mm • não usar discos vencidos • placa de meio de cultura e discos em temperatura ambiente • 15 minutos o inóculo na bancada antes da semeadura • não mover os discos • leitura da sulfa-trimetoprim : 80% da redução de crescimento Descartar hemólise Sulfa-Trimetoprim – 80% do crescimento ST CO Leitura

  18. Isolados de líquor sair índice Categoria de interpretação CIM (ug/ml): Meningite Outros S I R S I R Penicilina (A) <=0,6 0,1-1,0 >=2,0 <=0,6 0,1-1,0 >=2,0 Cefalosporina 3o.geração (B) <=0,5 1,0 >=2,0 <=1,0 2,0 >=4,0 (cefotaxima / ceftriazona) Antibiograma: Oxacilina 1 ug Eritromicina Vancomicina CLSI, 2005

  19. Isolados de líquor sair índice Isolados de meningite CIM PenCIM Cefalosporina 3o.g Vancomicina Meropenem (?) Não reportar: Cefalosporina 1o.g Clindamicina Fluorquinolonas Macrolídeos Tetraciclina Isolados invasivos outros CIM Pen CIM Cefalosporina 3o.g (critério meningite e não-meningite) Eritromicina Levofloxacin Sulfa-trimetoprim Vancomicina NCCLS

  20. Fenótipos de R raros, não reportados ou erro técnico sair índice • Fenótipos: • R a vancomicina • R a fluorquinolonas • R a penicilina e R a cefalosporina 3o.G. • CIM PEN < CIM cefalosporina 3o.G.: • CIM PEN = S e CIM cefal.= I ou R • Ação: • checar contaminação e qualidade dos insumos • repetir o teste e confirmar o resultado • uso de outro método (E-test) • salvar a cepa e enviar ao lab de referência NCCLS

  21. CIM: E-test para Penicilina e Cefalosporina 3o.G. sair índice Método: igual à difusão em disco ATCC 49619: PEN: 0,25-1,0 (RI) CTX: 0,032-0,125 (S) • Leitura • até o final de crescimento descartando hemólise • considerar a diluição acima qdo em leitura for no intervalo • Usar lupa

  22. Material Clínico (%) LCR 66,0 L.pleural 8,7 Sangue 24,3 outros 1,0 Diagnóstico Clínico (%) Bacteriemia 1,7 Meningite Pneumonia 69,3 19,0 outros invasivos 10,0 (9% ign.) Vigilância Laboratorial do S. pneumoniae Vigilância de Pneumococo no Brasil: 1993-2004 (6.300 cepas) sair índice RR=2 AP=2 MA=3 CE=45 PA=29 1 AM=18 RN=29 22,5 PB=4 PE=535 AL=43 AC=4 5,3 SE=38 GO=318 BA=705 MT=6 57,4 ES=46 MS=4 MG=436 RJ=196 PR=553 SP=2905 14 SC=141 RS=177 Região Geográfica (%)

  23. R a PEN no Brasil: cepas invasivas sair índice % 26,9 27,2 24,9 22,1 22,9 20,7 14,3 15,1 13,6 14,8 12,8 10,2 Ano

  24. Período: 1993-2000 % cepas sorotipos incluídos na vacina 7-val conjugada 19A outros 9V 4 1 6B 18C 3 23F 19F 5 14 6A Sorotipos J Infect Dis 2003; 187:1206-12 Sorotipos Prevalentes de S.pneumoniae Brasil doença invasiva sair índice

  25. Cobertura estimada potencial da vacina conjugada 7-valente sair índice Cepas, % (4, 6A/B, 9V, 14, 18C, 19F, 23F) 90 74 69 70 68 62 54 50 46.7 38.6 37.7 34 31 30 10 > 50 a 7-24 m 6-49 a 0-6 m >2-<6 a Faixa etária pneumonia (X)meningites () J Infect Dis 2003; 187:1206-12

  26. Sorotipos associados a R à PEN sair índice Sorotipo % R 0,1-1,0 ug/ml >2,0 ug/ml Sorotipo % R 0,1-1,0 ug/ml >2,0 ug/ml 14 56,5 31,3 25,2 19A 6,1 6,1 0 6B 15,6 15,6 0 19F 2,6 2,6 0 23F 12,2 11,3 0,8 9V 0,8 0,8 0 • sorotipo associado à alta R • clones de R a Pen * sorotipo não vacinal Sorotipos incluídos na vacina conjugada 7-valente: 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F, 23F, 19F

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